请使用支持JavaScript的浏览器! Abbexa抗体 Abbexa多克隆抗体,A1M:::Alpha-1-Microglobulin/Bikunin Precursor:::AMBP:::Inter-Alpha-Trypsin Inhibitor Light Chain:::Growth-Inhibiting Protein 19:::Uronic-Acid-Rich Protein:::Protein HC:::Trypstatin:::Uristatin:::Bikunin:::ITIL:::HCP:::IATIL:::ITILC:::EDC1:::HI30:::UTI:::I蚂蚁淘商城
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Abbexa/AMBP Assay Kit/R1: 90ml\u00d71 R2: 30ml\u00d71/abx098467-R1: 90ml\u00d71 R2: 30ml\u00d71
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Alpha-1 Microglobulin Assay Kit is an Assay Kit by Latex Enhanced Method.This product is used to determine α1 - MG in human serum or plasma.
The Alpha - 1 - microglobulin in the sample meets its corresponding antibody combined with latex particles in a liquid buffer to occur agglutination reaction and produce turbidity in the linear range. The turbidity is proportional to the concentration of Alpha - 1 - m icroglobulin in the sample with the presence of an appropriate amount of its corresponding antibodies. Under a certain wavelength, Alpha - 1 - microglobulin concentration in the sample can be calculated by comparing the calibrator result with same processing.

R1: Reagent CompositionR2: Reagent Composition
Tris Buffer → 100 mmol/LLatex particle suspensions → Appropriate
PEG → 5 g/L
Preservatives → Appropriate

Abbexa是一家致力于为生命科学研究、药物研发及生物技术公司提供优质抗体、蛋白及检测试剂盒等产品的高科技生物技术公司。基于剑桥大学研发技术优势,Abbexa提供包括一抗二抗、纯化蛋白、ELISA试剂盒、各种酶类及其它多种试剂与研究工具的大量生命科学研究产品。

目前Abbexa的产品涵盖单克隆抗体多克隆抗体、纯化蛋白质及生物试剂,此外,为满足研发人员特殊的实验需要,Abbexa还提供抗体/多肽定制服务。严格的质控标准保证了Abbex产品的高性能,如您对产品不满意,Abbexa将直接提供退/换货服务


CLIAKits 化学发光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA)

RNAInterferenceProducts RNA干扰试剂

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。基因沉默,主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录;PTGS是启动了细胞质内靶mRNA序列特异性的降解机制。有时转基因会同时导致TGS和PTGS。

由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,(长度超过三十的dsRNA会引起干扰素毒性)所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗领域。

1.           RNAi抑制转座子活性

两方面的证据提示转座子活性的抑制与siRNA有关

①发现蠕虫mut-7基因参与RNAi并且与转座子的转座抑制有关;

②在果蝇中,参与RNAi的RNA解螺旋酶Spindle-E的突变将导致该基因引起的基因沉默的缺失,同时提高了反转录转座子活性。

2.           RNAi抵御病毒感染

在拟南芥中研究转基因引起基因沉默时发现,sgs2/sde1基因突变的拟南芥对病毒的侵染表现出高度的敏感性。

3.           RNAi参与异染色质的形成和维持

Hall等研究表明,着丝粒同源重复序列和RNAi组分一起正负调节着异染色质的形成并共同促使异染色质组装成核;Vople等在敲除裂殖酵母(S.pombe)的RNAi途径基因(如Argonaute、Dicer、RDRP)时发现异染色质转录得到的dsRNA可以在RNAi途径的参与下,加工成siRNA,siRNA募集异染色质蛋白1(HP1),然后靶向性引起相应异染色质区域的转基因沉默。

4.           RNAi参与机体的发育调控及生理代谢

RNAi只抑制转录后的基因,所以RNAi在生物体发育学研究中具有优势。Chuang等用RNAi技术进一步证实了AG、CLV3、AP1、PAN等已知功能基因在拟南芥花发育过程中的功能。在RNAi过程中形成的RISC复合物可根据不同情况分别利用siRNA或stRNA行使不同的功能,但最终均导致特定基因沉默。


IsotypeControl

同型对照

同型对照(IsotypeControl),使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色。

同型对照

同型对照的主要目的是确定一抗的结合是特异性的,而不是非特异性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用。还可以用来竞争性的结合抗体,与功能阻断抗体发挥同样的功能。

同型对照要与一抗的来源,Ig分型和标记完全一致。

如果一抗是多抗,可以用annormalserum(与一抗相同的正常血清)(mustbethesamespeciesasprimaryantibody)。Thiscontroliseasytoachieveandcanbeusedroutinelyinimmunohistochemicalstaining.这个可以咨询试剂商。同型对照为免疫荧光标记中的阴性对照。由于荧光标记单抗的组来源不同,应选用相同来源的未标记单抗作为同型对照来调整背景染色。举个例子:比如检测一抗为单抗的mouseantiratCD11b,cloneOX-42purifiedIgG,那么它的isotype是mouseIgG2a,所以可以用purified(纯化的)mouseIgG2a来做OX-42的同型对照(IsotypeControl)。一般的的生物技术公司和国内的代理都有出售。

同型对照:是指与MoAb相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亚类,若使用直接免疫荧光染色法,同型对照也应标记荧光色素,如IgG1FITC、IgG2a、PE等。主要考虑了细胞的自发荧光、FC受体介导的抗体结合和非特异性抗体结合等影响因素。此外,同型对照与MoAb所标记的荧光色素、浓度、F:P比值(标记的荧光色素与免疫球蛋白分子的比值)应该相同为最佳,这对准确设定阴性与阳性细胞的界标有重要意义,切忌使用与MoAb不相匹配的同型对照,最好为同一实验室、采用相同工艺或方法制备(如同一品牌)的产品。


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2018-01-23
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不清楚这个易瑞什么来路,目前的基因检测主要有2类,一类是通过SNP位点(基本上是以SNP芯片为手段,也有针对单基因或少数几个基因位点的使用的是PCR加测序或分型的方式),还有一类是对全基因组进行测序,一般目前采用的是Hiseq X-ten测序。
价格上第一种如果是几百万个SNP位点的一般是1000元左右,如果是单基因或少数几个基因的也就几十块钱。第二种全基因组测序的一般测序深度30X以上,90G左右数据,测序费用大概在8000左右,分析snp和Indel的变异费用在1000左右。
但是,目前完全不建议做。因为SNP的变异与疾病和表型的研究完全不够充分。单基因的遗传疾病根本不用测序自己就看出来了,多基因的复杂疾病基因遗传因素所占比例有限,只是一个相关概率问题,而且即便知道了也没什么手段,早点拿到的数据也是一堆ATCG和SNP变异和所谓风险值。
还有测序和数据分析费用在飞速下降,目前上万的全基因组测序同样的数据可能1年后只用几百块,真正有效的解读也还要等到几年后,没必要花这个冤枉钱。
但是以下人群有这个切实需要:肿瘤的突变分型(目前并没有特别靠谱的高通量测序产品,主要还是基于荧光定量PCR的检测试剂盒),新生儿的遗传病筛查(看个人接受程度)
迪澳的对虾白斑综合症病毒核酸检测试剂盒(恒温荧光法)能否能在荧光定量PCR仪上使用?还是一定要用恒温荧光检测仪?
ABI简直就是垃圾,垃圾在用户界面让人很不理解,我们实验室有一台伯乐cfx96,一台7500,一台3000P,还有两台博日的国产,7500是最不受欢迎的,要相信罗氏是做分子诊断的老祖宗,拿他跟ABI比,简直羞辱罗氏了,不要以为都是白人的东西都一样,差别大了!
人巨细胞病毒核酸检测试剂盒符合哪些国家标准
:探讨人巨细胞病毒(HCMV)核酸定量检测试剂(PCR‐荧光探针法)的临床使用及初步评价。
荧光定量PCR详细流程和问题解析123
我就是大仙儿2021-07-28
前一段时间在百度中搜索,发现多年前写的一个关于荧光定量PCR技术的PPT有很多人看过或引用过,考虑到自己作荧光定量PCR工作已经了五年了,做的实验以及解决的问题远比五年前多了,因此利用过年的时间,写点荧光定量PCR实验中的一些注意事项及感想,无论对错,都是希望对相关的人员有些参考价值。
荧光定量PCR原理等大家都已经很熟了,我就不细说了,主要是写一些有人问过的事,希望写的内容是大家都关心的。

普通PCR与荧光定量PCR技术区别?
简单的讲PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段,用于克隆、测序等实验,后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量,而荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量,是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。

前些年有人讲过普通PCR后,通过电泳也可以进行定量,其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。近两年没有人再讲这类的话了。

SybrGreen、Taqman、Molecularbeacon、LUX这些方法如何选择?

从实验成本来讲,SybrGreen是最好的,基本上就是普通PCR加上一点SybrGreenI荧光染料即可,其信号强度也很好,还可以进行融解曲线分析等,但缺点是只能在一个反应管内进行一种PCR反应的检测,另一个问题是非特异性扩增会影响实验结果,当然也有一些技术解决这些问题,后面会讲到。对于研究人员来讲,如果需要检测的基因很多,而每个反应管中进行一种PCR反应的检测可以满足实验要求,则SybrGreen是最好的选择。

如果需要进行多通道实验,即在一个反应管中进行2种或以上的反应,则要选择其他的方法,最常用的是Taqman、Molecularbeacon,这两种都是探针的方式,由于增加了探针的特异性,因此其扩增曲线反映的就是特异性产物的扩增曲线,不含有非特异性扩增的成分。因此商业用途的检测试剂盒大都采用这一技术,以减少非特异性产物造成错误结论的可能性。其缺点在于探针成本较高,有时设计的探针并不合适,有造成损失的可能性。并且要进行较多的实验条件的优化。这两种探针技术用于商业目的时都有专利问题,据说取得Molecularbeacon的许可权的成本相对较低,但只是据说。

另一种值得一提的是LUX探针,它也可进行多通道实验,但它没有Taqman和Molecularbeacon方法的增加探针特异性的功能,因此只能是一种折中的方案,如果不考虑多通道实验,则不如SybrGreen法.
鼓励性加分


荧光定量PCR详细流程和问题解析

普通PCR与荧光定量PCR技术区别?

简单的讲PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段,用于克隆、测序等实验,后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量,而荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量,是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。

前些年有人讲过普通PCR后,通过电泳也可以进行定量,其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。近两年没有人再讲这类的话了。


SybrGreen、Taqman、Molecularbeacon、LUX这些方法如何选择?从实验成本来讲,SybrGreen是最好的,基本上就是普通PCR加上一点SybrGreenI荧光染料即可,其信号强度也很好,还可以进行融解曲线分析等,但缺点是只能在一个反应管内进行一种PCR反应的检测,另一个问题是非特异性扩增会影响实验结果,当然也有一些技术解决这些问题,后面会讲到。对于研究人员来讲,如果需要检测的基因很多,而每个反应管中进行一种PCR反应的检测可以满足实验要求,则SybrGreen是最好的选择。

如果需要进行多通道实验,即在一个反应管中进行2种或以上的反应,则要选择其他的方法,最常用的是Taqman、Molecularbeacon,这两种都是探针的方式,由于增加了探针的特异性,因此其扩增曲线反映的就是特异性产物的扩增曲线,不含有非特异性扩增的成分。因此商业用途的检测试剂盒大都采用这一技术,以减少非特异性产物造成错误结论的可能性。其缺点在于探针成本较高,有时设计的探针并不合适,有造成损失的可能性。并且要进行较多的实验条件的优化。这两种探针技术用于商业目的时都有专利问题,据说取得Molecularbeacon的许可权的成本相对较低,但只是据说。

另一种值得一提的是LUX探针,它也可进行多通道实验,但它没有Taqman和Molecularbeacon方法的增加探针特异性的功能,因此只能是一种折中的方案,如果不考虑多通道实验,则不如SybrGreen法

选择单通道实验还是多通道实验?

这是要根据实验需要来选择的,如果有一个、两个或是三个基因要进行比较,并用看家基因进行对照,可以考虑选择多通道实验。多通道实验的好处是可以消除样本加样的误差。但要克服的困难也比较多,一是条件的优化比较麻烦,即多种PCR反应以及探针要在同一个反应条件下进行,并且效率都要比较高,另一个困难是要求相互之间没有干扰,因为干扰会影响到实验结果。还有一个困难是当一个基因的模板数显著大于其他基因时,因为共用核苷酸等资源的原因,会让模板数少的基因的定量值变小或变为零。因此一般两通道的实验比较多些,即一个基因进行多样本比较,用看家基因进行对照。

可以看出,如果单通道实验可以解决问题,就不要选择多通道实验了。三个以上的基因进行比较时就最好用单通道。因为一般的仪器最多也只有四个通道,就是有更多的通道,实验条件的优化也是足够麻烦了。

双通道实验时如何克服反应条件、干扰以及模板数差别很大等困难?对于反应条件的优化,可通过两个单独实验的标准曲线来优化,主要是复性温度,可用PCR仪的温度梯度功能来选择,然后找到一个合适的复性温度。对于如何确定是否存在相互干扰,则要通过两个独立的单通道实验与双通道实验的结果进行比较,如果差别不大,则表明没有干扰。至于模板数差别很大的问题,可以通过降低引物浓度的方法来实现,即primerlimited,在一般的PCR反应中,引物的浓度是足够高的,基本上可以将反应液中的核苷酸全部消耗尽,在优化引物浓度时,用不同的引物浓度进行实验,找到不影响反应的C值的最低引物浓度。这样在实际反应中,模板数高的基因在引物耗尽后,反应液中仍然有足够的核苷酸等用于另一个基因的反应。


引物设计中的几个注意事项

1、引物设计最好用相关的软件来进行设计,考虑引物自身回折、错配、引物二聚体、复性温度、产物变性温度等问题,其中产物的变性温度是大家不太关心的问题,但有些产物在一般的95度条件下不能充分解链,会严重影响实验结果。2、引物所设计的片断一定要有足够的特异性,选择好片段后,最好到互联网中进行相关的搜索,看在样本的基因组有没有相拟的基因以及假基因等,如果有,则可选择特异性更高的区域。

3、在进行mRNA表达量的定量,可以在引物设计时考虑基因组的污染问题,即在引物设计时让两个引物跨一个内含子,这样基因组污染所造成的扩增可以区别出来,或因为片段过大而不能扩增

4、由于mRNA表达量的定量有一个逆转录的过程,如果逆转录是用poly(T)作引物,则设计的片段尽量靠近poly(A),以免逆转录的效率影响到实验结果。如果用特异性引物进行逆转录,则要考虑引物区是否存在RNA二级结构的问题5、产物片段的大小:定量PCR一般产生片段都不大,不会超过600bp。SybrGreen法一般选择250-600bp,过大会影响到PCR扩增的效率,过小则很难通过融解曲线与引物二聚体分开,但并不是绝对的。Taqman法的扩增片段都很小,几十或是100多,这是其原理造成的。Molecularbeacon法对片段大小的要求不高,只要不是太长即可。

SybrGreen法的实验策略:

实验可分为三个阶段,即实验条件的优化、预实验和正式实验。一、实验条件的优化阶段,这一阶段是最花时间的,

1、要找到一个阳性的模板,可以是克隆有基因质粒、强阳性样本或纯化的PCR产物等。有了阳性的模板才能进行最基本的定量扩增实验,如果有普通PCR的实验条件,也可以此为基础进行实验。

2、扩增出的产物要通过电泳方法确定其大小,以确认定量PCR扩增的产物是你的目的基因,有些用户就发生过优化了几天的条件才发现扩增片段的大小不对,不是自己想要的基因。当然,能测个序什么的最好。并通过融解曲线实验来确定产生的Tm值以及所用的变性温度是否已经足够,个别情况下会出来解键不充分的现象。

3、有了基本的PCR条件后,要将阳性模板进行倍比稀释,一般用10倍稀释。将稀释的模板带上阴性对照,分成多份进行温度梯度实验,对复性温度进行优化,以找出复性温度范围,复性温度最好能满足以下条件:高中低模板浓度下PCR扩增效率都很高、阴性模板没有扩增。选择满足条件的中间温度,这样可以提高实验的稳定性,不会因为样本管在加热模块中的位置不同而影响实验结果。

4、如果找不到合适的条件,如引物二聚体过多,可对引物浓度、Mg2+离子浓度、DMSO含量等进行优化,然后再进行复性温度梯度实验。其中Mg2+离子浓度、DMSO含量都会影响Tm值以及所用的变性温度。

二、预实验阶段

按照优化的条件对所需要分析的样本做一个没有重复的实验,每个样本做一个10倍和100倍稀释的实验,预实验的目的主要有两个,一是了解样本的模板浓度范围,如果有样本的模板浓度在标准曲线之外,如过高或过低,则可能要对标准曲线进行重新优化,当然,如果过高和过低不影响你的实验结论则可定为高于多少或低于多少,直接进行外推是不科学的。另一个目的看样本中是否有PCR抑制物的影响,如果每个样本的定量结果与其10及100倍稀释后的样本的结果相同,则表明没有抑制物的影响,如果不同,如原倍结果为零,而10及100倍稀释后的样本的结果为阳性,则表明样本中PCR抑制物浓度较高。可用其10及100倍稀释后的样本进行定量。

有几个用户发现过实验为阴性的样本在其10及100倍稀释后的样本为阳性的,也许有更多用户没有进行这样的实验,得到了错误的结论。因为样本RNA的提取试剂中经常有抑制PCR反应的物质,清洗不干净就会影响到定量PCR反应。

三、正式实验阶段

然后就可以进行正式实验了,只需要将每个样本作三个或更多的重复即可以了。有抑制物的样本先进行稀释,计算浓度时不要忘记就行了。最后就可以进行实验结果分析了,个别样本中离群的数值可以删除。

SybrGreen法的注意事项


1、最好按照上面提到策略进行实验,以免造成不必要重复实验,从而降低实验成本

2、SybrGreenI一般是先将母液用DMSO进行稀释100倍,最终的使用浓度为4000-10000分之一。可能不同的SybrGreenI母液的稀释倍数不同,可通过实验来证明,但高浓度的SybrGreenI肯定会影响PCR反应。另外用水稀释后的SybrGreenI保存的时间很短,一般1周后就不能用了。DMSO似乎反复冻融会影响性能,但原因不明。3、在对引物浓度、Mg2+离子浓度、DMSO含量等进行优化后仍得不到满意的结果,特别是引物二聚体很多时,可以考虑更换引物,因为引物成本低,而优化实验成本很高。

4、当有少量引物二聚体影响荧光结果时,可以提高荧光读板时的温度来消除引物二聚体的影响,如将读板时的温度提高到82度,此时引物二聚体已经解链而产物没有解链。但引物二聚体浓度很高时会严重影响PCR反应,消除引物二聚体的影响也没有用。有荧光定量PCR扩增的效率都接近于100%,可以通过实验来证明。但大多数用户并没有进行这样的实验就直接用2ΔΔC(t)来计算了。这是错误的,会得到错误结论。

6、无论是使用自配的试剂还是用商业的荧光定量试剂盒,最好买够试剂,以免进行预实验或正式实验时没有试剂而必需采用其他试剂,由于不同试剂的缓冲液成份有较大差别,如有的试剂中含有DMSO及Mg2+离子等,可能会影响到实验结果,甚至要重新进行实验条件的优化。

7、不要在管盖上写字,原因很明显,但有些用户习惯了写字,后来再擦掉,也会对实验有些影响。

8、最好使用高质量的PCR管,低质量管的管间差可能会很大。

9、每次实验一定要有阳性对照和阴性对照,以免出现问题时找不到原因。10、在样本很珍贵时可以采用对样本进行稀释的方式进行定量。只要浓度不是太低,理论来讲对稀释是不会影响实验结果的。

其他方法也可以采用类拟的策略,以节约成本,提高效率。

想到的内容就这些了,希望大家多批评指正。

5、大家都知道进行绝对定量需要标准曲线,有些用户认为进行相对定量



通基扩增技术证明孩体内存EB病毒特异遗传物质片段数字表示相染量数字0代表绝染考虑设备基线波都设定参考卡切值即参考值(比1000我记)3.68乘104说明孩染EB病毒
OneShine SybrGreen preMix试剂盒在研发之初就考虑到了一般科研环境中方方面面的影响,例如我们就光照强度、光照时间对本产品的影响做了严苛的实验论证,得到1ml本产品盛装于1.5ml离心管中放置在2000Lux光照强度下可以保存12h,超过12h产品性能则会下降。OneShine SybrGreen preMix这款试剂盒除了价格适中外,还主要有以下优点:1、适用于Real Time PCR反应,可以快速、准确地对目的基因进行定量检测。2、在2×OneShine SybrGreen preMix中,预先混有SybrGreen,PCR体系配制时只需入模板、引物、ddH2O即可,操作方便快捷。3、含有更耐高温并持续稳定的DNA Polymerase,可以维持更多的循环数,提供了选择循环数更大的空间。更大的Ct值选择范围就意味着可以支持微量目的基因检测,检测范围fM-nM。4、反应的Buffer更适合,使反应的基线更水平,无荧光污染信号。使线性期更陡峭,避免了Ct值的无效浮动。使平台期更平直。也确保了引物与模板能够更特异地结合。5、SybrGreen更耐高温更足量,确保只要扩增反应在进行,目的DNA双链在增加,就有线性强度的荧光产生。6、dNTPs更足量,确保反应有更高的平台期荧光信号。7、Mg2+浓度更适合,确保线性期有爆发式的目的DNA片段合成,提高了线性期反应体系的扩增系数和线性期的长度。8、更高的仪器适配性,SybrGreen染料可以被各大主流仪器的激发光所激发,产生明亮的荧光信号,有利于仪器对信号的捕捉和处理。我们的产品与市面上目前常见的一种产品相比较有如下区别:ROC公司的产品没有熔解温度,或者熔解温度太高。但是ROC公司的产品Ct值出现略早,这是因为ROC公司使用了一种小分子量的DNA聚合酶,这种酶与模板和引物的结合较快和较松散,但是扩增的效率和扩增的特异性就不能保证了,类似于温水煮青蛙不温不火的;这种酶还有一个弱点就是不耐冻融。我们使用的是Taq酶,是一种分子量较大的DNA聚合酶,这种酶与模板和引物结合比较慢,但是慢工出细活,这种酶的特异性较好,一旦激活便呈现爆发式的扩增,类似于不鸣则已一鸣惊人。我们产品熔解温度是ROC公司不可比拟的,线性范围和斜率也是ROC公司不可比拟的。详见下图:向左转|向右转
miRNA第一链合成试剂盒miRNA荧光定量PCR检测试剂盒2 x miRNA Loading Dye你看看 提供技术支持本数据来源于百度地图,最终结果以百度地图最新数据为准。
要做荧光定量PCR了,这四个月来收集了十多例标本,手术切除的组织立即放入液氮 然后-80°保存, 准备慢慢来提RNA如果这种情况存放 可以吗 ?还是有了组织 就赶紧提RNA
实时定量的引物设计要求比较高,可以按普通引物设计的方法来做,但是设计时要注意扩增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之间。同时要保证这对引物有绝对的特异性,因为要是产生非特异性扩增的话,就不能准确的计量模板量了