The CycleavePCR Core Kit is designed exclusively for real-time PCR with cycling probe detection. This kit combines the quick and quantitative nature of real-time PCR with the highly specific detection of cycling probe technology. This enables accurate, quick detection and quantification of a target gene or SNPs (single nucleotide polymorphisms). This kit can be used with the SmartCycler System or SmartCycler II System (Cepheid) and other instruments.
The CycleavePCR Core Kit is designed exclusively for real-time PCR with cycling probe detection. This kit combines the quick and quantitative nature of real-time PCR with the highly specific detection of cycling probe technology. This enables accurate, quick detection and quantification of a target gene or SNPs (single nucleotide polymorphisms). This kit can be used with the SmartCycler System or SmartCycler II System (Cepheid) and other instruments.
The Provirus Copy Number Detection Primer Set, Human (for Real Time PCR) is used in combination with the CycleavePCR Core Kit to detect the copy number of proviruses integrated into human genomic DNA. Because the PCR amplification region for this kit is located in the packaging signal of MLV (murine leukemia virus), the provirus copy number can be measured in normal human cells which have been transduced with MLV-based retroviral vectors. This product allows you to easily obtain the average provirus copy number without having to use the conventional practice of cloning MLV-transduced cells and then performing a Southern blot.
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做的实验以及解决的问题远比五年前多了,因此利用过年的时间,写点荧光定量PCR实验中的一些注意事项及感想,无论对错,都是希望对相关的人
员有些参考价值。
荧光定量PCR原理等大家都已经很熟了,我就不细说了,主要是写一些有人问过的事,希望写的内容是大家都关心的。
普通PCR与荧光定量PCR技术区别?
简单的讲PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段,用于克隆、测序等实验,后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量,而
荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量,是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验
样本中某一特定的mRNA的含量等。
前些年有人讲过普通PCR后,通过电泳也可以进行定量,其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。近两年没有人再讲这类的话了。
SybrGreen、Taqman、Molecularbeacon、LUX这些方法如何选择?
从实验成本来讲,SybrGreen是最好的,基本上就是普通PCR加上一点SybrGreenI荧光染料即可,其信号强度也很好,还可以进行融解曲线分析等
,但缺点是只能在一个反应管内进行一种PCR反应的检测,另一个问题是非特异性扩增会影响实验结果,当然也有一些技术解决这些问题,后面会讲
到。对于研究人员来讲,如果需要检测的基因很多,而每个反应管中进行一种PCR反应的检测可以满足实验要求,则SybrGreen是最好的选择。
如果需要进行多通道实验,即在一个反应管中进行2种或以上的反应,则要选择其他的方法,最常用的是Taqman、Molecularbeacon,这两种都是探
针的方式,由于增加了探针的特异性,因此其扩增曲线反映的就是特异性产物的扩增曲线,不含有非特异性扩增的成分。因此商业用途的检测试剂盒
大都采用这一技术,以减少非特异性产物造成错误结论的可能性。其缺点在于探针成本较高,有时设计的探针并不合适,有造成损失的可能性。并且
要进行较多的实验条件的优化。这两种探针技术用于商业目的时都有专利问题,据说取得Molecularbeacon的许可权的成本相对较低,但只是据说。
另一种值得一提的是LUX探针,它也可进行多通道实验,但它没有Taqman和Molecularbeacon方法的增加探针特异性的功能,因此只能是一种折中的
方案,如果不考虑多通道实验,则不如SybrGreen法
荧光定量PCR原理等大家都已经很熟了,我就不细说了,主要是写一些有人问过的事,希望写的内容是大家都关心的。
普通PCR与荧光定量PCR技术区别?
简单的讲PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段,用于克隆、测序等实验,后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量,而荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量,是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。
前些年有人讲过普通PCR后,通过电泳也可以进行定量,其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。近两年没有人再讲这类的话了。
SybrGreen、Taqman、Molecularbeacon、LUX这些方法如何选择?
从实验成本来讲,SybrGreen是最好的,基本上就是普通PCR加上一点SybrGreenI荧光染料即可,其信号强度也很好,还可以进行融解曲线分析等,但缺点是只能在一个反应管内进行一种PCR反应的检测,另一个问题是非特异性扩增会影响实验结果,当然也有一些技术解决这些问题,后面会讲到。对于研究人员来讲,如果需要检测的基因很多,而每个反应管中进行一种PCR反应的检测可以满足实验要求,则SybrGreen是最好的选择。
如果需要进行多通道实验,即在一个反应管中进行2种或以上的反应,则要选择其他的方法,最常用的是Taqman、Molecularbeacon,这两种都是探针的方式,由于增加了探针的特异性,因此其扩增曲线反映的就是特异性产物的扩增曲线,不含有非特异性扩增的成分。因此商业用途的检测试剂盒大都采用这一技术,以减少非特异性产物造成错误结论的可能性。其缺点在于探针成本较高,有时设计的探针并不合适,有造成损失的可能性。并且要进行较多的实验条件的优化。这两种探针技术用于商业目的时都有专利问题,据说取得Molecularbeacon的许可权的成本相对较低,但只是据说。
另一种值得一提的是LUX探针,它也可进行多通道实验,但它没有Taqman和Molecularbeacon方法的增加探针特异性的功能,因此只能是一种折中的方案,如果不考虑多通道实验,则不如SybrGreen法.
miRcute miRNA荧光定量检测试剂盒( SYBR Green)中包含miRNA荧光定量检测的所有试剂,包括2×miRcute miRNA premix和Reverse primer.2×miRcute miRNA premix是专门为miRNA检测而研发的新一代荧光定量检测试剂,该检测试剂采用premix预混系统,包含了优化配比的dNTP、增强 剂、稳定剂等,且其中的DNA polymerase采用的是新一代抗体修饰的热启动技术,保证高特异性和高灵敏度。同时,还加入了 ROX作为内参染料,以使实时荧光定量PCR结果准确可靠。
产品特点
■ 通量高:可用于从一个合成反应的cDNA中 检测多种miRNAs.
■ 特异性:性能优良的抗体热启动PCR聚合酶技术及其优化的反应体系避免了非特异性扩增。
■ 分辨率高:能分辨单碱基差异的miRNA.
■ 灵敏度高:可在低至pg级的总RNA中检测到特异表达的miRNA.
适用范围
■ 对miRNA反转录后的cDNA进行荧光定量 PCR检测
■ 适用于各种类型荧光定量PCR仪
保存条件:4℃避光保存,避免冻结。