ForquantitativedetectionofhumanBetacellulinincellculturesupernates,serumandplasma(heparin,EDTA).
TypicalDataObtainedfromHumanBetacellulin
(TMBreactionincubateat37°Cfor25min)
Concentration(pg/ml) | 0.0 | 15.6 | 31.2 | 62.5 | 125 | 250 | 500 | 1000 |
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O.D. | 0.073 | 0.086 | 0.112 | 0.179 | 0.285 | 0.540 | 0.961 | 1.650 |
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TypicalHumanBetacellulinELISAKitStandardCurve
ThisstandardcurvewasgeneratedatEtonfordemonstrationpurposeonly.Astandardcurvemustberunwitheachassay.
Sensitivity<10pg/ml
SpecificityNaturalandrecombinanthumanBetacellulin
Cross-reactivityNodetectablecross-reactivitywithotherrelevantproteins
Storage
Storeat4°Cfor6months,at-20°Cfor12months.Avoidmultiplefreeze-thawcycles(Shippedwithwetice.)
Precision
Intra-AssayPrecision(Precisionwithinanassay)Threesamplesofknownconcentrationweretestedononeplatetoassessintra-assayprecision.
Inter-AssayPrecision(Precisionbetweenassays)Threesamplesofknownconcentrationweretestedinseparateassaystoassessinter-assayprecision.
| Intra-AssayPrecision | Inter-AssayPrecision |
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Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
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n | 16 | 16 | 16 | 24 | 24 | 24 |
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Mean(pg/ml) | 46 | 119 | 725 | 47 | 124 | 736 |
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Standarddeviation | 2.35 | 6.31 | 45.68 | 2.73 | 7.69 | 58.14 |
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CV(%) | 5.1 | 5.3 | 6.3 | 5.8 | 6.2 | 7.9 |
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Principle
Eton’shumanBetacellulinELISAKitwasbasedonstandardsandwichenzyme-linkedimmune-sorbentassaytechnology.AmonoclonalantibodyfrommousespecificforBetacellulinhasbeenprecoatedonto96-wellplates.Standards(E.coli,D32-Y111)andtestsamplesareaddedtothewells,abiotinylateddetectionpolyclonalantibodyfromgoatspecificforBetacellulinisaddedsubsequentlyandthenfollowedbywashingwithPBSorTBSbuffer.Avidin-Biotin-PeroxidaseComplexwasaddedandunboundconjugateswerewashedawaywithPBSorTBSbuffer.HRPsubstrateTMBwasusedtovisualizeHRPenzymaticreaction.TMBwascatalyzedbyHRPtoproduceabluecolorproductthatchangedintoyellowafteraddingacidicstopsolution.ThedensityofyellowisproportionaltothehumanBetacellulinamountofsamplecapturedinplate.
KitComponents
Description | Quantity |
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96-wellplateprecoatedwithanti-humanBetacellulinantibody | 1 |
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LyophilizedrecombinanthumanBetacellulinstandard | 10ng/tube×2 |
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Biotinylatedanti-humanBetacellulinantibody | 130μl(dilution1:100) |
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Avidin-Biotin-PeroxidaseComplex(ABC) | 130μl(dilution1:100) |
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Samplediluentbuffer | 30ml |
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Antibodydiluentbuffer | 12ml |
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ABCdiluentbuffer | 12ml |
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TMBcolordevelopingagent |
蚂蚁淘电商平台
ebiomall.com
公司简介
蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗兔FGF-basic单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的FGF-basic与单抗结合，加入生物素化的抗兔FGF-basic，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Strepta
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采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人MIP-3b单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的MIP-3b与单抗结合，加入生物素化的抗人MIP-3b，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与
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采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人TSLP单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的TSLP与单抗结合，加入生物素化的抗人TSLP，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物
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采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人CML单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的CML与单抗结合，加入生物素化的抗人CML，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素
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采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人NF-kBp65单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的NF-kBp65与单抗结合，加入生物素化的抗人NF-kBp65，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavid
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采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人TM（Thrombomodulin）单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的TM与单抗结合，加入生物素化的抗人TM，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptav
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采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人nAChR单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的nAChR与单抗结合，加入生物素化的抗人nAChR，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生
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采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人TXA2单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的TXA2与单抗结合，加入生物素化的抗人TXA2，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物
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采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗兔sICAM-1单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的sICAM-1与单抗结合，加入生物素化的抗兔sICAM-1，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin
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常见问题
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商品咨询
双抗体夹心法：
(1) 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
(2) 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
(3) 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
(4) 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
(5) 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
(6) 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法：
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
不好意思，新手，好多都不懂，我做的ELISA，空白孔OD值高于部分样本，如果做曲线的话，减去空白孔OD值，算出来样本浓度，有好多负值，所以想问一下，是必须要减去空白孔OD值吗？还是只是在做曲线时标准品减去空白孔OD值，求出方程，直接代入样本OD值（样本不减空白孔），还是都不减空白孔？求大神帮忙？
阴性值一般比较接近空白值，设置阴性对照，主要还是排除所加样品里有没有其他物质对实验干扰引起显色，导致所测值偏高本数据来源于百度地图，最终结果以百度地图最新数据为准。
1、包被物和二抗的浓度需要在试试
2、封闭液肯定不好
3、显色时用封口膜盖好
双
抗原夹心法步骤：
请大家帮帮忙，第一步加完抗原后必须封闭吗
你是想说固相载体的包被物吧，一般双抗体夹心，固相载体包被物是待检抗原相对应的抗体。
请教各位大神：
我现在用商品化的
试剂盒进行
夹心法ELISA测定某
抗体的浓度，盒子给定了4个
标准品，标准品抗体浓度为70000~1000单位，测定步骤中要求对样品进行1:1000稀释后测定。
但是有的样本按照1:1000稀释后，最终OD值大于70000浓度的标准品的OD值，然后使用ELISACALC软件进行四参数拟合，超过了标准曲线的范围，就算不出来这个样品的浓度，但是如果在1000-70000之间的OD值就可以算出相应浓度。请教大神们，接下来我是否可以对样品进行1:2000,1:4000浓度稀释，算出结果后再×2、×4，算作此样品的浓度呢？还是直接给一个＞70000的定性结果？或者可以有能算出来的其他软件？
Ps试剂盒中提及Dilutionlinearity（稀释线性？）为141%，这个是什么意思呢？
多谢！！
http://wenku.baidu.com/view/9b2aea155f0e7cd184253638.html
1.加大生物素标记的多抗的用量；
2.加大辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素；
我做的是
血清中IKZF3测定，由于没有现成的
试剂盒，自己从国内的CU
SBIO定制的，分批订货。。前两次的标准曲线形状和公司提供的基本近似。但这一次却差太远。我做出来的近似线性，而公司提供的还是和原来的......
冲洗不净，残留的酶结合物会分解底物显色，引起本底太高而出现错误
