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Nature子刊发表单个外泌体高通量多参数分析法重磅文章

2024-04-28

越来越多的研究揭示外泌体参与几乎所有的生理代谢过程，尤其在重大疾病的发生发展过程中扮演着重要角色，使其在临床诊断和治疗方面展现出了极具前景的研究价值。目前外泌体的检测方法主要有扫描电子显微镜、纳米微粒追踪分析术（NTA）、ELISA和流式分析法等，由于通量高、用时短、操作简单，ELISA和流式分析法是比较常用的方法。ELISA方法容易受其他可溶性抗原的干扰，而且无法知道外泌体的大小、数量等信息；流式分析法不仅可以检测外泌体的大小、数量，而且通过特异的荧光标记可以检测外泌体的来源，将外泌体进行分类，因此，流式分析法理论上是进行外泌体快速、高通量、多参数检测的最优选择。

近日来自美国凯斯西储大学的科学家，成功摸索出一种更适合单个外泌体快速高通量分析的超灵敏纳米流式分析法。研究人员充分考虑到流式分析法易于实现快速高通量的优点以及传统流式分析外泌体的限制（检测下限200-500nm的散射光灵敏度不适合检测30-150nm的外泌体；荧光标记检测背景噪音高；依赖于抗体微珠的外泌体检测法无法分析外泌体绝对数量以及单个外泌体表型），通过借助超灵敏纳米流式分析仪Apogee A50 Micro,克服以上限制因素，完美地实现了细胞系上清和人体组织外泌体的高通量多参数快速分析检测：不仅能够利用Apogee A50 Micro超灵敏的散射光分辨率检测到100nm左右的外泌体，同时也利用其极佳的荧光检测灵敏度完成单个外泌体的表面蛋白分析。这种高通量单个外泌体多参数纳米流式分析法，已为树立外泌体检测新趋势奠定了基础，将为相关研究人员带来极大的便利，也必将对重大疾病外泌体标记物的发掘过程做出卓越的贡献。

伯齐科技近年把Apogee纳米流式引入国内，北京、上海的重点单位先后购入该系统以作外泌体、微生物和纳米材料等微颗粒应用。

图1，超灵敏纳米流式Apogee A50 Micro检测外泌体无荧光标记的外泌体散射光强度，与100nm的二氧化硅微球散射强度相当，提示Apogee A50 Micro仅利用散射光即可检测到大小约100nm的单个外泌体。

图2，MDA-MB-231和 MCF-12A细胞源性外泌体检测利用图1的检测参数设置，结合CD44荧光标记，分析MDA-MB-231和 MCF-12A细胞系CD44表达阳性外泌体的丰度差异。

图3，超灵敏纳米流式Apogee A50 Micro检测人体血液外泌体利用图1的检测参数设置，结合CD47荧光标记，分析人体血液中与乳腺癌相关的CD47表达阳性外泌体。

参考文献：

Kibria G, Ramos EK, Lee KE, et al. A rapid, automated surface protein profiling of single circulating exosomes in human blood.[J]. Scientific reports, 2016, 6.

Apogee超灵敏纳米流式分析仪简介：超灵敏纳米流式分析仪是英国Apogee Flow厂家研发，它独有的专行光学设计使其可检测最小80nm的小颗粒，并拥有10nm的分辨率，使其成为市场上唯一可检测小于100nm大小颗粒的流式细胞仪。英国Apogee Flow的技术早前广泛为美国军方用于战场上的快速微生物检测。继之前北京中科院微生物所和北京计量研究所引入了Apogee超灵敏纳米流式分析仪为微生物作快速流式检测和定量，最近上海第二军医大学转化医学中心的老师也选购了Apogee最新的A50-Micro Plus型号来进行外泌体等微颗粒研究的科研工作。而每年在美国举行的国际胞外囊泡大会上，更有不少的科学家的研究中采用了Apogee超灵敏纳米流式分析仪来作胞外囊泡研究。由此可见这种新技术在小颗粒检测中确是带来不少优势。