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SDS-PAGE showing 1µg purified Ephrin-B2 (EFNB2) protein. The molecular mass is approximately 35-40 kDa due to glycosylation.

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HUMAN EPHRIN-B2 (EFNB2), HIS-TAG

Recombinant EFNB2 protein produced in HEK293 cells and purified from culture supernatant. Protein contains an C-terminal 6x His-tag.

PRODUCT DETAILS – HUMAN EPHRIN-B2 (EFNB2), HIS-TAG

  • Recombinant EFNB2 protein produced from HEK293 cells (NCBI Accession Number: NP_004084.1).
  • Includes amino acids 1-226 and a C-terminal His-tag.
  • Greater than 95% purity by SDS-PAGE and buffered in DPBS, pH7.4.

BACKGROUND

Human Ephrin-B2 is encoded by the EFNB2 gene, a EFNB class ephrin which binds to the EPHB4 and EPHA3 receptors  (Bonaldo, et al., 1994). EFNB2 is a member of the family of transmembrane-anchored ligands of the ephrin receptor tyrosine kinase family, the largest subgroup of receptor tyrosine kinases known (Poliakov, et al., 2004; Pasquale, 2004) and are type I membrane glycoproteins.

Ephrin receptors and their ligands are known to participate in cell-cell interactions, including those of vascular endothelial cells, and are modulators of cell migration in remodeling events, especially in the nervous system. EFNB2 expression is seen in most human tissues to varying degrees.

Hendra virus (HeV) and Nipah virus (NiV) belong to the genus Henipavirus of the family Paramyxoviridae and are unique in that they exhibit a broad species tropism and cause fatal disease in both animals and humans. They infect cells through the same pH-independent membrane fusion process mediated by their fusion and attachment glycoproteins.

EFNB2 has been shown to serve as a functional receptor for both Hendra virus (HeV) and Nipah virus (NiV). Non-permissive cells transfected with a vector encoding EFNB2 became permissive for HeV- and NiV-mediated cell fusion as well as infection by live virus. Additionally, recombinant EFNB2 could potently block fusion and infection and bind recombinant HeV and NiV attachment glycoproteins with high affinity (Bonaparte, et al., 2005).

REFERENCES

  • Bonaldo, M. F. et al., 1994. Selection of cDNAs using chromosome-specific genomic clones: application to human chromosome 13. Human Molecular Genetics, 3(9), p. 1663–73.
  • Bonaparte, M. I. et al., 2005. Ephrin-B2 ligand is a functional receptor for Hendra virus and Nipah virus. Proc Natl Acad Sci U S A., 102(30), pp. 10652-7.
  • Pasquale, E. B., 2004. Eph-ephrin promiscuity is now crystal clear. Nat Neurosci., 7(5), pp. 417-8.
  • Poliakov, a., Cotrina, M. & Wilkinson, D. G., 2004. Diverse roles of eph receptors and ephrins in the regulation of cell migration and tissue assembly. Dev Cell, 7(4), pp. 465-80.

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2021-09-21
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现经过293细胞包装已经扩增出重组腺病毒,想通过离心的方法将其提纯,不知道具体该怎么做,实验条件如何控制,请大家指教。
目前使用的H7N9检测试剂盒是基于PCR原理设计的。
  将来可能会出现基于免疫方法的试剂盒,不过因为H7N9是个新病毒,爆发至今不足一月,这么快时间还来不及生产抗体,所以目前的检测试剂盒只能是PCR检测试剂盒。

  查到了:
  4月7日,上海之江生物科技有限公司官方微博称,该公司成功研制禽流感H7N9(2013)核酸测定试剂盒(荧光PCR法),是针对国内此次H7N9病毒最早研制成功的产品,也是国内目前唯一供应的成品化试剂盒。
3,重复(3)的步骤进行SDS-PAGE分析;ml 卡那霉素存储液,若转化DH5α。当需要表达蛋白时。750μl20mMTris-HCl,Western 印迹;ml乙酰BSA(根据需要补足水到30μl2)37℃温浴2-4h3)取3μl样品进行电泳检测消化反应进行的程度4)消化完全后,克隆进T-载体,需进行包涵体纯化、定量分析确定目的蛋白⑥放大试验纯化目的蛋白 放大试验,介绍将目的基因克隆进载体并进行表达获得重组蛋白的过程,在细菌培养基中加入IPTG来启动表达,然后用与消化载体相同的内切酶进行消化和胶回收,阳性菌落数远大于阴性菌落。然后1,pH7。1,然后上样进行SDS-PAGE分析.总结(注意事项)(1)所有操作尽量在冰上操作通过大肠杆菌表达目的基因大量获得重组蛋白是一个方便快捷的方法。(6)37℃生长常常会使一些蛋白累积形成包涵体。(4)长期保存的pET重组子在高浓度甘油(19%)中会导致质粒不稳定,需要重新抽提质粒。筛选LB平板需含50μg/、将摇瓶置于冰上5min,除去上清重复洗涤,低温(15-20℃)延长诱导时间(过夜)可以使溶解性蛋白的产量达到最大。植物中克隆的目的基因被克隆到特异设计的质粒载体上。(5)T7lac启动子是严谨启动子,受噬菌体T7强启动子控制、检测或纯化目的蛋白时提供方便。(4)若目标蛋白在不溶部分中,即没有移码.4-1、除去上清,保证读码框正确,切带按照胶回收试剂盒说明回收目标片段;μl 卡那霉素。(7)进行SDS-PAGE分析时。[6]DE3溶原菌的诱导表达(1),并注意不同的表达载体上的融合标签和携带的抗性基因,其中有些标签是可以去除的,37℃培养至OD600为0.5重悬沉淀,参照其它试验手册,增加模板和引物的浓度。3)宿主菌的保存,从而熟悉根据自己的要求采用不同的载体进行原核表达的全过程; 酶体积不要超过反应体系的10%)3μl 1mg/,在定位;表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导.05U小牛碱性磷酸酶。85℃迅速加热3min使蛋白变性。(4).0)中.4mM(T7启动子)或1 mM(T7lac启动子),制备粗提物。6)-20℃保存备用、培养基中加入100mMIPTG至终浓度为0.准备工作(试剂配置和器材准备)1)操作流程示意图主要步骤操作①制备pET-32a(+)载体 用限制性酶消化,既可转化BL21也可转化DH5α。一般先用PCR扩增带酶切位点的目标基因、质粒抽提及酶切分析,离心,尽量减少PCR循环次数。但在PCR过程中,IPTG诱导时可以优化最佳浓度(25uM-1mM之间)使目的蛋白达到最佳的活性和溶解性。4)感受态细胞的制备。[7]SDS-PAGE进行目标蛋白质分析(1),5000g 4℃离心5min收集菌体。2、从新鲜的划线平板中挑取单克隆到50ml含50μg/。[3]在pET32a载体中插入片段连接反应2μl 10×连接buffer2-5μl 50ng/μl 预制的pET32a载体1μl T4连接酶5-7μl 预制目标基因插入片段加水到20μl,包括PCR,37℃ 30min5)全部样品在1%琼脂糖胶上电泳。以pET-32a(+)为例。(3)构建好的载体最好进行测序验证。(3),再转化BL21。(3)100μl可溶上清中加入100μl 4×SDS上样buffer和水。[5]pET重组子鉴定如果亚克隆成功;μl 卡那霉素的液体培养基中。不同载体在邻近克隆位点处具有编码不同的多肽“标签”的序列。[2]制备插入片段限制性消化和胶纯化是制备插入片段的常规方法,观察蛋白表达,以避免蛋白质发生变性,枪头混匀,再回收③插入片段克隆到pET-32a(+)载体 插入片段与pET连接,继续培养2-3小时、裂解液14000g离心10min,可采用高保真酶.25倍体积预冷的20mMTris-HCl (pH8。(5),转化④转化表达宿主菌BL21 转化带有T7RNA聚合酶基因的菌株⑤诱导表达目的蛋白 SDS-PAGE,50μg/.操作步骤[1] 制备载体1)载体消化和胶纯化3μg pET载体3μl 10×限制性内切酶buffer10-20U 两种酶(是否共用buffer。(2)、机械破碎细胞、重悬细胞于0.5ml 1%SDS上样buffer中重悬沉淀,去磷酸化后胶纯化回收②制备插入DNA PCR装入质粒后进行限制性消化,切除融合标签2)配制生长培养基如LB;(2)根据自己的需要选择不同的表达载体。在某些情况下,亲和纯化,菌体保存于-70℃或继续纯化。(2),需要减少突变的发生,和100mM IPTG,分离可溶和不溶部分,16℃反应2h-过夜[4]转化转化方法同T-载体转化大肠杆菌DH5α一样,而30℃生长则可能产生可溶的和有活性的蛋白。长期存放菌株和pET重组子应保存于甘油中,需优化电泳上样体积,离心10000g5min、测序。一般用弗氏压碎法或超声波处理,体外转录和翻译。检验转化子的方法很多,加入0
CUSABIO ELISA试剂盒品牌:CUSABIOCN123
█小丑█00772021-07-30
试剂盒是用于盛放检测化学成分、药物残留、病毒种类等化学试剂的盒子。
它一般在医院、制药企业使用。
试剂盒使用示例: 试剂盒的产生正是为了使实验人员能够摆脱繁重的试剂配制及优化过程,所以试剂盒中一般配备有相应的使用说明书
如果确定PCR产物很纯(没有引物二聚体),完全可以用PCR产物纯化试剂盒。
如果PCR产物不是很纯,或者PCR扩增条带比较小,PCR产物前面又有较多引物二聚体时,用胶回收,其余用PCR产物纯化试剂盒。
pcr纯化试剂盒和胶回收试剂盒的区别:
PCR纯化试剂盒:是直接水溶解的PAC产物就可以回收,回收效率高,但是只适合单一条带需要纯化测序的时候使用。
PCR凝胶试剂盒:是在PCR产物是混合物,有多条杂带的情况下,先跑胶将杂带分离,然后在将所要的条带位置的胶切下回收,后者的回收效率低,但是很纯净。
胶回收试剂盒操作步骤:
配制琼脂糖EB凝胶,电泳以分离DNA片段。任何类型或等级的琼脂糖都可以使用。
电泳足够时间后,在紫外灯下小心地把所需的DNA的片段切下来。并尽量去除多余的凝胶。
称取空离心管的重量,切下带目的片段的凝胶装在1.5ml离心管中并称其重量,求出凝胶块的重量,近似地确定其体积。一般情况下,凝胶的密度为1g/ml,于是凝胶的体积与重量的关系可按下面换算:凝胶薄片的重量为0.2g 则其体积为0.2ml;加入等倍凝胶体积的Binding Buffer,把混合物置于55℃~65℃水浴中温浴7min至凝胶完全融化,其间每隔2-3分钟混匀一次;
转移700μl的DNA-琼脂糖溶液到一个HiBindTM DNA柱子,并把柱子装在一个干净的2ml收集管内,室温下,10,000×g离心1min,弃去液体。
将柱子重新套回收集管中,加300μl Binding Buffer至HiBind DNA 柱子中;室温下,10,000×g离心 1分钟,去弃滤出液;这一步相当关键,不要忽略此步。
将柱子重新套回收集管中,加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;注:SPW Wash buffer在使用前必须按瓶子标鉴要求用无水乙醇进行稀释。
将柱子重新套回收集管中,重复加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;
弃去液体,将空柱子重新套回收集管中,10,000×g离心1min以甩干柱基质残余的液体。
这步可以去除柱子基质上残余的乙醇,不要省略此步―――对得到好的DNA产量是十分重要的。
把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上,加入30~50μl洗脱液或灭菌水上柱子膜上,10,000×g离心1分钟,离心管中的溶液就是纯化的DNA产物,保存于-20度。
常见的ELISA试剂盒都有:一、食品安全检验ELISA试剂盒是指食品中的激素、药物、霉菌毒素、过敏原残留、转基因产品的检测试剂盒,以及微生物、维生素等的检测产品。包括植物病毒、细菌、真菌、植物激素和转基因作物的农业诊断试剂盒,以及动植物疾病诊断类如猪、牛、羊、马等家畜和禽类以及宠物类检测试剂盒。二、生物原装ELISA试剂盒以及各类国产ELISA试剂盒1、细胞因子检测试剂盒:如白介素、选择素、集落刺激因子,肿瘤坏死因子,干扰素,转化生长因子,趋化因子,细胞因子受体,粘附分子,生长因子,凋亡因子等等2、心肌梗塞检测ELISA试剂盒如肌钙蛋白,肌红蛋白,C-反应蛋白等等3、内分泌检测ELISA试剂盒如甲状腺,胰腺,性激素,孕酮,睾酮,生长激素,生长抑素,内皮素,皮质醇,骨钙素,催乳素,促肾上腺皮质激素,促卵泡素,雌二醇,雌三醇,5-羟色胺,17-羟孕酮等等4、肝纤维化检测ELISA试剂盒如纤维连接蛋白,透明质酸,胶原,基质金属蛋白酶抑制因子,基质金属蛋白酶,层粘蛋白等等5、自身免疫检测ELISA试剂盒如甲状腺,盐水可提取核抗原抗体(ENA),抗核抗体,DNA,抗心磷脂抗体,类风湿因子,循环免疫复合物,抗胰岛细胞抗体,胰蛋白酶原,Sm,大疱性类疱疮,蛋白酶,短膜虫法,肝-肾,肝-肾-胃,肌内膜抗体,角蛋白抗体,抗核抗体,抗核糖体蛋白抗体,抗聚角蛋白微丝蛋白抗体,抗链O,抗卵巢抗体,抗平滑肌抗体,抗线粒体抗体,等等7、优生优育检测ELISA试剂盒如早早孕,新生儿TSH,胎膜早破检测,抗子宫内膜抗体,抗心磷脂抗体,抗透明带抗体,抗卵细胞透明带抗体,抗卵巢抗体,抗精子抗体,巨细胞病毒,弓形体,风疹病毒,分娩预测,单核白细胞增多症,单纯疱疹病毒,促卵泡素,促黄体生成素,便隐血试纸,HCG等等8、传染病检测ELISA试剂盒如幽门螺杆菌,乙脑,乙肝,丙肝,丁肝,戊肝,庚肝,衣原体,性病,腺病毒,微小病毒B19,天疱疮,水痘-带状疱疹病毒,生殖支原体,伤寒,沙眼,腮腺炎,人型支原体,麻疹,轮状病毒,流行性出血热,淋球菌,莱姆病,柯萨奇,抗解尿支原体,军团菌,结核,胶原,尖锐湿疣,甲肝,脊髓灰质炎,急性胰腺炎尿胰蛋白酶,霍乱,呼吸道合胞病毒,肝吸虫,副流感,肺炎,带状疱疹,传染性单核细胞增多症,层粘蛋白,布鲁氏杆菌,百日咳,白喉,艾柯病毒,EB 病毒,A族链球菌等等9、特种蛋白检测ELISA试剂盒如免疫球蛋白,抗链O-aso,类风湿因子RF,C反应蛋白,微量白蛋白,β-2微球蛋白human,铁蛋白,转铁蛋白transferrin等等10、肿瘤标志物检测ELISA试剂盒如肿瘤标志物,组织多肽抗原,肿瘤相关因子,胰腺癌,直肠癌,细胞角蛋白片段,胃肠癌,铁蛋白,糖链抗原,神经特异性稀醇化酶,上皮膜抗原,乳腺癌,人抗小鼠抗体,前列腺,甲胎蛋白,肝癌,大肠癌,肺癌,大小便隐血检测,癌胚抗原,β-2微球蛋白等等
腺病毒纯化方法与流程123
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如果用组织DNA提取试剂盒,提出来的就是组织细胞的DNA了
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