| Kitsize | 12x8 |
| Method | ELISA |
| Incubationtime | 1x2h,1x1h,1x30min. |
| Standardrange | 7,81-125pg/mL |
| Specimen/Volumes | 5µLCSF |
| Substrate/isotope | TMB450nm |
| RegulatoryStatus: | EU:CE |
Overthelast15yearsmeasuringAmyloid–beta(1–42)peptidehasgainedacceptanceasatooltoaidinthediagnosisofAlzheimer´sdisease.Yet,clinicalsensitivityandspecificityusuallyislessthan85%.ThiscanbelargelyattributedtotheGaussiandistributionofAmyloid–betaproductioninthepopulation.Itleadstofalsepositivesinthegroupof"low"Abetaproducersandtofalsenegativesinthegroupof"high"Abetaproducers.NormalizingtheAmyloid–beta(1–42)valuestothemostabundantandstablyproducedAbeta(1–40)isoformovercomesthislimitationandsignificantlyimprovesthediagnosticvaluetowellabove90%.IBLInternationalhassetitsgoaltodevelophighqualityimmunoassaysforconvenientandaccuratemeasurementofAmyloid–beta(1–40)andAmyloid–beta(1–42)inCSFforoptimalratioDeterminationascanbeseenbyexcellentcrossreactivitydataofbothassays(Table1)
| Peptide | Amyloid–beta (1–40)ELISA | Amyloid–beta (1–42)ELISA |
| Amyloid–beta(1–42) | 0,84% | 100% |
| Amyloid–beta(1–40) | 100% | 0,003% |
| Amyloid–beta(1-38) | 0,01% | 0,57% |
| Amyloid–beta(2-40) | 1,29% | 0,02% |
Tabelle1
Kreuzreaktivitäten(bestimmtnachDeshpande,SS(1996))
BothAssaysshowexcellentinter–andintra–assayCVs(Table2)andinter–lotCVs(Table3)profilesduetointernalqualitycontrolstandards.
| Amyloid–beta(1–40)ELISA | Amyloid–beta(1–42)ELISA | |||
| SampleNo. | mean | CV | mean | CV |
| [pg/mL] | [%] | [pg/mL] | [%] | |
| 1 | 4732 | 1.8 | 548 | 3.4 |
| 2 | 9937 | 2.1 | 1023 | 3.0 |
| 3 | 3080 | 4.5 | 849 | 3.0 |
| 4 | 10497 | 1.9 | 951 | 3.1 |
| 5 | 13506 | 2.8 | 1034 | 3.1 |
Table2
Intra–assayCV(n=20)
| Amyloid–beta(1–40)ELISA | Amyloid–beta(1–42)ELISA | |||
| SampleNo. | mean | CV | mean | CV |
| [pg/mL] | [%] | [pg/mL] | [%] | |
| 1 | 2418 | 5.4 | 193 | 4.5 |
| 2 | 3830 | 6.3 | 476 | 7.6 |
| 3 | 19407 | 4.1 | 661 | 6.9 |
| 4 | 13164 | 5.8 | 728 | 4.7 |
| 5 | 9405 | 2.7 | 873 | 7.4 |
Table3
Inter–lotand–operatorCV(n=10,3lots,3-4operators)
MethodcomparisonwithcommerciallyavailableAmyloid–beta(1–40)ELISA:R2=0.944
MethodcomparisonforthedetectionofAmyloid–beta(1–40)in119nativeCSFSamples
MethodcomparisonwithcommerciallyavailableAmyloid–beta(1–42)ELISA:R2=0.9492
MethodcomparisonforthedetectionofAmyloid–beta(1–42)in120nativeCSFSamples
Toclinicallyvalidatetheassaysanexternalstudywasdoneatthe"KlinikundPoliklinikfürPsychiatrieundPsychotherapie,KlinikumrechtsderIsarderTechnischenUniversitätMünchen,München,Germany"withoverall83clinicallyknownsamples.Theratioofbothassayvaluesshowshighclinicalsensitivityandspecificity
Amyloid–beta(1–42)⁄Amyloid–beta(1–40)ratiosuperiortoAmyloid–beta(1–42)alone
| Ratio:Amyloid–beta(1–42) ⁄Amyloid–beta(1–40) | |||
| AD | control | ||
| Diagnosis | AD | 39 | 1 |
| control | 4 | 39 | |
SimilarresultswereobtainedbyProf.Dr.med.PiotrLewczuk,LabforClinicalNeuRochemistryandNeurochemicalDementiaDiagnostics,UniversitätsklinikumErlangen,DepartmentofPsychiatryandPsychotherapy,Erlangen,Germany.(tobepublishedsoon)
ExcerptfromtheInstructionsforUse
In2010,thenumberofdementiapatientsworldwidewasestimatedat36million.Assuminganongoinglackofsufficientpreventiveandcurativetreatments,thisisexpectedtodoubleevery20years.Alzheimer’sDiseaseaccountsforroughly60-70%ofalldementiacases.Bothprevalenceandincidenceincreasewithage.Prevalenceisaround1%inthoseaged65-69,andmorethan30%inthoseaged90orolder.
ThedevelopmentoftheDiseaseischaracterizedbythreestages,asdefinedbytheUSNationalInstituteonAgingworkgroups.ApreclinicalstageofAlzheimer’sDisease,themildcognitiveimpairment(MCI)stageduetoAD,andthedementiastageduetoAD[9-11].Amyloidosisoccursasearlyasthepreclinicalstage.ThefirstcognitivedeficitscanmanifestthemselvesinMCIstage,whileinthedementiastagepatientsareunabletodoanyworkordailychores.
Theconcentrationofamyloid-beta(1-42)isthereforerecognizedasausefulbioMarker(incombinationwithotherbiomarkerssuchasTauandPhospho-Tau)indiagnosingAlzheimer’sDisease.Moreover,anumberofindependentstudies(forexample[3-5])showedtheratioofamyloid-beta(1-42)toamyloid-beta(1-40)tobeasuperiordiagnosticmarkerforAlzheimer’sDisease.
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
1. 直接法测定抗原 2．间接法测定抗体 3．双抗体夹心法测定抗原4. 竞争法测定抗原 厚百生物专业提供各类生化实验试剂、仪器、耗材，提供技术服务，满足您的实验室常规采购需求。厚百，让您更省心！
(1) 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
(2) 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
(3) 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
(4) 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
(5) 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
(6) 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法：
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
表面抗体是双抗原夹心法
E抗体和核心抗体是竞争抑制法或间接法
1. 包被：用0.05M PH9，碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml，在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml，37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
方法二：用于检测未知抗体的间接法：
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时，洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml，37℃孵育30～60分钟，洗涤，最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
