Please note that this kit is also available as an ELISA Kit abx150307.
| Target | 25-Hydroxyvitamin D3 (Calcidiol) |
| Reactivity | General (All species) |
| Tested Applications | CLIA |
| Recommended dilutions | Optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user. |
| Storage | Shipped at 4 °C. Upon receipt, store the kit according to the storage instruction in the kit"s manual. |
| Validity | The validity for this kit is 6 months. |
| Stability | The stability of the kit is determined by the rate of activity loss. The loss rate is less than 5% within the expiration date under appropriate storage conditions. To minimize performance fluctuations, operation procedures and lab conditions should be strictly controlled. It is also strongly suggested that the whole assay is performed by the same user throughout. |
| Test Range | 1.95 ng/ml - 500 ng/ml |
| Sensitivity | < 0.71=""> |
| Standard Form | Lyophilized |
| ELISA Detection | Chemiluminescent |
| ELISA Type | Competitive |
| ELISA Data | Quantitative |
| Sample Type | Serum, plasma and other biological fluids. |
| Availability | Shipped within 5-20 working days. |
| Note | This product is for research use only. The range and sensitivity is subject to change. Please contact us for the latest product information. For accurate results, sample concentrations must be diluted to mid-range of the kit. If you require a specific range, please contact us in advance or write your request in your order comments. Please note that our ELISA and CLIA kits are optimised for detection of native samples, rather than recombinant proteins. We are unable to guarantee detection of recombinant proteins, as they may have different sequences or tertiary structures to the native protein. |
Abbexa是一家致力于为生命科学研究、药物研发及生物技术公司提供优质抗体、蛋白及检测试剂盒等产品的高科技生物技术公司。基于剑桥大学研发技术优势，Abbexa提供包括一抗、二抗、纯化蛋白、ELISA试剂盒、各种酶类及其它多种试剂与研究工具的大量生命科学研究产品。
目前Abbexa的产品涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、纯化蛋白质及生物试剂，此外，为满足研发人员特殊的实验需要，Abbexa还提供抗体/多肽定制服务。严格的质控标准保证了Abbex产品的高性能，如您对产品不满意，Abbexa将直接提供退／换货服务
CLIAKits 化学发光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA) RNAInterferenceProducts RNA干扰试剂 RNA干扰（RNAinterference,RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-strandedRNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。基因沉默，主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录;PTGS是启动了细胞质内靶mRNA序列特异性的降解机制。有时转基因会同时导致TGS和PTGS。 由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，（长度超过三十的dsRNA会引起干扰素毒性）所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗领域。 1. RNAi抑制转座子活性 两方面的证据提示转座子活性的抑制与siRNA有关 ①发现蠕虫mut-7基因参与RNAi并且与转座子的转座抑制有关; ②在果蝇中,参与RNAi的RNA解螺旋酶Spindle-E的突变将导致该基因引起的基因沉默的缺失,同时提高了反转录转座子活性。 2. RNAi抵御病毒感染 在拟南芥中研究转基因引起基因沉默时发现,sgs2/sde1基因突变的拟南芥对病毒的侵染表现出高度的敏感性。 3. RNAi参与异染色质的形成和维持 Hall等研究表明,着丝粒同源重复序列和RNAi组分一起正负调节着异染色质的形成并共同促使异染色质组装成核；Vople等在敲除裂殖酵母(S.pombe)的RNAi途径基因(如Argonaute、Dicer、RDRP)时发现异染色质转录得到的dsRNA可以在RNAi途径的参与下,加工成siRNA,siRNA募集异染色质蛋白1(HP1),然后靶向性引起相应异染色质区域的转基因沉默。 4. RNAi参与机体的发育调控及生理代谢 RNAi只抑制转录后的基因,所以RNAi在生物体发育学研究中具有优势。Chuang等用RNAi技术进一步证实了AG、CLV3、AP1、PAN等已知功能基因在拟南芥花发育过程中的功能。在RNAi过程中形成的RISC复合物可根据不同情况分别利用siRNA或stRNA行使不同的功能,但最终均导致特定基因沉默。 IsotypeControl 同型对照 同型对照（IsotypeControl），使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色。 同型对照 同型对照的主要目的是确定一抗的结合是特异性的，而不是非特异性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用。还可以用来竞争性的结合抗体，与功能阻断抗体发挥同样的功能。 同型对照要与一抗的来源，Ig分型和标记完全一致。 如果一抗是多抗，可以用annormalserum（与一抗相同的正常血清）（mustbethesamespeciesasprimaryantibody）。Thiscontroliseasytoachieveandcanbeusedroutinelyinimmunohistochemicalstaining.这个可以咨询试剂商。同型对照为免疫荧光标记中的阴性对照。由于荧光标记单抗的组来源不同，应选用相同来源的未标记单抗作为同型对照来调整背景染色。举个例子：比如检测一抗为单抗的mouseantiratCD11b，cloneOX-42purifiedIgG，那么它的isotype是mouseIgG2a，所以可以用purified（纯化的）mouseIgG2a来做OX-42的同型对照（IsotypeControl）。一般的的生物技术公司和国内的代理都有出售。 同型对照：是指与MoAb相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亚类，若使用直接免疫荧光染色法，同型对照也应标记荧光色素，如IgG1FITC、IgG2a、PE等。主要考虑了细胞的自发荧光、FC受体介导的抗体结合和非特异性抗体结合等影响因素。此外，同型对照与MoAb所标记的荧光色素、浓度、F：P比值（标记的荧光色素与免疫球蛋白分子的比值）应该相同为最佳，这对准确设定阴性与阳性细胞的界标有重要意义，切忌使用与MoAb不相匹配的同型对照，最好为同一实验室、采用相同工艺或方法制备（如同一品牌）的产品。
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
目前，我用该蛋白的鼠源性单抗来包被ELISA板子，5%BSA37度封闭二小时后，洗涤四次后将板子分三个组加入抗原：其中一个组中加入的是我重组的蛋白，另一个组为用其它方法证实含该蛋白的人体内血清，最后一个组加入PBS。37度一小时后洗涤四次后每孔加入我制备的兔源性多抗。37度一小时洗涤六次后我再加入酶标记的抗兔的抗体37度40分钟后洗涤六次后TMB显色。
问题就在我显色后所有的孔都是阳性，其中以抗原为我的重组蛋白组与PBS组OD值最高，两组都可以达到1.8以上，而加入的抗原为人体血清组低，为0.6-1.0不等。
后面我优化条件，封闭液用过5%的脱脂奶粉，2%的BSA，包被的单抗浓度摸了梯度，加入的多抗也摸了梯度，酶标的抗体也摸了梯度。结果都没有改变，连趋势每次都是一样以重组蛋白组与PBS组OD最高。
今天我还试着把抗原换成其它蛋白也做出了强阳性？
请教各位高手，我的ELISA该如何往下面做了啊，是不是我的抗体本身有问题呢？
对了，我包被用的单抗是用GE公司的预装柱纯化的，很纯，在考染中是看不到一条杂带的。
1.标准曲线的标准品是否一定要梯度稀释，为什么？我试过非梯度稀释的，也可以达到线性R2=0.99.
2.我用了CurveExpert做标曲，自动搜索后发现有10种提供的方程，各种形式的，其中一个十分适合我的实验结果（LogisticModel），而其他的感觉又不适合，因为结果常常为负值。这又是为啥捏？
3.实验的酶标仪最大OD值可以测到4，如果我的测量结果在1.3，是否像其他人所说的＞1了就不准确了。
4.利用夹心法进行定量分析是否一定要使用线性方程？
不好意思啊，一下问了这么多问题，最近做了一个月的ELISA，完全摸不清头脑啊。谢谢各位了
(1) 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
(2) 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
(3) 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
(4) 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
(5) 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
(6) 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法：
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；
2.次日洗涤3次；
3.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；
4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；
6.’最后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
请大家帮帮忙，第一步加完抗原后必须封闭吗
2.加大辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素；
如果用双抗体夹心法，第二个抗体可以用多抗，这样保证你的抗原会被结合，多抗可以直接带HRP标记或者可以用HRP标记二抗去和多抗结合。
