【应用笔记】- 知否知否，如何在WB实验中调整内参？
【应用笔记】- 知否知否，如何在WB实验中调整内参？
北京德泉发布时间：2019/01/07 15:55 点击: 加载中..
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《知否》正在如火如荼的上演着，小编看得真是热火朝天，真心圈粉盛家主母王大娘子，做起实验来更加有劲了呢。言归正传，继上次给大家介绍了为什么要做内参后，这次咱们唠唠调内参那些事。
大家心目中的理想的内参是这样吧![](\"https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/3d37b51b-696d-4500-b39d-93b7d7abe30a.jpg\")
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但是刚入门的你是不是会遇到这样的内参
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这样的结果宝宝是崩溃的：
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这种问题的可能性有以下几个：
1
可能你抽提蛋白后没有做好定量，导致蛋白的上样量不一样。在这种情况下，按照内参的灰度值来调整上样量就行。
2
当你的内参特别深时：
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这时候就要注意啦，其实这时候是没有意义的，WB的定量/半定量分析是有范围的，如果做标曲的话，应该是这样：
我们应该使上样量尽量在线性范围内，浓度不能太高，这时候就应该降低上样量。
3
如果你尝试了很多次，在蛋白定量很OK的情况下，内参还是不齐![](\"https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/2b030286-471c-47f6-8b7b-ae38576f68ab.jpg\")
那就很有可能是你选的内参表达量本身就不一致，需要考虑换内参啦，你是不是一直都选Actin或Tubulin之类的呀，其实应该根据我们的实验来进行选择内参，可以参考下表：
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如果你跑出来的内参差异不大的话，接下来就可以进行归一化处理/灰度值分析喽![](\"https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/5c09e20e-39ff-4dca-86d8-50e97c5abb4f.jpg\")
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这样就皆大欢喜喽，就可以去分析我们的实验/处理效果啦啦![](\"https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/9827b48c-0fca-4c63-915e-77f1aad9337e.jpg\")
在此，小编要告诉大家一个好消息（此处应有掌声![](\"https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/cdb57354-b962-4df4-b0be-ccc4af8dee47.jpg\")
）
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归一化/灰度值这一步操作有GE Amersham Imager™ 680软件帮我们代劳啦~我们只需要点击分析即可。
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Amersham Imager™680系列产品是ImageQuant™LAS 4000和Amersham Imager™600系列的升级，用于凝胶和膜中蛋白质与DNA样品的数字图像的检测与分析。检测范围包括：化学发光、荧光（紫外、红、率、蓝）和白光成像。该产品将继续搭载fujifilm®先进的光学系统用户界面直观，结合GE在蛋白免疫印迹应用方面的专业知识，提供卓越出众的图像质量。
而且还可以同时成像彩色marker耶
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经过本次小编的讲解，你是否对调整内参的知识有了更多了解呢？如果还是对调内参有所疑惑，这里还有往期文章可以帮你解答相关问题哦。
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【应用指南】如何利用内参进行定量分析
当然，除了调内参的相关知识以外，我们还会跟大家分享更多实验猿的日常。想了解更多知识及产品资料，欢迎关注我们的微信公众号，扫描以下二维码，可以查看更多应用笔记文章。
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美国GE AI 600系列超灵敏多功能成像仪
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