
Kitsize | 12x8 |
Method | ELISA |
Incubationtime | 1x1h,1x10min |
Standardrange | 0.08-5ng/mL |
Specimen/Volumes | 10µLserum,plasma,urine,cellculturesupernatantetal. |
Substrate/isotope | TMB450nm |
RegulatoryStatus: | EU:CE |
SuperoxideDismutases(SODs)(E.C.1.15.1.1.)areauniquefamilyofmetalloproteinsthatcatalyzethedismutationofsuperoxideanionrADIcals(O2-)tooxygen(O2)andhydrogenperoxide(H2O2).SODisubiquitousinoxygenmetabolizingcellsprotectingthesecellsagainstdirectandindirectoxygen-mediatedfreeradicaldamage.ThehumanCu/Znsuperoxidedismutaseisadimericproteincomposedof2subunitsof153aminoacidresiduesandamolecularweightof16kDaeach.Dissociationofthesubunitsisfacilitatedbyalkylationofthetwosulfhydrylgroupsintheproteinorbyremovalofthecopperandzincions.InductionofCu/ZnSODexpressionresultinginelevatedlevelsofCu/ZnSODinhumanbodyfluidsisofdiagnosticvalueformeasuringtheactivityofdifferentdiseases.
- nephropathies:
Cu/ZnSODdeterminationprovidesatoolforearlydiagnosisofnephropathies. - monitoringoftherapeutictreatments:
Cu/ZnSODisausefultherapeutictoolinthetreatmentofchronicinflammatione.g.rheumatoidarthritis(2)oroftheischemicmyocardiuminthephaseofreperfusion(6).Duetotheshorthalf-lifeofSODinjectedintothebloodcirculation,arapidassayisnecessaryformonitoringSODlevels. - Trisomy21(Down"sSyndrome):
IncaseswithDown"sSyndromeanadditionalpartofchromosome21ispresentinthegenomeofthepatientasastructuralchromosomeaberration.TheCu/ZnSODgeneislocalizedonchromosome21,closelyassociatedwiththegenecomplexresponsIBLeforthephenotypeofDown"sSyndrome.Agene-dosageeffectforCu/ZnSODinDown"sSyndromeprovidingadiagnosticMarkerforthissyndromehasbeendescribed.
a)PatientswithDown"sSyndromehavesignificantlyelevatedserumandurinelevelsofCu/ZnSOD.
b)PrenataldiagnosisofDown"sSyndrome:Cu/ZnSODlevelsarequantitatedfromerythrocytesoffetalumbilicalveinbloodandrelatedtothenumberofcells,thecontentofhaemoglobinandtothehaematocrit.IncaseofTrisomy21thesignificantlyelevatedlevelsofCu/ZnSODaredetermined.
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(1) 包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
(2) 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
(3) 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
(4) 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
(5) 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
(6) 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
间接法:
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
2、封闭液肯定不好
3、显色时用封口膜盖好
请大家帮帮忙,第一步加完抗原后必须封闭吗
我现在用商品化的试剂盒进行夹心法ELISA测定某抗体的浓度,盒子给定了4个标准品,标准品抗体浓度为70000~1000单位,测定步骤中要求对样品进行1:1000稀释后测定。
但是有的样本按照1:1000稀释后,最终OD值大于70000浓度的标准品的OD值,然后使用ELISACALC软件进行四参数拟合,超过了标准曲线的范围,就算不出来这个样品的浓度,但是如果在1000-70000之间的OD值就可以算出相应浓度。请教大神们,接下来我是否可以对样品进行1:2000,1:4000浓度稀释,算出结果后再×2、×4,算作此样品的浓度呢?还是直接给一个>70000的定性结果?或者可以有能算出来的其他软件?
Ps试剂盒中提及Dilutionlinearity(稀释线性?)为141%,这个是什么意思呢?
多谢!!
2.加大辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素;

