| Kitsize | 12x8 |
| Method | ELISA |
| Incubationtime | 1x60min,1x30min,1x20min,1x15-20min |
| Standardrange | 10-1000ng/mL |
| Specimen/Volumes | Urine |
| Substrate/isotope | TMB450nm |
| RegulatoryStatus: | EU:CE |
TheonlycommerciallyavailableELISAassay
IBLInternationalprovidesareliableandfastimmunoassayforthedeterminationofthemainmetaboliteofhistamine,1-methylhistamine(N-methylhistamine),invariousBIOLOGicalfluids.
Extensiveresearchhasshownthathistamine[2-(4-imidazolyl)-ethylamine]istheprinciplemediatorofmultiplebiologicalprocessesincludingneuromodulation,inflammation,gastricacidsecretionandtheregulationofimmunefunction.Itismainlystoredinthemetachromaticgranulaofmastcellsandthebasophilicleukocytes,andreleaseduponstimulation.
HistamineispredominantlymetabolizedviaN-methytransfereseto1-methylhistamine,whichisfurtherprocessedtoN-methylimidazoleaceticacid,whiletheremainderismetabolizedbydiamineoxidasetoimidazoleaceticacid(Fig.1).Theurinary1-methylhistaminelevelcorrelateswellwiththehistaminelevelsinplasmaandurine(1,2),andismorestablethanhistamineinplasma.
Thedeterminationofurinary1-methylhistaminefindsitapplicationprimarilyinthediagnosisandmonitoringofmast-celldisorders,includingmastocytosis,anaphylaxis,andotherseveresystemicallergicreactions.
Uniquefeatures
- TheonlycommerciallyavailableELISA
- Sensitivity:urine:2.5ng/mL,plasmaandcellculture:0.13ng/mL
- CalibratedtoLC-MS/MS(Fig.2)
- Totalassaytimeisonly2hours
- Alsoapplicableforplasmaandcellculturesamples
Histaminemetabolism.Synthesisofhistamineviadecarboxylationofhistidine(1).Metabolismofhistamineeitherbydiamineoxidase(DAO)(2)orbyhistamine-N-methyltransferase(HNMT)(3).Negativefeedbackinhibitionofbothenzymesbytheirrespectiveproducts(4).FurtherprocessingofN-MethylhistaminebymonoamineoxidaseB(MAOB)(5)orbyDAO(6).3)
MethodcomparisonbetweentheIBLInternational1-methylhistamineELISAandLC-MS/MSshowsanexcellentcorrelation:IBLInternationalinternaldata.)
Literature
1.HermannK.etal.Measurementandcharacterizationofhistamineandmethylhistamineinhumanurineunderhistamine-richandhistamine-poordiets.IntArchAllergyImmunol.1993;101(1):13-9.
2.BelicA.etal.Interdependenceofhistamineandmethylhistaminekinetics:modellingandsimulationapproach.ComputBiolMed.1999Nov;29(6):361-75.
3.MaintzL.etal.Histamineandhistamineintolerance.AmJClinNutr2007;85:1185–96.
DistributedbyIBLInternational.ForconcretedatapleaseconsulttheInstructionforUseinthedownloadboxontherightside.
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1. 直接法测定抗原 2．间接法测定抗体 3．双抗体夹心法测定抗原4. 竞争法测定抗原 厚百生物专业提供各类生化实验试剂、仪器、耗材，提供技术服务，满足您的实验室常规采购需求。厚百，让您更省心！
(1) 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
(2) 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
(3) 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
(4) 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
(5) 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
(6) 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法：
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
表面抗体是双抗原夹心法
E抗体和核心抗体是竞争抑制法或间接法
1. 包被：用0.05M PH9，碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml，在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml，37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
方法二：用于检测未知抗体的间接法：
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时，洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml，37℃孵育30～60分钟，洗涤，最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
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