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Biomatik/Cattle Amphiregulin (AREG) ELISA kit, Cat#EKU02318/96 Tests/EKU02318-96 Tests
免费咨询热线
4000-520-616
Format
96-WellPlate
SpeciesReactivity
Bostaurus;Bovine(Cattle)
SampleType
Serum,PlasmaandotherBIOLOGicalfluids..
DetectionRange
31.25-2000pg/mL
Sensitivity
12.8pg/mL
EstimatedTurnaroundTime
7-11businessdays
TargetName
Amphiregulin
TargetSynonyms
AR,CRDGF,SDGF,ColorectumCell-DerivedGrowthFactor,Schwannoma-DerivedGrowthFactor
Precision
Intra-assayPrecision(Precisionwithinanassay):3sampleswithlow,middleandhighlevelAmphiregulinweretested20timesononeplate,respectively.Inter-assayPrecision(Precisionbetweenassays):3sampleswithlow,middleandhighlevelAmphiregulinweretestedon3differentplates,8replicatesineachplate.CV(%)=SD/meanX100;Intra-Assay:CV<10%;inter-assay:><>
DetectionMethod
Colorimetric
AssayTime
3hours
Application
AssayType
Double-antibodySandwich
ShippingCondition
Icepacks
Storage
Shortterm:4°C;Longterm:seemanual.
PrecautionofUse
TheStopSolutionisacidic.Donotallowtocontactskinoreyes.
ExpiryDate
8months
UniProtID
L8IUA9
Specificity
ThisassayhashighsensitivityandexcellentspecificityfordetectionofAmphiregulin
CrossActivity
Nosignificantcross-reactivityorinterferencebetweenAmphiregulinandanalogueswasobserved.
AssayProcedure
1.Prepareallreagents,samplesandstandards;2.Add100µLstandardorsampletoeachwell.Incubate2hoursat37°C;3.Aspirateandadd100µLpreparedDetectionReagentA.Incubate1hourat37°C;4.Aspirateandwash3times;5.Add100µLpreparedDetectionReagentB.Incubate30minutesat37°C;6.Aspirateandwash5times;7.Add90µLSubstrateSolution.Incubate10-20minutesat37°C;8.Add50µLStopSolution.Readat450nmimmediately.
StABIlity
Thestabilityofkitisdeterminedbythelossrateofactivity.Thelossrateofthiskitislessthan5%withintheexpirationdateunderappropriatestoragecondition.Tominimizeextrainfluenceontheperformance,operationproceduresandlabconditions,especiallyroomtemperature,airhumidity,incubatortemperatureshouldbestrictlycontrolled.Itisalsostronglysuggestedthatthewholeassayisperformedbythesameoperatorfromthebeginningtotheend.
Restrictions
ForResearchUseOnly.Notforuseinvitrodiagnosticprocedures,druguse,orforadmiNISTrationtohumansoranimals.
QualitySystems
ThekitismanufacturedatISO9001andISO13485certifiedfacilities.
QualityAssurance
BiomatikELISAkitsarenottypicallypre-assembledasfinishedproductsduetolimitedshelflife.Beforeshipping,eachkitisassembledandtestedtoensurethatitmeetsspecificationsbeforeshipping.MinorchangesmayoccurtotheDetectionRange,Sensitivity,andPrecision.AllkitsaretestedtoconfirmthattheyfallwithintheirdefinedInter-andIntra-assaycoefficientofvariation.PleasealwaysrefertothehardcopymanualincludedinThekitbeforeexperiment.
ResearchArea
Cytokine,Tumorimmunity
Biomatik—供应生物试剂、免疫、基因、多肽/蛋白、抗体 Biomatik公司成立于2002年，致力于为全球科研工作者供应高质量的分子生物学、免疫学、药物研发等领域产品及服务。供应的产品囊括生物试剂，重组蛋白，ELISA试剂盒，定制基因、多肽及抗体等产品。此外，我们还提供完善的生物制品定制服务，包括基因、多肽/蛋白及抗体等。为研究人员提供zui优的产品和服务是我们赖以成功的保证，因此我们确保我们的产品与服务具有百分百的满意度保证。 Biomatik公司主要产品： 一、生物试剂系列产品：该系列产品含有360多款实验室常用的生化、酶类及PCR试剂，多款产品有不同的纯化级别（Biotechnology、 High Purity、 Ultra Pure、 Certifiable 、ACS 、USP等），这些产品备有存货，可尽快发货到实验室。 二、免疫检测产品系列：（ELISA /CLIA试剂盒）：该产品系列包括7200多款ELISA /CLIA试剂盒，5300多款重组蛋白产品。 三、定制化合成基因：Biomatik在化学合成基因上有着丰富的经验，特别在长复杂基因合成上，可保证在zui短的时间内完成100%精确度的基因合成。 四、定制化多肽合成：Biomatik是高质量多肽合成领域中的佼佼者，所提供的合成产品纯度可从粗提至99%以上纯度（依据客户需要），合成量可从毫克到千克级。 五、定制化重组蛋白产品：Biomatik提供E.coli源重组蛋白产品，优质低价。未得到所要求蛋白全额退款。 六、定制抗体产品：Biomatik在定制抗体上执行着严酷的质量标准，所提供的单/多克隆产品定制服务可在两月内完成。
Biomatik公司于2002年在加拿大成立,是生物试剂一站式购物中心，提供7000多种ELISA试剂盒，5300多种重组蛋白，350多种生物试剂。 特色产品包括定制基因和多肽、以及PCR产品和酶。特色生化试剂包括三羟甲基氨基甲烷（Tris）、琼脂糖、白蛋白、核糖核酸酶A（RNase A0)\蛋白酶 A 和溶菌酶、半乳糖苷等。﹙网址：http://www.biomatik.com ） 日前，毕特博生物公司已成功取得Biomatik的授权和代理，Biomatik的各大产品均可在我司查询订购。 加拿大Biomatik成立于2002年，公司创建伊始就以为全世界的生命科学和药物研发工作者提供高质量的科研用品和服务为奋斗目标。 产品涵盖生化试剂、重组蛋白、ELISA试剂盒、基因定制和多肽合成及蛋白及抗体的定制生产等。 公司之所以能成功，因为我们始终把您的科研需要摆在第一位，为您独一无二的研究项目提供完美的产品和服务。 我们的长远目标是成为您科研道路上中可靠的合作伙伴。 Biomatik为您提供工业领先的创新产品和高效的客户服务。 公司在为您提供高质量的产品，满足您科研需要的同时，也为您节省研究经费，努力创造双赢的局面。 这为我们在业内带来持续不断的竞争力，成长和品牌认可，也是我们所推崇的高质量产品服务带来的回报。
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公司简介
蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗小鼠sCD36单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的sCD36与单抗结合，加入生物素化的抗小鼠sCD36，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 查看更多
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人Leptin单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的Leptin与单抗结合，加入生物素化的抗人Leptin，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与 查看更多
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2018-12-26
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2021-08-07
初步介绍了基于酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay， ELISA) 检测抗体的方法。应用不同的 ELISA，研究者可以定量或定性地检测特殊抗体的活性，或用特定抗体检测抗原。作者：J.E.科利跟等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」 查看更多
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2021-09-23
v:* {behavior:url(#default#VML);}o:* {behavior:url(#default#VML);}w:* {behavior:url(#default#VML);}.shape {behavior:url(#default#VML);}st1:*{behavior:url(#ieoo 查看更多
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采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人b-Defensin单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的b-Defensin与单抗结合，加入生物素化的抗人b-Defensin，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Stre 查看更多
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2018-12-26
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人MIP-3b单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的MIP-3b与单抗结合，加入生物素化的抗人MIP-3b，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与 查看更多
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人TXA2单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的TXA2与单抗结合，加入生物素化的抗人TXA2，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物 查看更多
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人EGR-1单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的EGR-1与单抗结合，加入生物素化的抗人EGR-1，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生 查看更多
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗兔sICAM-1单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的sICAM-1与单抗结合，加入生物素化的抗兔sICAM-1，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 查看更多
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2018-12-26
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大多数人都不知道的酶标法_夹心法ELISA_ELISA试剂盒_试剂盒_蚂...123
liyouqiang6662021-08-11
本人用一重组蛋白（该蛋白存在于人体的血清中）制备了该蛋白的单克隆抗体和多克隆抗体，并且单多克隆抗体都用竞争法证实了可以识别血清中该蛋白的天然形式。
目前，我用该蛋白的鼠源性单抗来包被ELISA板子，5%BSA37度封闭二小时后，洗涤四次后将板子分三个组加入抗原：其中一个组中加入的是我重组的蛋白，另一个组为用其它方法证实含该蛋白的人体内血清，最后一个组加入PBS。37度一小时后洗涤四次后每孔加入我制备的兔源性多抗。37度一小时洗涤六次后我再加入酶标记的抗兔的抗体37度40分钟后洗涤六次后TMB显色。
问题就在我显色后所有的孔都是阳性，其中以抗原为我的重组蛋白组与PBS组OD值最高，两组都可以达到1.8以上，而加入的抗原为人体血清组低，为0.6-1.0不等。
后面我优化条件，封闭液用过5%的脱脂奶粉，2%的BSA，包被的单抗浓度摸了梯度，加入的多抗也摸了梯度，酶标的抗体也摸了梯度。结果都没有改变，连趋势每次都是一样以重组蛋白组与PBS组OD最高。
今天我还试着把抗原换成其它蛋白也做出了强阳性？
请教各位高手，我的ELISA该如何往下面做了啊，是不是我的抗体本身有问题呢？
对了，我包被用的单抗是用GE公司的预装柱纯化的，很纯，在考染中是看不到一条杂带的。
目前，我用该蛋白的鼠源性单抗来包被ELISA板子，5%BSA37度封闭二小时后，洗涤四次后将板子分三个组加入抗原：其中一个组中加入的是我重组的蛋白，另一个组为用其它方法证实含该蛋白的人体内血清，最后一个组加入PBS。37度一小时后洗涤四次后每孔加入我制备的兔源性多抗。37度一小时洗涤六次后我再加入酶标记的抗兔的抗体37度40分钟后洗涤六次后TMB显色。
问题就在我显色后所有的孔都是阳性，其中以抗原为我的重组蛋白组与PBS组OD值最高，两组都可以达到1.8以上，而加入的抗原为人体血清组低，为0.6-1.0不等。
后面我优化条件，封闭液用过5%的脱脂奶粉，2%的BSA，包被的单抗浓度摸了梯度，加入的多抗也摸了梯度，酶标的抗体也摸了梯度。结果都没有改变，连趋势每次都是一样以重组蛋白组与PBS组OD最高。
今天我还试着把抗原换成其它蛋白也做出了强阳性？
请教各位高手，我的ELISA该如何往下面做了啊，是不是我的抗体本身有问题呢？
对了，我包被用的单抗是用GE公司的预装柱纯化的，很纯，在考染中是看不到一条杂带的。
ELISA操作步骤(双抗体夹心法)123
simon_ws2021-07-26
...洗涤分别代表什么实验过程?其主要作用是什么?123
2018-03-14
(1)单抗包被-抗原-酶标二抗-底物显色。本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。(2)单抗包被-抗原-二抗-酶标二抗-底物显色。(改良双抗体夹心法)本法首先是将特异性抗体a包被于固相载体，经洗涤加入含有欲测抗原之待检样品。经孵育洗涤后再加一次未标记的特异性抗体b，而这次加入的抗体b于第一次包被于固相载体上的特异性抗体a对被测抗原来说都是特异性的，但不是用同种动物免疫制备的，否则可出现非特异性反应。经孵育洗涤后，再加酶标记抗b抗体，再经孵育洗涤后加底物显色进行测定。这种方法与双抗体夹心法不同之处是多加了一层抗体。因此，放大的倍数更高，故比双抗体夹心法更加灵敏。同时避免标记特异性抗体，而另一优点是只要标记一种抗抗体，即可达到多种应用。
【讨论】在ELISA试剂盒方面有多年经验,欢迎大家共同讨论在ELISA...123
missoulmate2021-08-10
最近在用夹心法测目的抗体的含量，有很多不解的地方，望各位解答了。
1.标准曲线的标准品是否一定要梯度稀释，为什么？我试过非梯度稀释的，也可以达到线性R2=0.99.
2.我用了CurveExpert做标曲，自动搜索后发现有10种提供的方程，各种形式的，其中一个十分适合我的实验结果（LogisticModel），而其他的感觉又不适合，因为结果常常为负值。这又是为啥捏？
3.实验的酶标仪最大OD值可以测到4，如果我的测量结果在1.3，是否像其他人所说的＞1了就不准确了。
4.利用夹心法进行定量分析是否一定要使用线性方程？
不好意思啊，一下问了这么多问题，最近做了一个月的ELISA，完全摸不清头脑啊。谢谢各位了
1.标准曲线的标准品是否一定要梯度稀释，为什么？我试过非梯度稀释的，也可以达到线性R2=0.99.
2.我用了CurveExpert做标曲，自动搜索后发现有10种提供的方程，各种形式的，其中一个十分适合我的实验结果（LogisticModel），而其他的感觉又不适合，因为结果常常为负值。这又是为啥捏？
3.实验的酶标仪最大OD值可以测到4，如果我的测量结果在1.3，是否像其他人所说的＞1了就不准确了。
4.利用夹心法进行定量分析是否一定要使用线性方程？
不好意思啊，一下问了这么多问题，最近做了一个月的ELISA，完全摸不清头脑啊。谢谢各位了
ELISA中双抗体夹心法与间接法的区别在哪_上海江林生物科技有限公司123
小芯9月6日2482021-08-16
双抗体夹心法：
(1) 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
(2) 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
(3) 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
(4) 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
(5) 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
(6) 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法：
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
(1) 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
(2) 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
(3) 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
(4) 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
(5) 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
(6) 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法：
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
求助双抗夹心法elisa交叉反应问题123
judiezhu2021-07-20
ELISA检测方法包括123
2021-08-22
双抗体夹心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；
2.次日洗涤3次；
3.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；
4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；
6.’最后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；
2.次日洗涤3次；
3.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；
4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；
6.’最后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
双抗原夹心ELISA方法检测艾滋病病毒抗体标准操作规程.doc123
lishan81252021-08-18
双抗原夹心法步骤：
请大家帮帮忙，第一步加完抗原后必须封闭吗
请大家帮帮忙，第一步加完抗原后必须封闭吗
双抗夹心ELISA灵敏度 生物科学 学术科研互动社区123
十妞XNOM2021-08-19
1.加大生物素标记的多抗的用量；
2.加大辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素；
2.加大辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素；
如何选择ELISA试剂？123
希尔德丶2302018-01-17
我觉的也可以用间接法；
如果用双抗体夹心法，第二个抗体可以用多抗，这样保证你的抗原会被结合，多抗可以直接带HRP标记或者可以用HRP标记二抗去和多抗结合。
如果用双抗体夹心法，第二个抗体可以用多抗，这样保证你的抗原会被结合，多抗可以直接带HRP标记或者可以用HRP标记二抗去和多抗结合。
请教,ELISA中的棋盘滴定法,谢谢,急用_问答详情_夹心法ELISA_...123
liuhua2021-07-29
这是我做双抗体夹心ELISA时设计的方案，你可以参考一下。棋盘滴定法选择抗体的最适工作浓度a)用包被缓冲液稀释单克隆抗体，浓度分别为10ug/ml、5.0ug/ml、2.5ug/ml、1.0ug/ml,包被酶标板，每一浓度包被三个纵行，每孔100ul，每孔均作复孔。4℃过夜，PBST洗涤3次；b)5%脱脂奶粉封闭酶标板，37℃孵育1h，洗涤3次；c)在横行包被孔中依次加入空白对照，阴性对照血清，弱阳性抗原液及强阳性抗原液，各100ul,37℃孵育1h，洗涤3次；d)在每一包被浓度的一个纵行中分别加入按1:2000、1：5000、1：10000稀释的多抗，37℃孵育1h，洗涤3次；e)在每一包被浓度的一个纵行中分别加入HRP标记IgG抗体，稀释度先按说明书上的，37℃孵育1h，洗涤3次；f)加TMB底物，37℃避光显色10-15min，用2mol/LH2SO4终止反应，酶标仪450nm读取吸光度（OD）值；g)测得的强阳性抗原液OD值在1.0左右，阴性对照OD值小于0.1的组合为较理想的组合。可根据初步确定的浓度缩小间距,再做进一步棋盘滴定,寻找最佳包被条件。抗体做稀释时最好用同一个原始浓度做倍比稀释，这样可以尽量减少由于加样枪造成的误差及人为误差。
检测抗—HIV双抗夹心法与间接ELISA法比较123
fighting332021-07-21
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