
SpeciesReactivity | Multispecies(General) |
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Format | 96wellplate |
DetectionRange | 781.25-200000ng/mL |
Sensitivity | 271ng/mL |
SampleType | Serum,plasmaandotherBIOLOGicalfluids |
AssayTime | 2hours |
GeneName | Alpha-Tocopherol |
GeneAliases | VE;VitaminE;α-TCP;α-Tocopherol |
Application | CLIA |
AssayType | Competitive |
DetectionMethod | Chemiluminescent |
ShippingCondition | Blueice |
StorageInstructions | -20°C.Bringallreagentstoroomtemperaturebeforebeginningtest.Thekitmaybestoredat4°Cforimmediateusewithintwodaysuponarrival.Resealanyunusedstripswithdesiccantpack.Minimizefreeze/thawcycles. |
PrecautionOfUse | Donotallowtocontactskinoreyes.Calibrators,controlsandspecimensamplesshouldbeassayedinduplicate.Oncetheprocedurehasbeenstarted,allstepsshouldbecompletedwithoutinterruption. |
ExpiryDate | 8months |
Specificity | ThisassayhashighsensitivityandexcellentspecificityfordetectionofAlpha-Tocopherol(TCPa).Nosignificantcross-reactivityorinterferencebetweenAlpha-Tocopherol(TCPa)andanalogueswasobserved. |
TestPrinciple | Themicroplateprovidedinthiskithasbeenpre-coatedwithamonoclonalantibodyspecifictoAlpha-Tocopherol(TCPa).AcompetitiveinhibitionreactionislaunchedbetweenbiotinlabeledAlpha-Tocopherol(TCPa)andunlabeledAlpha-Tocopherol(TCPa)(Standardsorsamples)withthepre-coatedantibodyspecifictoAlpha-Tocopherol(TCPa).Afterincubationtheunboundconjugateiswashedoff.Next,avidinconjugatedtoHorserADIshPeroxidase(HRP)isaddedtoeachmicroplatewellandincubated.TheamountofboundHRPconjugateisreverseproportionaltotheconcentrationofAlpha-Tocopherol(TCPa)inthesample.ThenthemixtureofsubstrateAandBisaddedtogenerateglowlightemissionkinetics.Uponplatedevelopment,theintensityoftheemittedlightisreverseproportionaltotheAlpha-Tocopherol(TCPa)levelinthesampleorstandard. |
AssayPrecision | Intra-assayPrecision(Precisionwithinanassay):3sampleswithlow,middleandhighlevelAlpha-Tocopherol(TCPa)weretested20timesononeplate,respectively.Inter-assayPrecision(Precisionbetweenassays):3sampleswithlow,middleandhighle |
StABIlity | Thestabilityofkitisdeterminedbythelossrateofactivity.Thelossrateofthiskitislessthan5%withintheexpirationdateunderappropriatestoragecondition.Tominimizeextrainfluenceontheperformance,operationproceduresandlabconditions,especiallyroomtemperature,airhumidity,incubatortemperatureshouldbestrictlycontrolled.Itisalsostronglysuggestedthatthewholeassayisperformedbythesameoperatorfromthebeginningtotheend. |
Restrictions | Forresearchuseonly.Notfordiagnosticprocedures. |
QualitySystems | TheKitismanufacturedatISO9001andISO13485certifiedfacilities. |
ResearchArea | Metabolicpathway;Nutritionmetabolism; |
Biomatik—供应生物试剂、免疫、基因、多肽/蛋白、抗体 Biomatik公司成立于2002年,致力于为全球科研工作者供应高质量的分子生物学、免疫学、药物研发等领域产品及服务。供应的产品囊括生物试剂,重组蛋白,ELISA试剂盒,定制基因、多肽及抗体等产品。此外,我们还提供完善的生物制品定制服务,包括基因、多肽/蛋白及抗体等。为研究人员提供zui优的产品和服务是我们赖以成功的保证,因此我们确保我们的产品与服务具有百分百的满意度保证。 Biomatik公司主要产品: 一、生物试剂系列产品:该系列产品含有360多款实验室常用的生化、酶类及PCR试剂,多款产品有不同的纯化级别(Biotechnology、 High Purity、 Ultra Pure、 Certifiable 、ACS 、USP等),这些产品备有存货,可尽快发货到实验室。 二、免疫检测产品系列:(ELISA /CLIA试剂盒):该产品系列包括7200多款ELISA /CLIA试剂盒,5300多款重组蛋白产品。 三、定制化合成基因:Biomatik在化学合成基因上有着丰富的经验,特别在长复杂基因合成上,可保证在zui短的时间内完成100%精确度的基因合成。 四、定制化多肽合成:Biomatik是高质量多肽合成领域中的佼佼者,所提供的合成产品纯度可从粗提至99%以上纯度(依据客户需要),合成量可从毫克到千克级。 五、定制化重组蛋白产品:Biomatik提供E.coli源重组蛋白产品,优质低价。未得到所要求蛋白全额退款。 六、定制抗体产品:Biomatik在定制抗体上执行着严酷的质量标准,所提供的单/多克隆产品定制服务可在两月内完成。
Biomatik公司于2002年在加拿大成立,是生物试剂一站式购物中心,提供7000多种ELISA试剂盒,5300多种重组蛋白,350多种生物试剂。 特色产品包括定制基因和多肽、以及PCR产品和酶。特色生化试剂包括三羟甲基氨基甲烷(Tris)、琼脂糖、白蛋白、核糖核酸酶A(RNase A0)\蛋白酶 A 和溶菌酶、半乳糖苷等。﹙网址:http://www.biomatik.com ) 日前,毕特博生物公司已成功取得Biomatik的授权和代理,Biomatik的各大产品均可在我司查询订购。 加拿大Biomatik成立于2002年,公司创建伊始就以为全世界的生命科学和药物研发工作者提供高质量的科研用品和服务为奋斗目标。 产品涵盖生化试剂、重组蛋白、ELISA试剂盒、基因定制和多肽合成及蛋白及抗体的定制生产等。 公司之所以能成功,因为我们始终把您的科研需要摆在第一位,为您独一无二的研究项目提供完美的产品和服务。 我们的长远目标是成为您科研道路上中可靠的合作伙伴。 Biomatik为您提供工业领先的创新产品和高效的客户服务。 公司在为您提供高质量的产品,满足您科研需要的同时,也为您节省研究经费,努力创造双赢的局面。 这为我们在业内带来持续不断的竞争力,成长和品牌认可,也是我们所推崇的高质量产品服务带来的回报。
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ELISA双抗体夹心法(enzyme linked immunosorbent assay——sandwich technique)的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体,然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物,洗涤后再加酶标记抗体,与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物,加底物显色,判断抗原含量。
生物帮有相关介绍。编码RNA http://doc.bio1000.com/show-3399.html
2、封闭液肯定不好
3、显色时用封口膜盖好
1、重复性不好;
2、收自身抗体、嗜异性抗体等干扰,易出现假阳性;
3、不论仪器和手工操作,干扰因素较多。影响最大的是温度和时间。1、直接法(direct ELISA)将抗原直接固定在固相载体上,参加酶符号的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。优势:操作手续简略,因无须运用二抗可防止交互反响。缺陷:实验中的一抗都得用酶符号,但不是每种抗体都适合做符号,费用相对进步。2.间接法(indirect ELISA)此测定办法与直接法相似,不一样在于一级抗体没有酶符号,改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。优势:二抗能够加强信号,并且有多种挑选能做不一样的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它最多的免疫反响性。缺陷:交互反响发作的机率较高。3.双抗体夹心法(sandwich ELISA)被检测的抗原包被在两个抗体之间,其间一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量;或不符号,再透过酶符号的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要当心选择,才可防止交互反响或竞争一样的抗原联系部位。优势:高活络、高专一性,抗原无须事前纯化。缺陷:抗原必定得具有两个以上的抗体联系部位。4.竞争法(competitive ELISA)样本里的抗原(自在抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一同竞争一样的抗体,当样品里的自在抗原越多,就能够联系越多的抗体,而固定抗原就只能联系到较少的抗体,反之亦然。经清洁过程,洗去自在抗原和抗体的复合物,只留下固定抗原和抗体的复合物,拿来与只要固定抗原的对照组成果相比拟,依据呈色区别就可计算出样品里的抗原含量。优势:可适用比拟不纯的样本,并且数据再现性很高。缺陷:全体的敏感性和专一性都较差。本数据来源于百度地图,最终结果以百度地图最新数据为准。
目前,我用该蛋白的鼠源性单抗来包被ELISA板子,5%BSA37度封闭二小时后,洗涤四次后将板子分三个组加入抗原:其中一个组中加入的是我重组的蛋白,另一个组为用其它方法证实含该蛋白的人体内血清,最后一个组加入PBS。37度一小时后洗涤四次后每孔加入我制备的兔源性多抗。37度一小时洗涤六次后我再加入酶标记的抗兔的抗体37度40分钟后洗涤六次后TMB显色。
问题就在我显色后所有的孔都是阳性,其中以抗原为我的重组蛋白组与PBS组OD值最高,两组都可以达到1.8以上,而加入的抗原为人体血清组低,为0.6-1.0不等。
后面我优化条件,封闭液用过5%的脱脂奶粉,2%的BSA,包被的单抗浓度摸了梯度,加入的多抗也摸了梯度,酶标的抗体也摸了梯度。结果都没有改变,连趋势每次都是一样以重组蛋白组与PBS组OD最高。
今天我还试着把抗原换成其它蛋白也做出了强阳性?
请教各位高手,我的ELISA该如何往下面做了啊,是不是我的抗体本身有问题呢?
对了,我包被用的单抗是用GE公司的预装柱纯化的,很纯,在考染中是看不到一条杂带的。
(1) 包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
(2) 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
(3) 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
(4) 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
(5) 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
(6) 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
间接法:
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
(一)双抗体夹心法
(二)间接法
(三)竞争法
(四)双位点一步法
(五)捕获法测IgM抗体
(六)应用亲和素和生物素的ELISA

