Unit Size | Price | Quantity |
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1mL | $1,229.00 | |
5mL | $5,117.00 | |
10mL | $7,893.00 |
BangsLaboratories位于美国印地安那州,成立于1988年,专业生产生命科学研究用的各种微球达2000种以上,用于流式细胞分析,生物大分子的分离与检测,激光共聚焦,生物影像等。BangsLaboratories于2000年收购了成立于1984年的流式标准品公司,该公司掌握了许多标准品和校正品的专利。Bangs产品通过与流式细胞仪及试剂厂家的OEM合作,进入世界各地实验室。BangsLaboratories的流式分部前称为流式标准品公司,成立于1984年。目前为止,公司自己研发了许多标准品和校正品,并获得美国和其他国家的专利保护。公司的荧光标准品可帮助科研和临床工作人员在实验时更容易更准确地评估数据。公司提供下列领域的质控可定量标准品:流式、荧光显微镜、屏象分析(imageanalysis)以及其它荧光分析。
Bangslabs(BangsLaboratories,Inc.)是高品质特种微球供应商,其产品广泛用于诊断试剂、免疫分析、分子及细胞生物学、流式检测应用等,产品种类已达2000余种,并且逐年递增,完善的技术支持体系为客户提供全方位的项目服务。 热销产品有羧基荧光微球、铕螯合微球、分离磁珠、标准微球、CD抗原标记微球等,适用于时间分辨荧光检测、免疫层析或比浊、细胞及遗传物质分离纯化等科研及工业应用。
BangsLaboratories公司位于美国印地安那州,成立于1988年4月。专业提供生命科学研究用的各种微球。其种类齐全(2000种以上),可用于流式细胞仪检测,细胞与生物大分子的分离与检测,电镜、共聚焦成像仪、荧光显微镜与相差显微镜的观察等。微球除聚苯乙烯外,还有聚甲基丙烯酸酯,聚乙烯甲苯和硅等多种材料,部分提供羧基或氨基修饰,直径大小从20nm-200um不等,均一性高,有很好的热稳定性。公司可提供个性化服务,根据你需要的颜色染色。BangsLaboratories的流式分部前称为流式标准品公司,成立于1984年。目前为止,公司自己研发了许多标准品和校正品,并获得美国和其他国家的专利保护。Bangs作为流式定量领域的领导者,产品已进入世界各地。公司的荧光标准品可帮助科研和临床工作人员在实验时更容易更准确地评估数据。公司提供下列领域的质控可定量标准品:流式、荧光显微镜、屏象分析(imageanalysis)以及其它荧光分析。QuantumTMplex在流式细胞仪的基础上,实现多样品检测或多指标检测,用于细胞因子检测、病毒筛选、自免疫分析、抗体检测、药物、血型、分子诊断以及基因组分析等。使用本试剂盒可在流式细胞仪上对一个样品同时检测20个不同指标(如不同细胞因子或不同抗原)。QuantumPlex?SP微球同样是研究者理想的选择,由于它是以QuantumPlexmultiplex试剂盒内的StarfireRed染料染色,研究者可以在花费不多的情况下处理表面偶联物。QuantumTMMESFKits用于流式细胞仪的标准曲线制作与仪器校正,与QuantumTMplex配套。试剂盒中的每种微球均对应溶液中一定量的荧光分子,用于流式细胞仪的荧光强度校正。试剂盒内除了荧光标准品外,还有一个未染色的微球population以测定荧光阈值或设备的噪音水平。盒内提供QuickCal数据光盘。QuantumTMSimplyCellular®kit本试剂盒是BangsLabs最复杂产品之一,用于流式实验室可直接而简单地定量检测细胞的抗体结合能力和细胞表面的抗原表达。盒内有五种微球,一个为未标记的空白对照,其余四个与不同量人IgGI和IgGII抗体的Fc区特异性抗体偶联,分别具有不同的与小鼠IgG单抗结合的能力。QC3TMkit&QC3Windows®kitQC3kit用于监控与校正仪器的设置及性能,使不同实验室间流式细胞仪的检测结果具有可比性,避免因为污染或pH改变造成的偏差;QC3Windows?kit含有3种不同荧光的QC3微球与一种空白微球。QuickCalTMv.2.1用于BangsLabs公司所有Quantum产品的检测结果的分析。该软件适用于所有的流式细胞仪软件可根据MESF微球的荧光强度等建立标准曲线。该软件还可保存仪器设置,使仪器的性能得到长期有效保证。ProActiveTMProtein-activatedorProtein-CoatedMicrospheres采用独有的包被技术偶联生物素、DNA、HRP/AP以及抗体等,确保包被微球更稳定、包被效果更好。用于免疫学和分子生物学检测 Superparamagnetic磁珠Superparamagnetic磁珠表面可高效共价交联蛋白质或DNA等,被广泛应用于诊断与其它生命科学研究。COMPEL?磁珠适用于各种生物学检测与分离,有3、6和8um等几种直径,磁珠受强磁性吸引,使其与溶液的分离极为方便,同时残余磁性极低,是生命科学研究的理想选择。磁珠分离器MagneticSeparatorsBangsLaboratories公司1.5mL磁珠分离器用于各种不同的磁珠分离实验中,包括细胞分选、mRNA与DNA分离与其它生物大分子的纯化等。使用时,只要将装有磁珠的离心管放入分离器中,仪器就能产生高能磁场使磁珠得以与溶液分离开,从而实现磁珠的分离。此外,BangsLaboratories公司提供各种微球标准,如不同直径、不同荧光的荧光强度;硅微球UniformSilicaMicrospheres除各种分子生物学与免疫学检测用途外,还可用于毛细管电色谱分析(capillaryelectrochromatography,CEC)
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cDNA完整序列的获得对基因结构、蛋白质表达、基因功能的研究至关重要。
完整的cDNA 序列可以通过文库的筛选和末端克隆技术获得。
末端克隆技术是20世纪80年代发展起来的。RACE(rapid-amplification of cDNA ends)是通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术。
RACE的优点
与筛库法相比较,有许多方面的优点
1)此方法是通过PCR技术实现的,无须建立cDNA文库,可以在很短的时间内获得有利用价值的信息。
2)节约了实验所花费的经费和时间。
3)只要引物设计正确,在初级产物的基础上可以获得大量的感兴趣基因的全长。
实验室现有的RACE试剂盒的简介
RACE是一种从一个相同的cDNA模板进行5‘和3‘末端快速克隆的方法。此方法会产生较少的错误条带。此过程中使用的酶混合物非常适合长链PCR。
使用此方法的要求是必须知道至少23-28个核苷酸序列信息,以此来设计5’末端和3‘末端RACE反应的基因特异性引物(GSPs)。
RACE引物的设计:
基因特异性引物(GSPs)应该是:
23-28nt
50-70%GC
Tm值≥65度,Tm值≥70度可以获得好的结果
需要实验者根据已有的基因序列设计5‘和3‘RACE反应的基因特异性引物(GSP1和GSP2).由于两个引物的存在,PCR的产物是特异性的。
反应中涉及到的一些事项
cDNA的合成起始于polyA RNA。如果使用其它的基因组DNA或总RNA,背景会很高。
RACE PCR的效率还取决于总的mRNA中目的mRNA的量和不同的引物有不同的退火和延伸温度。
在进行5‘和3’RACE PCR的时候应该使用热启动。
表4中给出了所有引物的相互关系。重叠引物的设计会对全长的产生有帮助。另外,重叠的引物可以为PCR反应提供一个对照。并不是绝对的要利用设计的引物产生重叠片段。
引物GSP中的GC含量要在50-70%之间。这样可以使用降落PCR。避免使用自身互补性的引物序列,否则会产生回折和
如果要用重叠片段来检测设计的引物,GSp1和GSp2之间至少是100-200碱基。只有这样才可以用扩增的产物来鉴定设计的引物是否正确。
降落PCR可以明显的增加RACE PCR产物的特异性。在最开始的循环中,退火温度高于AP1引物的Tm值,可以增加对特异性条带的扩增。随后的退火和延伸的温度降回到AP1的温度,可以进行随后的PCR循环。
形成分子内氢键。另外,避免使用与AP1互补的引物,尤其是在3‘末端。
验证基因特异性引物的对照:
单个引物的阴性对照:只用一个引物GSP来进行阴性对照。这样不应该产生任何的条带。如果可以看到明显的产物,应该改变循环的参数,或重新设计原始引物。
利用两个GSPS进行阳性对照:(只有两个GSP可以产生重叠的时候才可以采用此步。)为了确定RNA样品中目的基因确实表达,利用两个GSP和接头连接的cDNA来产生阳性对照。可以产生两个引物之间的重叠大小的片段。如果没有这个片段,应该重复cDNA的合成,或者从一个不同的组织或细胞来源进行cDNA的合成。
制备和抽提polyA RNA
不要使用DEPC处理过的水。
纯化完mRNA之后,利用琼脂糖凝胶电泳检测mRNA的质量。哺乳动物的mRNA样品是0.5-12kb的拖带,在其中有4.5和1.9kb的rRNA的条带。非哺乳动物的mRNA应略小。
具体的实验步骤
cDNA第一条链的合成:
我们建议进行cDNA合成的对照反应,这样可以对样品的cDNA的合成进行鉴定。加入各种试剂之后,在气浴中42度保温一个小时。
注意: 在水浴或酒精浴中保温回减少反应体积,从而降低第一链的合成效率。
将管放于冰上,以终止第一链的合成反应。
直接进行第二链的合成。
cDNA第二链的合成:
第二链合成的酶混合物中,含有聚合酶、RNaseH和连接酶。T4 DNA聚合酶的功能是补平dscDNA的末端。我们建议做阳性对照,试剂盒中提供人类骨骼肌的mRNA。
建议进行阳性对照,cDNA的质量取决于制备的polyA RNA的质量。非哺乳动物样品的mRNA大约在0.5-3kb之间。
通过电泳检测cDNA的产量,与对照进行对比,这样可以有利于在以后的步骤中对cDNA进行稀释。
接头的连接及连接产物的稀释
按照程序进行连接反应。
如果没有对比样品和对照的产量,利用Tricine-EDTA buffer制备接头连接的ds cDNA的1/50和1/250的稀释物,用两种稀释物进行以下的RACE PCR反应,直到鉴定出哪一种稀释可以得到好的效果。
RACE-PCR扩增
进行5’和3’的RACE-PCR扩增。
利用以下的程序进行降落PCR反应:
注意:
我们建议使用降落PCR反应,这就要求GSP的Tm值≥70度。
当循环结束时,利用1.2%琼脂糖凝胶电泳分析每一个管中的产物5μl,使用适当的分子量marker。
可以根据你的基因的特异性来设计最理想的循环参数。如果看不到带或者只有微弱的带,在68度多加5个循环。最佳的延伸时间取决于扩增条带的长度。如果片断的长度在2-5kb的时候,经常使用4min,0.2-2kb的时候将延伸时间减到2-3min,对于5-10kb的条带,延伸时间增加到10min。
RACE产物的验证:
应该对RACE的片段进行验证,以此来确定是否已经扩增了理想的产物。如果得到的是多条带或者研究的是多基因家族的成员,验证是非常有用的。
有3种验证RACE产物的方法:
(1)比较由GSP和NGSP获得RACE产物。
(2)Southern blot
(3)克隆并测序
我们建议最好测得RACE产物的部分序列。有的时候需要嵌套引物的存在。
比较由GSP和NGSP获得RACE产物
对于5‘末端的RACE产物,比较由AP1和GSP1扩增出来的产物和由AP1和NGSP1扩增出来的产物。
对于3‘末端的RACE产物,比较由AP1和GSP2扩增出来的产物和由AP1和NGSP2扩增出来的产物。这对于鉴定多条带是否是上一个PCR的特异性产物是非常有用的。
如果条带是正确的,在嵌套PCR反应中的条带应该是略微小一些。基本PCR和嵌套PCR产物的迁移率的不同取决于cDNA结构中GSP1和嵌套引物的位置。
RACE产物的克隆和测序:
可以利用胶回收试剂盒来回收RACE产物,此试剂盒适合回收2.5kb以下的RACE产物;对于长的片段,可以通过电洗脱获得好的结果。如果你选择使用其他的纯化方法,最后用Tricine-EDTA buffer 30μl重新悬浮DNA样品。
电泳5μl回收的样品来鉴定回收的质量。
将回收的PCR产物直接克隆到/A型的PCR克隆载体中。另外还可以利用接头和/或cDNA合成引物中的Not1、Srf1、Xma1、ECOR1等酶切位点,将产物克隆到常规载体中.
对于5‘端的RACE产物,我们建议挑取至少8-10个不同的克隆以获得5‘端的最大可能性的序列。(反转录并不总是进行到mRNA模板的5’末端,尤其是长模板。另外,T4 DNA聚合酶会移走5‘末端的0-20个碱基。)
一旦鉴定了含有插入片断的克隆,应该获得多的序列信息。理想的是,可以对整个开放读码框进行测序。包括5‘和3‘的非翻译区。
全长cDNA的获得
通过部分或全部测序鉴定了RACE产物后,可以通过两种选择获得全长的cDNA。
通过PCR的方法获得全长cDNA:
扩增长的cDNA需要较长的延伸时间,但是如果延伸的时间过长,可以产生拖带,所以要慎重的设计引物。
根据从5‘和3‘RACE产物获得序列信息设计5’和3‘GSP引物。这些引物应该来自cDNA的3’或者5‘的末端,应该是23-28nt长。不应该在引物的末端加上限制性位点,这样会导致高背景。在某些时候可以设计3’和5‘的嵌套引物。但是还是应该先利用一对引物进行PCR反应。
进行如下的热循环:
94度 30秒
25个循环 94度 5秒
72度 2-15分钟
延伸的时间应该等于预期的cDNA长度加上2分钟。例如:预期得到6kb的条带,用6+2=8分钟的延伸时间。
注意:如果没有条带或者条带弱,增加5个循环;或者优化PCR的条件。
在1.2%的琼脂糖凝胶上分析5μl的样品。通常情况下,可以见到一条单一带,如果这样,利用胶来纯化全长的cDNA。
制备1.2%的TAE buffer制备琼脂糖凝胶。不使用TBE buffer,TBE的胶很难制备全长的cDNA。
将剩下的45μl反应物点样,选用适当的marker。
利用长波紫外观察cDNA(≥300nm)切下全长的cDNA。注意:应该尽量减少紫外对cDNA的照射。
利用胶回收试剂盒回收cDNA。此试剂盒适合回收2.5kb以下的RACE产物;对于长的片段,可以通过电洗脱获得好的结果。如果你选择使用其他的纯化方法,最后用Tricine-EDTA buffer 30μl重新悬浮DNA样品。
将全长的cDNA克隆到T/A型的 PCR克隆载体中。
RACE是基于PCR技术基础上由已知的一段cDNA片段,通过往两端延伸扩增从而获得完整的3'端和5'端的方法
RACE技术的原理和操作方法:http://wenku.baidu.com/link?url=J-9lPSGmRLQriSfXhOqcYYFvJx7ktGIRMgU6k9vDQIywtdJ8deNg7Qi5t4CgtjxuhWUBvQO6_qsULiqUIFckEZty75jYNw5yz6rNqiIKCwm
请具体点,把联系方式和价位都说一下好吗?
做一次5-RACE的话,克隆10个以上基因应该是可以的。本数据来源于百度地图,最终结果以百度地图最新数据为准。