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Addgene/pAAV-CaMKIIa-hChR2(H134R)-EYFP/1unit/26969-AAV5
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| Item | Catalog # | Description | Quantity | Price (USD) | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Plasmid | 26969 | Standard format: Plasmid sent in bacteria as agar stab | 1 | $75 | Add to Cart | |
| AAV1 | 26969-AAV1 | Virus (100 µL at titer ≥ 1×10¹³ vg/mL)and Plasmid.More Information | Add to Cart | |||
| AAV2 | 26969-AAV2 | Limited Stock Available, 2 units leftVirus (100 µL at titer ≥ 3×10¹² vg/mL)and Plasmid.More Information | Add to Cart | |||
| AAV5 | 26969-AAV5 | Virus (100 µL at titer ≥ 1×10¹³ vg/mL)and Plasmid.More Information | Add to Cart | |||
| AAV9 | 26969-AAV9 | Virus (100 µL at titer ≥ 1×10¹³ vg/mL)and Plasmid.More Information | Add to Cart | |||
This material is available to academics and nonprofits only.
Backbone
- Vector backbonepAAV(Search Vector Database)
- Backbone manufacturerInvitrogen
- Backbone sizew/o insert(bp)5390
- Vector typeMammalian Expression, AAV
Growth in Bacteria
- Bacterial Resistance(s)Ampicillin
- Growth Temperature37°C
- Growth Strain(s)Stbl3
- Growth instructionsStbl3 (rec A-) cells to avoid recombinations with the LTRs
- Copy numberHigh Copy
Gene/Insert
- Gene/Insert namehChR2(H134R)
- Alt nameChR2
- SpeciesH. sapiens (human)
- Insert Size (bp)1662
- MutationHistidine 134 is mutated to Arginine
- Tag/ Fusion Protein
- EYFP (C terminal on insert)
Cloning Information
- Cloning methodRestriction Enzyme
- 5′ cloning siteBamHI, SalI, KpnI(not destroyed)
- 3′ cloning siteEcoRI, HinDIII(not destroyed)
- 5′ sequencing primerctcagaagccccaagctcgtc
- 3′ sequencing primerGCAATAGCATGATACAAAGG (Common Sequencing Primers)
Resource Information
- Terms and Licenses
- UBMTA
- Ancillary Agreement for Plasmids Containing FP Materials
- Industry Terms
- Not Available to Industry
- Articles Citing this Plasmid
- 16 References
Depositor Comments
This plasmid contains the mouse calcium/calmodulin-dependent kinase II alpha subunit promoter.
For additional information please visit - http://www.optogenetics.org
Information for AAV1 (Catalog # 26969-AAV1)(Back to top)
Purpose
Ready-to-use AAV1 particles produced from pAAV-CaMKIIa-hChR2(H134R)-EYFP (#26969). In addition to the viral particles, you will also receive purified pAAV-CaMKIIa-hChR2(H134R)-EYFP plasmid DNA.
CaMKIIa-driven, humanized channelrhodopsin H134R mutant fused to EYFP for optogenetic activation.These AAV preparations are suitable purity for injection into animals.Delivery
- Volume100 µL
- Titer≥ 1×10¹³ vg/mL
- Pricing$350 USD for preparation of 100 µL virus + $30 USD for plasmid.
- StorageStore at -80℃. Thaw just before use and keep on ice.
- ShipmentViral particles are shipped frozen on dry ice. Plasmid DNA (≥ 200ng) will also be included in the shipment.
Viral Production & Use
- Packaging Plasmidsencode adenoviral helper sequences and AAV rep gene, AAV1 cap gene
- BufferPBS + 0.001% Pluronic F-68
- SerotypeAAV1
- PurificationIodixanol gradient ultracentrifugation
- Reporter GeneEYFP
Biosafety
Requestor is responsible for compliance withtheir institution"s biosafety regulations.Lentivirus is generally considered BSL-2. AAV isgenerally considered BSL-1, but may requireBSL-2 handling depending on the insert.Biosafety Guide
Resource Information
- Terms and Licenses
- Ancillary Agreement for Penn Vectors
- Terms of Use for Viral Vectors
- Industry Terms
- Not Available to Industry
Viral Quality Control
Quality Control:
- Addgene ensures high quality viral vectors by optimizing and standardizing production protocols and performing rigorous quality control (QC) (see a list of our QC assays). Thespecific QC assays performed varies for each viral lot. To learn which specific QC assays were performed on your lot, please contact us.
- Titer: the exact titer of your sample will be reported on the tube. The titer you see listed on this page is the guaranteed minimum titer. See how titers are measured.
Visit our viral production page for moreinformation.
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Data submitted about 26969-AAV1 by requesting scientist(s):
- Data 1: Mouse, Brain parenchyma
Information for AAV2 (Catalog # 26969-AAV2)(Back to top)
Purpose
Ready-to-use AAV2 particles produced from pAAV-CaMKIIa-hChR2(H134R)-EYFP (#26969). In addition to the viral particles, you will also receive purified pAAV-CaMKIIa-hChR2(H134R)-EYFP plasmid DNA.
CaMKIIa-driven, humanized channelrhodopsin H134R mutant fused to EYFP for optogenetic activation.These AAV preparations are suitable purity for injection into animals.Delivery
- Volume100 µL
- Titer≥ 3×10¹² vg/mL
- Pricing$350 USD for preparation of 100 µL virus + $30 USD for plasmid.
- StorageStore at -80℃. Thaw just before use and keep on ice.
- ShipmentViral particles are shipped frozen on dry ice. Plasmid DNA (≥ 200ng) will also be included in the shipment.
Viral Production & Use
- Packaging Plasmidsencode adenoviral helper sequences and AAV rep gene, AAV2 cap gene
- BufferPBS + 0.001% Pluronic F-68
- SerotypeAAV2
- PurificationIodixanol gradient ultracentrifugation
- Reporter GeneEYFP
Biosafety
Requestor is responsible for compliance withtheir institution"s biosafety regulations.Lentivirus is generally considered BSL-2. AAV isgenerally considered BSL-1, but may requireBSL-2 handling depending on the insert.Biosafety Guide
Resource Information
- Terms and Licenses
- Terms of Use for Viral Vectors
- Industry Terms
- Not Available to Industry
Viral Quality Control
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Information for AAV5 (Catalog # 26969-AAV5)(Back to top)
Purpose
Ready-to-use AAV5 particles produced from pAAV-CaMKIIa-hChR2(H134R)-EYFP (#26969). In addition to the viral particles, you will also receive purified pAAV-CaMKIIa-hChR2(H134R)-EYFP plasmid DNA.
CaMKIIa-driven, humanized channelrhodopsin H134R mutant fused to EYFP for optogenetic activation.These AAV preparations are suitable purity for injection into animals.Delivery
- Volume100 µL
- Titer≥ 1×10¹³ vg/mL
- Pricing$350 USD for preparation of 100 µL virus + $30 USD for plasmid.
- StorageStore at -80℃. Thaw just before use and keep on ice.
- ShipmentViral particles are shipped frozen on dry ice. Plasmid DNA (≥ 200ng) will also be included in the shipment.
Viral Production & Use
- Packaging Plasmidsencode adenoviral helper sequences and AAV rep gene, AAV5 cap gene
- BufferPBS + 0.001% Pluronic F-68
- SerotypeAAV5
- PurificationIodixanol gradient ultracentrifugation
- Reporter GeneEYFP
Biosafety
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- Terms and Licenses
- Terms of Use for Viral Vectors
- Industry Terms
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Viral Quality Control
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Information for AAV9 (Catalog # 26969-AAV9)(Back to top)
Purpose
Ready-to-use AAV9 particles produced from pAAV-CaMKIIa-hChR2(H134R)-EYFP (#26969). In addition to the viral particles, you will also receive purified pAAV-CaMKIIa-hChR2(H134R)-EYFP plasmid DNA.
CaMKIIa-driven, humanized channelrhodopsin H134R mutant fused to EYFP for optogenetic activation.These AAV preparations are suitable purity for injection into animals.Delivery
- Volume100 µL
- Titer≥ 1×10¹³ vg/mL
- Pricing$350 USD for preparation of 100 µL virus + $30 USD for plasmid.
- StorageStore at -80℃. Thaw just before use and keep on ice.
- ShipmentViral particles are shipped frozen on dry ice. Plasmid DNA (≥ 200ng) will also be included in the shipment.
Viral Production & Use
- Packaging Plasmidsencode adenoviral helper sequences and AAV rep gene, AAV9 cap gene
- BufferPBS + 0.001% Pluronic F-68
- SerotypeAAV9
- PurificationIodixanol gradient ultracentrifugation
- Reporter GeneEYFP
Biosafety
Requestor is responsible for compliance withtheir institution"s biosafety regulations.Lentivirus is generally considered BSL-2. AAV isgenerally considered BSL-1, but may requireBSL-2 handling depending on the insert.Biosafety Guide
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Viral Quality Control
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Data submitted about 26969-AAV9 by requesting scientist(s):
- Data 1: Mouse, Brain parenchyma
- Data 2: Mouse, Brain parenchyma
- Data 3: Mouse, Brain parenchyma
蚂蚁淘电商平台
ebiomall.com
ebiomall.com
公司简介
蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
蚂蚁淘承诺
正品保证： 全球直采 在线追溯
蚂蚁淘所有产品都是自运营的，我们已经跟国外多家厂方建立品牌推广合作关系, 获得对方的支持和授权； 同时客户可以通过订单详情查看到货物从厂方至客户的所有流程， 确保货物的来源； 正规报关，提供13%增值税发票。
及时交付： 限时必达 畅选无忧
蚂蚁淘的运营团队都是有着多年经验的成员，他们熟悉海外采购、仓储物流、报关等环节； 同时通过在线的流程监控，蚂蚁淘的进口速度比传统企业提高了50%以上， 部分产品甚至能做到7-10天到货，即蚂蚁淘的“时必达”服务。
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蚂蚁淘的价格是真实透明的，并且具有很大的价格优势，不需要繁杂的询价比价； 报价单与合同可以直接在线生成或打印；就像在京东购物一样， 您的鼠标点击几 次即完成在蚂蚁淘的采购，订单详情会告诉您所有进程。
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蚂蚁淘提供的产品在使用过程中如因产品质量问题有售后需求时， 您可通过我的订单提交您的“申请售后”， 蚂蚁淘产品顾问会第一时间为您处理， 在售后服务过程中如遇到问题也可致电蚂蚁淘客服热线：4000-520-616。
2021-08-19
货号：A0010 查看更多
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2021-08-13
逆转录酶是由陕西脉元生物科技有限公司代理或销售的MYbiotetch品牌的试剂，产品来源于国产。陕西脉元生物科技有限公司是中国最权威的逆转录酶试剂销售服务商之一，在西安等地方销售逆转录酶试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业逆转录酶仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的逆转录酶产品 查看更多
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2021-08-10
第二代耐热逆转录酶是由上海前尘生物科技有限公司代理或销售的Yeasen品牌的试剂，产品来源于Yeasen。上海前尘生物科技有限公司是中国最权威的第二代耐热逆转录酶试剂销售服务商之一，在浦东新区等地方销售第二代耐热逆转录酶试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业第二代耐热逆转录酶仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的第二代耐热逆转录酶产品 查看更多
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2021-07-27
现在市场上销售的AMV逆转录酶有国产和进口两种，规格主要有200u、300u、1000u三种，产地和规格不同伴随的价格也不同!200u规格的AMV逆转录酶国产的基本在250元-300元，进口的最便宜的是在美国BiPec公司，400元/200u；300u规格的AMV逆转录酶没有国产的，进口性价比最高的应该数美国Promega，市场价基本在600元-700元之间，大量批发的话可以打折；1000u规格的AMV逆转录酶国产价格在800元-900... 查看更多
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2021-09-03
amv逆转录酶,逆转录酶病毒,逆转录酶抑制剂,核苷类逆转录酶抑制剂,m-mlv逆转录酶,端粒酶逆转录酶,hiv逆转录酶,逆转录酶价格,人端粒酶逆转录酶,逆转录酶活性 查看更多
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上海联硕生物科技有限公司在发布的逆转录试剂盒 Omniscript RT Kit 10T Qiagen 205110供应信息，浏览与逆转录试剂盒 Omniscript RT Kit 10T Qiagen 205110相关的产品或在搜索更多与逆转录试剂盒 Omniscript RT Kit 10T Qiagen 205110相关的内容。 查看更多
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2021-09-11
弘业新创抗体技术股份有限公司在发布的M-MuLV逆转录酶供应信息，浏览与M-MuLV逆转录酶相关的产品或在搜索更多与M-MuLV逆转录酶相关的内容。 查看更多
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货号：A0010-T 查看更多
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2021-08-01
逆转录酶又称反转录酶，其发现具有重要意义，具有多种酶活性，已成为一种非常重要的工具酶，本文就其发现及酶活性做简单介绍。 查看更多
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2020-04-27
【正品直销，售后保障】（性能优化的逆转录酶）HiScript Reverse Transcriptase是由南京诺唯赞生物科技有限公司代理或销售的Vazyme品牌的试剂，产品来源于江苏南京。南京诺唯赞生物科技有限公司是中国最权威的【正品直销，售后保障】（性能优化的逆转录酶）HiScript Reverse Transcriptase试剂销售服务商之一，在南京等地方销售【正品直销，售后保障】（性能优化的逆转录酶）HiScript Reverse Transcriptase试剂已经多年。生物在线为您提供众多企 查看更多
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北京金石百优科技有限公司在发布的M-MLV逆转录酶供应信息，浏览与M-MLV逆转录酶相关的产品或在搜索更多与M-MLV逆转录酶相关的内容。 查看更多
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2021-09-12
柏业贸易（上海）有限公司在发布的CycleScript 逆转录酶供应信息，浏览与CycleScript 逆转录酶相关的产品或在搜索更多与CycleScript 逆转录酶相关的内容。 查看更多
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常见问题
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一般情况下，退货处理周期为客户收到产品一个月内（以快递公司显示签收时间为准），包装规格、数量、品种不符，外观毁损、短缺或缺陷，请在收到货24小时内申请退换货；特殊商品以合同条款为准。
商品咨询
【求助】逆转录第一链合成试剂盒的选择?康为的怎么样? PCR技术...123
xiaoheninglu2021-08-11
【求助】小鼠逆转录可以用Thermo 的试剂盒吗 核酸基因技术 丁香 ...123
xiayu7909212021-08-01
近期要做小鼠的RNA纯化、逆转录，临做了才想起来小鼠可以用我们常用的试剂盒吗，ThermoScientificRevertAidHMinusFirstStrandCDNASynthesisKit,试剂盒中的引物Oligo（dT)Primer可以用于小鼠吗？
逆转录实验(RT,实验简介,所需材料,操作步骤)范德生物科技公司123
疯子呛诽22021-08-19
人体体温为37度，保持酶活性
逆转录,荧光定量试剂盒,里面的试剂应该怎么123
touxing103962017-10-02
逆转录要-20°保存，荧光定量有的可以4°保存就可以不分装，如果要-20°保存的话就最好分装了，说明书上都写着呢，好好看看说明书！
癫痫患儿外周血CD19^+B,CD20^+B淋巴细胞和自然杀伤细胞的检测及...123
萿酱2017-10-01
逆转录一般用罗氏的，目前天根的全式金的也挺好用，还方便。
如果是用转录出的cDNA做那跟平时就一样了。不需要特别的试剂盒、
如果是用转录出的cDNA做那跟平时就一样了。不需要特别的试剂盒、
最后做实时定量pcr,这个过程需要哪些试剂盒或者试 55问答网123
兰二TA000552017-10-06
本数据来源于百度地图，最终结果以百度地图最新数据为准。如果你想做荧光定量PCR的根据实验思路来说应该需要、1.模板提取（一般为RNA）：Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定：分光光度计或NanoDrop
3.逆转录：逆转录试剂盒（或者一步法试剂盒），这一步可以用普通PCR做，也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂：通常有用SYBRGreenMix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBRGreen，并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBRGreen还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
2.模板浓度测定：分光光度计或NanoDrop
3.逆转录：逆转录试剂盒（或者一步法试剂盒），这一步可以用普通PCR做，也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂：通常有用SYBRGreenMix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBRGreen，并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBRGreen还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
invitrog逆转录试剂盒说明书 123
你欠我钱喲硜U2021-07-20
是单链cDNA，想合成双链cDNA需要另外操作：
一、cDNA第二链的合成:
1. 第一链反应完成后,取2ul一链产物－20℃冰箱中保存，待电泳检测。其余的产物合并，混匀，然后顺序加入下列试剂(promega):
20ul 10×DNA Polymerase I buffer
6ul10mM dNTP(自己配制)
xuldd H2O
1ulRNase H(2U/ul)
10ul DNA Polymerase I(10U/ul)
总体系为200ul;
2. 混匀后,16℃反应2.5小时;
3. 70℃灭活10分钟;
4. 反应完成后,得到200ul cDNA第二链反应体系,将此体系置于冰上;
5．取2ul二链产物，同保存的一链产物一起电泳鉴定。同时上1kb ladder，确定双链的大小范围。
注：一链，二链的电泳图是smear，且二链稍比一链大一些。
二、双链cDNA末端补平:
1. 在第二链反应体系中,顺序加入下列试剂(promega):
6ul 10mM dNTP
2ul T4 DNA Polymerase(8.7U/ul)
2ul BSA(10mg/ml)
2. 稍微离心混匀反应物, 37℃反应至少30分钟,然后75℃灭活10分钟;
3. 加入等体积酚/氯仿/异戊醇,剧烈振荡后,常温下13000g离心5分钟;
4. 离心后,吸取上清于另一1.5ml eppendof管中,加入等体积氯仿,上下颠倒几次混匀后,常温下13000g离心5分钟;
5. 吸取上清至另一eppendof管,加入1/10V3M NaAc(PH5.2)和2.5V预冷的无水乙醇,混匀,-20℃放置过夜以沉淀双链cDNA;
6. 第二日,将昨日沉淀物在4℃,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA;
7.离心完毕,弃上清,加入1ml 70%乙醇洗涤沉淀,常温下13000g离心5分钟;
8.离心完毕,弃上清,干燥沉淀至无乙醇气味.
注：第3，第4步可以用PCR 纯化试剂盒代替。
PCR纯化试剂盒操作流程：
1．溶液PE使用前应加入适量体积95％－100％的乙醇，混匀。
2．向200ul二链补平产物中加入5倍体积的buffer PB，混匀。
3．加入spin column中，13000rpm离心1min。
4．加入0.75ml buffer PE，13000rpm离心1min。
5．13000rpm，再离心1min。
6．将spin column放入一新的离心管中，加入50ul buffer EB，静置10min。
7．13000rpm离心2min。
8．加入30ul buffer EB，静置10min。
9．13000rpm离心2min。
10．加入1/10体积3M的NaAc，2.5倍体积无水乙醇，混匀，－20℃沉淀过夜。
一、cDNA第二链的合成:
1. 第一链反应完成后,取2ul一链产物－20℃冰箱中保存，待电泳检测。其余的产物合并，混匀，然后顺序加入下列试剂(promega):
20ul 10×DNA Polymerase I buffer
6ul10mM dNTP(自己配制)
xuldd H2O
1ulRNase H(2U/ul)
10ul DNA Polymerase I(10U/ul)
总体系为200ul;
2. 混匀后,16℃反应2.5小时;
3. 70℃灭活10分钟;
4. 反应完成后,得到200ul cDNA第二链反应体系,将此体系置于冰上;
5．取2ul二链产物，同保存的一链产物一起电泳鉴定。同时上1kb ladder，确定双链的大小范围。
注：一链，二链的电泳图是smear，且二链稍比一链大一些。
二、双链cDNA末端补平:
1. 在第二链反应体系中,顺序加入下列试剂(promega):
6ul 10mM dNTP
2ul T4 DNA Polymerase(8.7U/ul)
2ul BSA(10mg/ml)
2. 稍微离心混匀反应物, 37℃反应至少30分钟,然后75℃灭活10分钟;
3. 加入等体积酚/氯仿/异戊醇,剧烈振荡后,常温下13000g离心5分钟;
4. 离心后,吸取上清于另一1.5ml eppendof管中,加入等体积氯仿,上下颠倒几次混匀后,常温下13000g离心5分钟;
5. 吸取上清至另一eppendof管,加入1/10V3M NaAc(PH5.2)和2.5V预冷的无水乙醇,混匀,-20℃放置过夜以沉淀双链cDNA;
6. 第二日,将昨日沉淀物在4℃,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA;
7.离心完毕,弃上清,加入1ml 70%乙醇洗涤沉淀,常温下13000g离心5分钟;
8.离心完毕,弃上清,干燥沉淀至无乙醇气味.
注：第3，第4步可以用PCR 纯化试剂盒代替。
PCR纯化试剂盒操作流程：
1．溶液PE使用前应加入适量体积95％－100％的乙醇，混匀。
2．向200ul二链补平产物中加入5倍体积的buffer PB，混匀。
3．加入spin column中，13000rpm离心1min。
4．加入0.75ml buffer PE，13000rpm离心1min。
5．13000rpm，再离心1min。
6．将spin column放入一新的离心管中，加入50ul buffer EB，静置10min。
7．13000rpm离心2min。
8．加入30ul buffer EB，静置10min。
9．13000rpm离心2min。
10．加入1/10体积3M的NaAc，2.5倍体积无水乙醇，混匀，－20℃沉淀过夜。
【求助】miRNA逆转录试剂盒 核酸基因技术论坛123
我爱res2021-08-10
提取RNA,然后做逆转录需要什么试剂及试剂盒? 123
思念你IF542021-08-14
一个，运用反转录，以一条DNA单链为模板，以一个引物为转录的开始，通过DNA聚合酶进行链接(反转录的最终长度是不确定的，可能无限长)
【求助】大家miRNA逆转录和qPCR的试剂盒用的是那个公司的啊,求...123
tufeiwujuncheng2021-08-03
大家miRNA逆转录和qPCR的试剂盒用的是那个公司的啊，求推荐！
第一链cDNA合成(逆转录)试剂盒使用说明书 123
卖萌jdqtg2017-10-06
需要，用Oligo(dT)或随机引物
逆转录试剂盒逆转录出来的cDNA是单链还是双链 核酸基因技术...123
列刖2017-10-06
氯仿/，混匀,常温下13000g离心5分钟，混匀，然后顺序加入下列试剂(promega).离心完毕.离心完毕,剧烈振荡后,加入1ml 70%乙醇洗涤沉淀. 第二日,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA;ul) 2ul BSA(10mg/. 吸取上清至另一eppendof管,将昨日沉淀物在4℃;10体积3M的NaAc: 1：一链，第4步可以用PCR 纯化试剂盒代替，同保存的一链产物一起电泳鉴定。 6．将spin column放入一新的离心管中,取2ul一链产物－20℃冰箱中保存。 8．加入30ul buffer EB;异戊醇： 1．溶液PE使用前应加入适量体积95％－100％的乙醇. 在第二链反应体系中. 反应完成后;10V3M NaAc(PH5.5倍体积无水乙醇; 5，再离心1min是单链cDNA。 3．加入spin column中.2)和2，混匀，加入50ul buffer EB,得到200ul cDNA第二链反应体系。 2．向200ul二链补平产物中加入5倍体积的buffer PB. 第一链反应完成后; 3;ml) 2,将此体系置于冰上。 PCR纯化试剂盒操作流程; 5．取2ul二链产物,然后75℃灭活10分钟：第3; 4。同时上1kb ladder、cDNA第二链的合成. 加入等体积酚/。二，想合成双链cDNA需要另外操作.5V预冷的无水乙醇: 6ul 10mM dNTP 2ul T4 DNA Polymerase(8,加入等体积氯仿. 离心后。 9．13000rpm离心2min, 37℃反应至少30分钟,干燥沉淀至无乙醇气味,弃上清. 70℃灭活10分钟. 混匀后，待电泳检测，混匀,顺序加入下列试剂(promega)，且二链稍比一链大一些. 稍微离心混匀反应物，13000rpm离心1min，确定双链的大小范围：一,常温下13000g离心5分钟,-20℃放置过夜以沉淀双链cDNA.5小时，静置10min，－20℃沉淀过夜: 1;ul) 总体系为200ul;ul) 10ul DNA Polymerase I(10U/.75ml buffer PE。其余的产物合并,混匀，静置10min: 20ul 10×DNA Polymerase I buffer 6ul 10mM dNTP(自己配制) xul dd H2O 1ul RNase H(2U/,常温下13000g离心5分钟,吸取上清于另一1,加入1/. 注; 8; 2; 7,弃上清,16℃反应2。注; 3。 10．加入1/。 4．加入0，2、双链cDNA末端补平.7U/ 4。 5．13000rpm,上下颠倒几次混匀后。 7．13000rpm离心2min，二链的电泳图是smear.5ml eppendof管中; 6，13000rpm离心1min
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