
![]() ![]() | CatalogNo.: K-4000E Description: Echelon'sPI(4)PMassELISAkitisdesignedtodetectandquantifyPI(4)PbymeansofacompetitiveELISAformat,eliminatingtheneedforrADIoactivityandthinlayerchromatography.ThePI(4)PMassELISAdirectlydetectsPI(4)PoverallotherphosphonositidesatrelevantBIOLOGicallevels. AssayRange:50-0.7pmolPI(4)P SampleType:Drieddownlipidextractedfromcells SampleVolume:60μL/sample,singlepoint | ||
ProductBackground:ThePI(4)PMassassayisacompetitiveELISAinwhichthesignalisinverselyproportionaltotheamountofPI(4)Pmeasured.ThePI(4)PextractionsareaddedtothecoloredmixingplatewithPI(4)PGrip.ThismixtureisthentransferredtothePI(4)PDetectionPlateforcompetitivebinding.Aperoxidase-linkedsecondarydetectorandcolorimetricdetectionisusedtodetecttheamountofPI(4)PGripbindingtotheplate.Theassayissensitiveto0.7pmolPI(4)P. StorageThekitcomesintwopartswithdifferentstoragerequirements.UponreceiptstoreKitPart1at4°CandKitPart2at-20°C.Storepreparedreagentsasindicatedintheprotocol.FeaturedinReferences1)S.Choi,etal."AgoNIST-stimulatedphosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphategenerationbyscaffoldedphosphoinositidekinases"NatureCellBiology(2016)18(12),1324-35,doi:10.1038/ncb3441RelatedProductsEchelon'sPIPMassAssaysPIP3MassELISA PI(4,5)P2MassELISA PI(3,4)P2MassELISA PI(3)PMassELISA PIK-93(PI4KIIIbinhibitor) |
美国埃施朗(Echelon)公司在快速发展低碳经济和节约能源的大潮中,以美国埃施朗公司发明的LonWorks控制网络技术为基础的能源管理服务方案被越来越广泛的使用。在世界上有约9000万个内置埃施朗公司的智能网络芯片的终端设备被LonWorks控制网络连接在一起,由智能能源管理控制服务器通过Internet远程监视,控制,诊断和管理,如路灯、电表、执行器、传感器等等。其应用领域涉及楼宇、工厂、交通系统、家庭、公共设施,智能电网,绿色城市等。该能源管理服务方案包括150项专利,已有450多家OEM(原始设备制造商)厂商和90家特许集成商在为该方案提供产品和服务。通过Internet,无论是在办公楼里电梯门的开启和关闭,或者厂房间能源使用数据的采集,埃施朗公司的产品和服务使您在一个网络环境中管理设备。今天,LonWorks控制网络平台已成为全球控制网络技术的公认标准。我们在家庭、列车、半导体制造设备、智能楼宇、加油站、火车制动系统领域的网络系统解决方案,已经被许多世界标准组织采纳作为各自行业的标准,这包括:ISO/IEC对控制网络和楼宇管理规范的国际标准ISO/IEC14908-1,-2,-3和-4、中国控制联网标准GB/Z20177.1,.2,.3和.4、中国商业楼宇和住宅建设的国家标准GB/T20299.4-2006、AAR(美国铁路协会)、ANSI/CEA709.1,.2,.3和ANSI/CEA-852(美国国家标准协会),ASHRAE(美国暖通空调工程师协会),IEEE(电子电气工程师协会),IFSF(美国加油站标准论坛)和SEMI(半导体设备与材料协会)等。埃施朗公司在美国、英国、中国、日本、德国、法国、韩国和荷兰等地设立了办事处,在美洲、亚洲、欧洲各地都有商业伙伴,并为用户提供90多种产品。Echelon公司在NASDAQ股票交易所的交易代码是ELON。埃施朗公司中国代表处于一九九五年底成立,并于2001年初重新组建成埃施朗公司大中华区北京办事处至今,并设立多家代理更好地为广大中国用户提供产品和服务。其间,我们相继成立LonSupport大中华区技术支持中心、大中华区上海联络处、大中华区广州联络处。已经有超过百家中国厂商加入了LonWorks控制网络的OEM行列,从事开发新产品,承接公用事业、工业自动化、楼宇、小区智能化和运输等行业的项目。埃施朗公司将为中国的绿色,低碳,节能,环保的发展进入世界先进水平继续不懈地努力。
EchelonBiosciences成立于1997年10月3日,总部坐落于在美国犹他州。从1997到2004,EBI主要用于政府的补助金以及产品的销售收入来资助其研究工作。2005年初,EBI的依特钠Zentaris购买(NAS:AEZS)的MEP抗感染,PI3激酶小分子程序,目录业务,与科学专业。2007年末,前沿科学公司(FSI)在洛根,犹他州购买了EBI,专业从事卟啉和硼化学。自公司成立以来以来,EBI保留了开发研究试剂脂质新的检测方法。不断开拓**,从而推动药物研究的新发型。
EchelonBiosciences是美国杰出免疫学产品供应商,专业提供各种抗体、分析检测试剂盒、抑制剂等产品,尤其擅长以细胞信号、脂类代谢和标记物研究为主的相关产品。为研究治疗诸如癌症、糖尿病、炎症、感染和心脑血管疾病专家提供**有效工具。
EchelonBiosciences为生命科学社区提供的产品包括:
抗体 分析检测试剂盒
抑制剂 细胞信号产品
脂类代谢 标记物
一笔230万美元的国防部赠款将帮助神经科学家为急诊室和战场开发新的治疗方法。这项研究将集中于开发新的疗法,以帮助保护大脑和其他在创伤、心脏病发作或中风后处于危险中的器官。 罗彻斯特大学医学中心的神经学家MarcHalterman,M.D.,Ph.D该研究的首席研究员说:“虽然我们在中风或心脏骤停后恢复血液流动的能力方面取得了重大进展,但医学界并没有药物来防止这些事件发生后的继发性损害。“这项资助将进一步推进我们对一类既具有抗炎作用又具有细胞保护作用的药物的研究,我们相信这类药物将适用于军事和紧急情况。”该项目是与盐湖城的一个合成抗生素化学家团队合作开发的,该团队由MarkNelson,Ph.D领导,他将担任EchelonBiosciences的副研究员。
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在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体(免疫吸附剂) ②酶标记的抗原或抗体(标记物)③酶作用的底物(显色剂)
测量时,抗原(抗体)先结合在固相载体上,但仍保留其免疫活性,然后加一种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物),此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性,当偶联物与固相载体上的抗原(抗体)反应结合后,再加上酶的相应底物,即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。
其所生成的颜色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察,也可以用分光光度计(酶标仪)加以测定。其方法简单,方便迅速,特异性强。向左转|向右转
第一次:包被抗体浓度为:8ug/ml,4,2,1,0.5,0.25,0为A,B,C,D,E,F,G
血清稀释度为1:100
酶标抗体稀释度为:1:1000,1:5000,1:10000,1:25000为1,2,3,4
结果为:1234
A3.3440.7120.4900.238
B2.7570.5230.3450.176
C2.4280.4550.3100.172
D>4.51.7771.2150.439
E>4.51.3570.7890.424
F1.1090.2540.1720.110
G1.3660.3310.1970.069(空白)从结果可以判断包被抗体浓度1ug/ml最合适
第二次:包被抗体1ug/ml
血清稀释度为1:25,1:50,1:100,1:150,1:200,1:250,1:300,空白为A,B,C,D,E,F,G,H
酶标抗体稀释度为:1:1000,1:5000,1:10000,1:25000为1,2,3,4
结果为:1234
A2.9930.6390.3380.236
B3.0210.7220.3070.191
C2.3360.4960.3080.176
D2.2560.4640.3040.176
E2.0310.4160.2470.139
F1.8300.3360.2310.153
G1.5980.3320.2270.132
空白H0.1580.0780.0720.074
这样的话应该是血清稀释度1:50最合适,酶标抗体稀释度1:1000最合适,但是这样的话OD值为3.021,是不是太大了?OD值是不是在1左右比较好呢?应该选择哪个浓度,哪个稀释度来做正式试验呢?
1.标准曲线的标准品是否一定要梯度稀释,为什么?我试过非梯度稀释的,也可以达到线性R2=0.99.
2.我用了CurveExpert做标曲,自动搜索后发现有10种提供的方程,各种形式的,其中一个十分适合我的实验结果(LogisticModel),而其他的感觉又不适合,因为结果常常为负值。这又是为啥捏?
3.实验的酶标仪最大OD值可以测到4,如果我的测量结果在1.3,是否像其他人所说的>1了就不准确了。
4.利用夹心法进行定量分析是否一定要使用线性方程?
不好意思啊,一下问了这么多问题,最近做了一个月的ELISA,完全摸不清头脑啊。谢谢各位了
ELISA双抗体夹心法(enzyme linked immunosorbent assay——sandwich technique)的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体,然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物,洗涤后再加酶标记抗体,与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物,加底物显色,判断抗原含量。
生物帮有相关介绍。编码RNA http://doc.bio1000.com/show-3399.html
(一)双抗体夹心法
(二)间接法
(三)竞争法
(四)双位点一步法
(五)捕获法测IgM抗体
(六)应用亲和素和生物素的ELISA
我现在用商品化的试剂盒进行夹心法ELISA测定某抗体的浓度,盒子给定了4个标准品,标准品抗体浓度为70000~1000单位,测定步骤中要求对样品进行1:1000稀释后测定。
但是有的样本按照1:1000稀释后,最终OD值大于70000浓度的标准品的OD值,然后使用ELISACALC软件进行四参数拟合,超过了标准曲线的范围,就算不出来这个样品的浓度,但是如果在1000-70000之间的OD值就可以算出相应浓度。请教大神们,接下来我是否可以对样品进行1:2000,1:4000浓度稀释,算出结果后再×2、×4,算作此样品的浓度呢?还是直接给一个>70000的定性结果?或者可以有能算出来的其他软件?
Ps试剂盒中提及Dilutionlinearity(稀释线性?)为141%,这个是什么意思呢?
多谢!!
(2)封闭:将已包被的板用洗涤液洗涤2次,每孔加入120 μL封闭液,封闭一段时间,取出,甩干备用。
(3)竞争反应:在制备好的板中每孔加入50 μL系列浓度的标准品溶液和50 μL稀释好的酶标抗体溶液,孵育一段时间。
(4)洗板:用洗涤液洗涤5次。
(5)显色反应:每孔加入显色溶液100 μL,孵育一段时间。
(6)终止:每孔各加入终止液,在酶标仪上测定各孔的吸光值。
下图为ELISA原理图,夹心法即Sandwich ELISA,竞争法就是Competitive ELISA
向左转|向右转
1、重复性不好;
2、收自身抗体、嗜异性抗体等干扰,易出现假阳性;
3、不论仪器和手工操作,干扰因素较多。影响最大的是温度和时间。1、直接法(direct ELISA)将抗原直接固定在固相载体上,参加酶符号的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。优势:操作手续简略,因无须运用二抗可防止交互反响。缺陷:实验中的一抗都得用酶符号,但不是每种抗体都适合做符号,费用相对进步。2.间接法(indirect ELISA)此测定办法与直接法相似,不一样在于一级抗体没有酶符号,改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。优势:二抗能够加强信号,并且有多种挑选能做不一样的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它最多的免疫反响性。缺陷:交互反响发作的机率较高。3.双抗体夹心法(sandwich ELISA)被检测的抗原包被在两个抗体之间,其间一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量;或不符号,再透过酶符号的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要当心选择,才可防止交互反响或竞争一样的抗原联系部位。优势:高活络、高专一性,抗原无须事前纯化。缺陷:抗原必定得具有两个以上的抗体联系部位。4.竞争法(competitive ELISA)样本里的抗原(自在抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一同竞争一样的抗体,当样品里的自在抗原越多,就能够联系越多的抗体,而固定抗原就只能联系到较少的抗体,反之亦然。经清洁过程,洗去自在抗原和抗体的复合物,只留下固定抗原和抗体的复合物,拿来与只要固定抗原的对照组成果相比拟,依据呈色区别就可计算出样品里的抗原含量。优势:可适用比拟不纯的样本,并且数据再现性很高。缺陷:全体的敏感性和专一性都较差。本数据来源于百度地图,最终结果以百度地图最新数据为准。

