提供商: | 武汉巴菲尔生物 |
服务名称: | 荧光定量PCR-【武汉巴菲尔生物】生物技术服务专家 |
荧光定量PCR 定义:荧光定量PCR是(realtimefluores-cencequantitativePCR,RTFQPCR)是1996年由美国AppliedBiosystems公司推出的一种新定量试验技术,它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析。 荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种:荧光探针和荧光染料。 原理简述如下: 1)TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
1样品RNA的抽提 2样品RNA质量检测 3样品cDNA合成 5制备用于绘制梯度稀释标准曲线的模板 6待测样品的待测基因实时定量PCR 7 电泳检测 |