2XReadyGoHSFPCRMasterMix isa2Xconcentratedsolutionofhot-startandhighfidelity Taq DNAPolymerases,dNTPs,andallofthecomponentsrequiredforPCR,exceptDNAtemplateandprimers.Thispre-mixedformulationsavestimeandreducescontaminationduetoareducednumberofpipettingstepsrequiredforPCRsetup.Itincreasesspecificityandsensitivitybecausereducingformationofnospecificproductsandprimerdimer.Youcansetupreactionsatroomtemperature.ThemixisoptimizedforefficientandreproducIBLePCR.
TheMasterMixhasfourversions,withstandardbufferandGCbuffer,colorlessandGreen.TheMasterMixwithGCbufferisusedforamplificationofGC-richtarget(GCcontentis>65%).ThegreenoneissupplementedwithtwotrackingdyesfortheconvenienceofdirectgelloADIngofPCRproducts.
Highlights
- Convenient: Ready-to-usemix,directloadingofPCRproductsongel
- Thermostable: Retainatleast85%activityafter60minat95°C
- GeneratesPCRproductswith3"-dAoverhangs
- Incorporatesmodifiednucleotides (e.g.,biotin-,digoxigenin-,fluorescently-labelednucleotide)
DataSheet: 2XReadyGoHSFPCRMasterMix
VitaNaviTechnolog是华盛顿大学BarnesWayne教授创办的一家专门从事Taq酶及其相关产品研发与销售的生物公司。BarnesWayne教授是国际上著名的Taq酶专家，也是长片段基因PCR扩增技术的发明人和专利所有人（1993，PNAS；U.S.Patent5,436,149）。20多年来，BarnesWayne教授始终致力于PCR聚合酶，研发了系列TaqDNA聚合酶产品，远销全球40多个国家，是目前国际上生产PCR聚合酶的主要供应商之一。美国VitaNaviTechnology公司研发的新型高耐受性DNA聚合酶为基因检测技术带来了根本性的革新，彻底解决了依赖于纯化的核酸DNA为模板进行PCR扩增这一瓶颈问题。 产品简介 Omni酶是从文库中筛选出来的具有极高耐受性的Taq或者Klentaq突变体，可以直接以全血、血清、土壤、牛奶、巧克力或奶酪等材料为模板一步扩增目的基因，避免了繁琐的核酸DNA提取过程 产品特征：1.对全血、血清、血浆、土壤、植物、巧克力、奶酪和牛奶中的抑制因子具极高的耐受性，可直接对样品进行PCR检测，无需DNA分离。2.可以耐受高达40%的全血，20%的血浆或血清。3.可以从人血液中一步扩增疟疾基因。4.Omni酶节省时间、降低成本.5.直接从微量样品中的扩增，避免样品提取而丢失或污染DNA。
一、Klentaq1/KlentaqLA?实例1：用KelntaqLA扩增大于20kb的大片段基因。??二、高耐受性(Inhibitor-Resistant)聚合酶：OmniTaq/OmniKlentaq产品特征：1.对全血、血清、血浆、土壤、植物、巧克力、奶酪和牛奶中的抑制因子具极高的耐受性，可直接对样品进行PCR检测，无需进行DNA分离纯化。2.可以耐受高达40%的全血，20%的血浆或血清，已应用于多种遗传病的分子诊断和临床检验。3.可用于法医、环境监测、农业、动植物检疫和临床诊断等领域。4.可以从人血液中一步扩增疟疾基因。5.与PCR增强剂结合使用时，其耐受性将进一步提高。6.使用Omni酶不仅节省时间、降低成本，而且实现了从微量样品中的扩增，避免因提取过程所致的DNA丢失或污染。实例2：用OmniTaq（OT）和OmniKlentaq（OKT）从肝素抗凝血液中一步扩增乙肝病毒基因。?实例3：用新突变的Omni酶从富含腐殖酸的人基因组中扩增1.1kb的CCR5基因。?实例4：用新突变的Omni酶从巧克力和黑胡椒中直接扩增基因。?三、热启动聚合酶(Hot-start)聚合酶：CesiumTaq/CesiumKlentaq产品特征：1.CesiumTaq和CesiumKlentaq是一种冷敏感的突变体，在室温条件下聚合酶的活性很低，当升高温度进入PCR循环时聚合酶的活性就全部释放出来，因而具有内置式热启动功能。2.与现有化学修饰或抗体封阻的热启动聚合酶相比，CesiumTaq和CesiumKlentaq的聚合酶活性更高，扩增效果更好。3.CesiumKlentaq具有热启动和高耐受性双重效果。实例5：用CesiumKlentaq扩增基因热启动效果比较?四、PCR增强剂（PCRenhancingcocktails,PEC）产品特征：1.联合使用PEC-1或PEC-2与高耐受性Taq酶（OmniTaqandOmniKlentaq）可以更好的克服样品中各种物质对PCR反应的抑制作用，进一步提高PCR扩增效率，简化PCR操作流程提高。2.PEC有助于从基因组中扩增GC含量高达80%的基因。3.PEC也可用于qPCR（SYBR和Taqmanprobe）。4.新研发的PCR增强剂PEC-3andPEC-4有助于从食品中扩增基因。?实例6：联合使用OmniTaqorOmniKlentaq及PCR增强剂（PEC）从不同类型的牛奶中检测沙门氏杆菌Inv基因。??实例7：联合使用OmniTaqorOmniKlentaq及PCR增强剂（PEC）从人的基因组DNA或全血中直接扩增3个高GC含量的基因。?五、各种特异性一步PCR试剂盒VitaNaviTech公司开发了系列一步法PCR和qPCR试剂盒，可以直接从样品中扩增目的基因。1.DirectBloodPCRKit：从血液中直接扩增目的基因实例8：使用DirectBloodPCRKit从全血中一步扩增CCR5基因
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做的实验以及解决的问题远比五年前多了，因此利用过年的时间，写点荧光定量PCR实验中的一些注意事项及感想，无论对错，都是希望对相关的人
员有些参考价值。
荧光定量PCR原理等大家都已经很熟了，我就不细说了，主要是写一些有人问过的事，希望写的内容是大家都关心的。
普通PCR与荧光定量PCR技术区别？
简单的讲PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段，用于克隆、测序等实验，后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量，而
荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量，是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验
样本中某一特定的mRNA的含量等。
前些年有人讲过普通PCR后，通过电泳也可以进行定量，其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。近两年没有人再讲这类的话了。
SybrGreen、Taqman、Molecularbeacon、LUX这些方法如何选择？
从实验成本来讲，SybrGreen是最好的，基本上就是普通PCR加上一点SybrGreenI荧光染料即可，其信号强度也很好，还可以进行融解曲线分析等
，但缺点是只能在一个反应管内进行一种PCR反应的检测，另一个问题是非特异性扩增会影响实验结果，当然也有一些技术解决这些问题，后面会讲
到。对于研究人员来讲，如果需要检测的基因很多，而每个反应管中进行一种PCR反应的检测可以满足实验要求，则SybrGreen是最好的选择。
如果需要进行多通道实验，即在一个反应管中进行2种或以上的反应，则要选择其他的方法，最常用的是Taqman、Molecularbeacon，这两种都是探
针的方式，由于增加了探针的特异性，因此其扩增曲线反映的就是特异性产物的扩增曲线，不含有非特异性扩增的成分。因此商业用途的检测试剂盒
大都采用这一技术，以减少非特异性产物造成错误结论的可能性。其缺点在于探针成本较高，有时设计的探针并不合适，有造成损失的可能性。并且
要进行较多的实验条件的优化。这两种探针技术用于商业目的时都有专利问题，据说取得Molecularbeacon的许可权的成本相对较低，但只是据说。
另一种值得一提的是LUX探针，它也可进行多通道实验，但它没有Taqman和Molecularbeacon方法的增加探针特异性的功能，因此只能是一种折中的
方案，如果不考虑多通道实验，则不如SybrGreen法
荧光定量PCR原理等大家都已经很熟了，我就不细说了，主要是写一些有人问过的事，希望写的内容是大家都关心的。
普通PCR与荧光定量PCR技术区别？
简单的讲PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段，用于克隆、测序等实验，后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量，而荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量，是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。
前些年有人讲过普通PCR后，通过电泳也可以进行定量，其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。近两年没有人再讲这类的话了。
SybrGreen、Taqman、Molecularbeacon、LUX这些方法如何选择？
从实验成本来讲，SybrGreen是最好的，基本上就是普通PCR加上一点SybrGreenI荧光染料即可，其信号强度也很好，还可以进行融解曲线分析等，但缺点是只能在一个反应管内进行一种PCR反应的检测，另一个问题是非特异性扩增会影响实验结果，当然也有一些技术解决这些问题，后面会讲到。对于研究人员来讲，如果需要检测的基因很多，而每个反应管中进行一种PCR反应的检测可以满足实验要求，则SybrGreen是最好的选择。
如果需要进行多通道实验，即在一个反应管中进行2种或以上的反应，则要选择其他的方法，最常用的是Taqman、Molecularbeacon，这两种都是探针的方式，由于增加了探针的特异性，因此其扩增曲线反映的就是特异性产物的扩增曲线，不含有非特异性扩增的成分。因此商业用途的检测试剂盒大都采用这一技术，以减少非特异性产物造成错误结论的可能性。其缺点在于探针成本较高，有时设计的探针并不合适，有造成损失的可能性。并且要进行较多的实验条件的优化。这两种探针技术用于商业目的时都有专利问题，据说取得Molecularbeacon的许可权的成本相对较低，但只是据说。
另一种值得一提的是LUX探针，它也可进行多通道实验，但它没有Taqman和Molecularbeacon方法的增加探针特异性的功能，因此只能是一种折中的方案，如果不考虑多通道实验，则不如SybrGreen法.
miRcute miRNA荧光定量检测试剂盒（ SYBR Green）中包含miRNA荧光定量检测的所有试剂，包括2×miRcute miRNA premix和Reverse primer.2×miRcute miRNA premix是专门为miRNA检测而研发的新一代荧光定量检测试剂，该检测试剂采用premix预混系统，包含了优化配比的dNTP、增强 剂、稳定剂等，且其中的DNA polymerase采用的是新一代抗体修饰的热启动技术，保证高特异性和高灵敏度。同时，还加入了 ROX作为内参染料，以使实时荧光定量PCR结果准确可靠。
产品特点
■ 通量高：可用于从一个合成反应的cDNA中 检测多种miRNAs.
■ 特异性：性能优良的抗体热启动PCR聚合酶技术及其优化的反应体系避免了非特异性扩增。
■ 分辨率高：能分辨单碱基差异的miRNA.
■ 灵敏度高：可在低至pg级的总RNA中检测到特异表达的miRNA.
适用范围
■ 对miRNA反转录后的cDNA进行荧光定量 PCR检测
■ 适用于各种类型荧光定量PCR仪
保存条件：4℃避光保存，避免冻结。
