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基因做表达实验必须要克隆全长步骤:1,RNA抽提(同RT)2,逆转录,使用合成的oligo3,p内参4,使用根据已知序列设计的上游引物和提供下游引物做PCR,注意设计上游引物是退火温度与下游引物相差不大。5,产物切胶回收,TA克隆测序这个oligo和下游引物是我根据Takara和BD公司的manual自己设计的,经过我的使用效果很好。具体操作参照takara的3-racemanual。你先做3-race,了解熟悉下,成功后再做5-race。5-race要买试剂盒做,较为复杂!
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