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제품특징
□ 농도 : 250~1,000 ㎍/ ㎖
□ 보존 -20℃
□ DNA 길이
pSTV28/29 : 2,999 bp
□ 제품설명
pSTV28/29는 pACYC184의 복제기점, Tn9의 chloramphenicol 내성 유전자와 pUC18/19의 multi-cloning site를 갖고 있는 (단, Xba I, Acc I 부위는 사용할 수 없다),β-galactosidase 유전자로부터 재구축한 plasmid vector이다. pUC 계에 비교하여 copy 수가 적으므로 다량으로 발현했을 경우 숙주에 유해한 유전자를 cloning하는데 유효하다. 또 pACYC의 복제 기점을 갖고 있기 때문에 pUC, pBR 등의 plasmid vector와 동일 균체 내에 공존시킬 수 있다.
□ 용도
- 외래 유전자의 α-상보성을 이용한 클로닝과 lac promoter를 이용한 유전자발현- M13 primers를 사용한 DNA 염기서열 결정- Kilo-Sequence용 Deletion Kit (Code 6030)를 사용한 긴 DNA단편의 염기서열 결정
□ pSTV28/pSTV29 의 구조
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荧光定量PCR原理等大家都已经很熟了,我就不细说了,主要是写一些有人问过的事,希望写的内容是大家都关心的。
普通PCR与荧光定量PCR技术区别?
简单的讲PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段,用于克隆、测序等实验,后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量,而荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量,是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。
前些年有人讲过普通PCR后,通过电泳也可以进行定量,其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。近两年没有人再讲这类的话了。
SybrGreen、Taqman、Molecularbeacon、LUX这些方法如何选择?
从实验成本来讲,SybrGreen是最好的,基本上就是普通PCR加上一点SybrGreenI荧光染料即可,其信号强度也很好,还可以进行融解曲线分析等,但缺点是只能在一个反应管内进行一种PCR反应的检测,另一个问题是非特异性扩增会影响实验结果,当然也有一些技术解决这些问题,后面会讲到。对于研究人员来讲,如果需要检测的基因很多,而每个反应管中进行一种PCR反应的检测可以满足实验要求,则SybrGreen是最好的选择。
如果需要进行多通道实验,即在一个反应管中进行2种或以上的反应,则要选择其他的方法,最常用的是Taqman、Molecularbeacon,这两种都是探针的方式,由于增加了探针的特异性,因此其扩增曲线反映的就是特异性产物的扩增曲线,不含有非特异性扩增的成分。因此商业用途的检测试剂盒大都采用这一技术,以减少非特异性产物造成错误结论的可能性。其缺点在于探针成本较高,有时设计的探针并不合适,有造成损失的可能性。并且要进行较多的实验条件的优化。这两种探针技术用于商业目的时都有专利问题,据说取得Molecularbeacon的许可权的成本相对较低,但只是据说。
另一种值得一提的是LUX探针,它也可进行多通道实验,但它没有Taqman和Molecularbeacon方法的增加探针特异性的功能,因此只能是一种折中的方案,如果不考虑多通道实验,则不如SybrGreen法.
鼓励性加分
荧光定量PCR原理等大家都已经很熟了,我就不细说了,主要是写一些有人问过的事,希望写的内容是大家都关心的。
普通PCR与荧光定量PCR技术区别?
简单的讲PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段,用于克隆、测序等实验,后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量,而荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量,是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。
前些年有人讲过普通PCR后,通过电泳也可以进行定量,其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。近两年没有人再讲这类的话了。
SybrGreen、Taqman、Molecularbeacon、LUX这些方法如何选择?
从实验成本来讲,SybrGreen是最好的,基本上就是普通PCR加上一点SybrGreenI荧光染料即可,其信号强度也很好,还可以进行融解曲线分析等,但缺点是只能在一个反应管内进行一种PCR反应的检测,另一个问题是非特异性扩增会影响实验结果,当然也有一些技术解决这些问题,后面会讲到。对于研究人员来讲,如果需要检测的基因很多,而每个反应管中进行一种PCR反应的检测可以满足实验要求,则SybrGreen是最好的选择。
如果需要进行多通道实验,即在一个反应管中进行2种或以上的反应,则要选择其他的方法,最常用的是Taqman、Molecularbeacon,这两种都是探针的方式,由于增加了探针的特异性,因此其扩增曲线反映的就是特异性产物的扩增曲线,不含有非特异性扩增的成分。因此商业用途的检测试剂盒大都采用这一技术,以减少非特异性产物造成错误结论的可能性。其缺点在于探针成本较高,有时设计的探针并不合适,有造成损失的可能性。并且要进行较多的实验条件的优化。这两种探针技术用于商业目的时都有专利问题,据说取得Molecularbeacon的许可权的成本相对较低,但只是据说。
另一种值得一提的是LUX探针,它也可进行多通道实验,但它没有Taqman和Molecularbeacon方法的增加探针特异性的功能,因此只能是一种折中的方案,如果不考虑多通道实验,则不如SybrGreen法.

