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Everest Biotech/Human A2M/alpha2-Macroglobulin ELISA Kit 1 plate/2904170015/1 plate
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4000-520-616
ForquantitativedetectionofhumanA2Mincellculturesupernates,serumandplasma(heparin,EDTA).
TypicalDataObtainedfromHumanA2M
(TMBreactionincubateat37°Cfor20min)
Concentration(pg/ml) | 0.0 | 625 | 1,250 | 2,500 | 5,000 | 10,000 | 20,000 | 40,000 |
O.D | 0.034 | 0.090 | 0.146 | 0.249 | 0.497 | 0.931 | 1.489 | 2.095 |
TypicalHumanA2MELISAKitStandardCurve
ThisstandardcurvewasgeneratedatEtonfordemonstrationpurposeonly.Astandardcurvemustberunwitheachassay.
Range625pg/ml-40,000pg/ml
Sensitivity<20pg/ml
SpecificityNaturalhumanA2M
Cross-reactivityNodetectablecross-reactivitywithotherrelevantproteins
Storage
Storeat4°Cfor6months,at-20°Cfor12months.Avoidmultiplefreeze-thawcycles(Shippedwithwetice.)Precision
Intra-AssayPrecision(Precisionwithinanassay)Threesamplesofknownconcentrationweretestedononeplatetoassessintra-assayprecision.
Inter-AssayPrecision(Precisionbetweenassays)Threesamplesofknownconcentrationweretestedinseparateassaystoassessinter-assayprecision.
Intra-AssayPrecision | Inter-AssayPrecision | |||||
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 16 | 16 | 16 | 24 | 24 | 24 |
Mean(ng/ml) | 6.18 | 12.04 | 25.21 | 6.72 | 13.68 | 26.81 |
Standarddeviation | 0.377 | 0.771 | 0.174 | 0.457 | 0.985 | 2.12 |
CV(%) | 6.1 | 6.4 | 6.9 | 6.8 | 7.2 | 7.9 |
Principle
Eton’shumanA2MELISAKitwasbasedonstandardsandwichenzyme-linkedimmune-sorbentassaytechnology.AmonoclonalantibodyfrommousespecificforA2Mhasbeenprecoatedonto96-wellplates.Standards(fromhumanplasma)andtestsamplesareaddedtothewells,abiotinylateddetectionpolyclonalantibodyfromgoatspecificforA2MisaddedsubsequentlyandthenfollowedbywashingwithPBSorTBSbuffer.Avidin-Biotin-PeroxidaseComplexwasaddedandunboundconjugateswerewashedawaywithPBSorTBSbuffer.HRPsubstrateTMBwasusedtovisualizeHRPenzymaticreaction.TMBwascatalyzedbyHRPtoproduceabluecolorproductthatchangedintoyellowafteraddingacidicstopsolution.ThedensityofyellowisproportionaltothehumanA2Mamountofsamplecapturedinplate.KitComponents
Description | Quantity |
96-wellplateprecoatedwithanti-humanA2Mantibody | 1 |
LyophilizedhumanA2Mstandard | 40ng/tube×2 |
Biotinylatedanti-humanA2Mantibody | 130μl(dilution1:100) |
Avidin-Biotin-PeroxidaseComplex(ABC) | 130μl(dilution1:100) |
Samplediluentbuffer | 30ml |
Antibodydiluentbuffer | 12ml |
ABCdiluentbuffer | 12ml |
TMBcolordevelopingagent | 10ml |
TMBstopsolution | 10ml |
MaterialRequiredButNotProvided
1.Microplatereaderinstandardsize.
2.Automatedplatewasher.
3.AdjustablePipettesandpipettetips.Multichannelpipettesarerecommendedintheconditionoflargeamountofsamplesinthedetection.
4.CleantubesandEppendorftubes.
5.Washingbuffer(neutralPBSorTBS).
Preparationof0.01MTBS:Add1.2gTris,8.5gNacl;450μlofpurifiedaceticacidor700μlofconcentratedhydrochloricacidto1000mlH2OandadjustpHto7.2-7.6.Finally,adjustthetotalvolumeto1L.
Preparationof0.01MPBS:Add8.5gsodiumchloride,1.4gNa2HPO4and0.2gNaH2PO4to1000mldistilledwaterandadjustpHto7.2-7.6.Finally,adjustthetotalvolumeto1L.NoticeforApplicationofKit
1.Toinspectthevalidityofexperimentoperationandtheappropriatenessofsampledilutionproportion,pilotexperimentusingstandardsandasmallnumberofsamplesisrecommended.
2.TheTMBColorDevelopingagentiscolorlessandtransparentbeforeusing,contactusfreelyifitisnotthecase.
3.BeforeusingtheKit,spintubesandbringdownallcomponentstothebottomoftubes.
4.Duplicatewellassayisrecommendedforbothstandardandsampletesting.
5.Don’tlet96-wellplatedry,fordryplatewillinactivateactivecomponentsonplate.
6.Don’treusetipsandtubestoavoidcrosscontamination.
7.Avoidusingthereagentsfromdifferentbatchestogether.
8.Inordertoavoidmarginaleffectofplateincubationduetotemperaturedifference(reactionmaybestrongerinthemarginalwells),itissuggestedthatthedilutedABCandTMBsolutionwillbepre-warmedin37℃for30minbeforeusing.
Preparation
1.SamplePreparationandStorage
Storesamplestobeassayedwithin24hoursat2-8°C.Forlong-termstorage,aliquotandfreezesamplesat-20°C.Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.
Cellculturesupernates:Removeparticulatesbycentrifugation,assayimmediatelyoraliquotandstoresamplesat
-20°C.
Serum:Allowtheserumtoclotinaserumseparatortube(about4hours)atroomtemperature.Centrifugeatapproximately1000Xgfor15min.Analyzetheserumimmediatelyoraliquotandstorefrozenat-70°C.
Plasma:CollectplasmausingheparinorEDTAasananticoagulant.Centrifugefor15minat1000xgwithin30minofcollection.Analyzeimmediatelyoraliquotandstorefrozenat-70°C.Citrateisnotrecommendedastheanticoagulant.
2.SampleDilutionGuideline
Theuserneedstoestimatetheconcentrationofthetargetproteininthesampleandselectaproperdilutionfactorsothatthedilutedtargetproteinconcentrationfallsnearthemiddleofthelinearregimeinthestandardcurve.Dilutethesampleusingtheprovideddiluentbuffer.Thefollowingisaguidelineforsampledilution.Severaltrialsmaybenecessaryinpractice.Thesamplemustbewellmixedwiththediluentsbuffer.
Hightargetproteinconcentration(400-4000ng/ml).Theworkingdilutionis1:100.i.e.Add3μlsampleinto297μlsamplediluentbuffer.
Mediumtargetproteinconcentration(40-400ng/ml).Theworkingdilutionis1:10.i.e.Add25μlsampleinto225μlsamplediluentbuffer.
Lowtargetproteinconcentration(625-40,000pg/ml).Theworkingdilutionis1:2.i.e.Add100μlsampleto100μlsamplediluentbuffer.
VeryLowtargetproteinconcentration(≤625pg/ml).Nodilutionnecessary,ortheworkingdilutionis1:2.
3.ReagentPreparationandStorage
A.ReconstitutionofthehumanA2Mstandard:A2Mstandardsolutionshouldbepreparednomorethan2hourspriortotheexperiment.TwotubesofA2Mstandard(40ngpertube)areincludedineachkit.Useonetubeforeachexperiment.
a.40,000pg/mlofhumanA2Mstandardsolution:Add1mlsamplediluentbufferintoonetube,keepthetubeatroomtemperaturefor10minandmixthoroughly.
b.20,000pg/ml→625pg/mlofhumanA2Mstandardsolutions:Label6Eppendorftubeswith20,000pg/ml,10,000pg/ml,5,000pg/ml,2,500pg/ml,1,250pg/ml,625pg/mlrespectively.Aliquot0.3m
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗兔FGF-basic单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的FGF-basic与单抗结合，加入生物素化的抗兔FGF-basic，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Strepta 查看更多
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2018-12-26
st1:*{behavior:url(#ieooui) } /* Style Definitions */ table.MsoNormalTable{mso-style-name:普通表格;mso-tstyle-rowband-size:0;mso-tstyle-colband-size:0;mso-style-no 查看更多
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人MIP-3b单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的MIP-3b与单抗结合，加入生物素化的抗人MIP-3b，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与 查看更多
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人TSLP单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的TSLP与单抗结合，加入生物素化的抗人TSLP，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物 查看更多
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2018-12-26
st1:*{behavior:url(#ieooui) } /* Style Definitions */ table.MsoNormalTable{mso-style-name:普通表格;mso-tstyle-rowband-size:0;mso-tstyle-colband-size:0;mso-style-no 查看更多
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人CML单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的CML与单抗结合，加入生物素化的抗人CML，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素 查看更多
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人NF-kBp65单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的NF-kBp65与单抗结合，加入生物素化的抗人NF-kBp65，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavid 查看更多
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人TM（Thrombomodulin）单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的TM与单抗结合，加入生物素化的抗人TM，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptav 查看更多
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人nAChR单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的nAChR与单抗结合，加入生物素化的抗人nAChR，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生 查看更多
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2018-12-26
st1:*{behavior:url(#ieooui) } /* Style Definitions */ table.MsoNormalTable{mso-style-name:普通表格;mso-tstyle-rowband-size:0;mso-tstyle-colband-size:0;mso-style-no 查看更多
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人TXA2单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的TXA2与单抗结合，加入生物素化的抗人TXA2，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物 查看更多
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗兔sICAM-1单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的sICAM-1与单抗结合，加入生物素化的抗兔sICAM-1，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 查看更多
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商品咨询
ELISA中双抗体夹心法与间接法的区别在哪_上海江林生物科技有限公司123
小芯9月6日2482021-08-16
双抗体夹心法：
(1) 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
(2) 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
(3) 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
(4) 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
(5) 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
(6) 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法：
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
(1) 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
(2) 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
(3) 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
(4) 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
(5) 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
(6) 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法：
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
【求助】ELISA实验OD值偏低,标准品的OD值比说明书要低一半,几乎...123
fighting332021-08-06
夹心法ELISA的阴性对照,空白对照有何意义 123
斑竹威武1252021-07-31
阴性值一般比较接近空白值，设置阴性对照，主要还是排除所加样品里有没有其他物质对实验干扰引起显色，导致所测值偏高本数据来源于百度地图，最终结果以百度地图最新数据为准。
elisa结果阴性值偏高怎么回事123
黄昏84b2021-08-02
1、包被物和二抗的浓度需要在试试
2、封闭液肯定不好
3、显色时用封口膜盖好
2、封闭液肯定不好
3、显色时用封口膜盖好
双抗原夹心ELISA方法检测艾滋病病毒抗体标准操作规程.doc123
lishan81252021-08-18
双抗原夹心法步骤：
请大家帮帮忙，第一步加完抗原后必须封闭吗
请大家帮帮忙，第一步加完抗原后必须封闭吗
用ELISA双抗体夹心法检测抗原A时,固相载体的包被物是 A.酶标记A...123
阳阳嘻嘻嘻嘻2018-03-17
你是想说固相载体的包被物吧，一般双抗体夹心，固相载体包被物是待检抗原相对应的抗体。
使用ELISAcalc软件 绘制标准曲线以及批量计算样品浓度的教程_百度文 ...123
saras2021-08-25
请教各位大神：
我现在用商品化的试剂盒进行夹心法ELISA测定某抗体的浓度，盒子给定了4个标准品，标准品抗体浓度为70000~1000单位，测定步骤中要求对样品进行1:1000稀释后测定。
但是有的样本按照1:1000稀释后，最终OD值大于70000浓度的标准品的OD值，然后使用ELISACALC软件进行四参数拟合，超过了标准曲线的范围，就算不出来这个样品的浓度，但是如果在1000-70000之间的OD值就可以算出相应浓度。请教大神们，接下来我是否可以对样品进行1:2000,1:4000浓度稀释，算出结果后再×2、×4，算作此样品的浓度呢？还是直接给一个＞70000的定性结果？或者可以有能算出来的其他软件？
Ps试剂盒中提及Dilutionlinearity（稀释线性？）为141%，这个是什么意思呢？
多谢！！
我现在用商品化的试剂盒进行夹心法ELISA测定某抗体的浓度，盒子给定了4个标准品，标准品抗体浓度为70000~1000单位，测定步骤中要求对样品进行1:1000稀释后测定。
但是有的样本按照1:1000稀释后，最终OD值大于70000浓度的标准品的OD值，然后使用ELISACALC软件进行四参数拟合，超过了标准曲线的范围，就算不出来这个样品的浓度，但是如果在1000-70000之间的OD值就可以算出相应浓度。请教大神们，接下来我是否可以对样品进行1:2000,1:4000浓度稀释，算出结果后再×2、×4，算作此样品的浓度呢？还是直接给一个＞70000的定性结果？或者可以有能算出来的其他软件？
Ps试剂盒中提及Dilutionlinearity（稀释线性？）为141%，这个是什么意思呢？
多谢！！
ELISA双抗体夹心法 实验方法 123
gaochangjian72021-08-20
http://wenku.baidu.com/view/9b2aea155f0e7cd184253638.html
双抗夹心ELISA灵敏度 生物科学 学术科研互动社区123
十妞XNOM2021-08-19
1.加大生物素标记的多抗的用量；
2.加大辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素；
2.加大辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素；
【求助】夹心法ELISA标准曲线是否应该与试剂盒里提供的一致? ...123
memesasa2021-08-15
elisa双抗体夹心法测afp的目的和原理? 123
2021-08-17
请问采用ELISA 双抗体夹心法测乙肝表面抗原为什么要多次洗涤? ...123
猩捓2021-08-13
冲洗不净，残留的酶结合物会分解底物显色，引起本底太高而出现错误
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