Cellastim S - 重构应用说明 - InVitria-蚂蚁淘商城

新闻动态

Cellastim S - 重构应用说明 - InVitria

2025-09-30

主页 Cellastim S – 重组应用说明Cellastim S – 重组应用说明

2020 年 9 月 17 日发布

Marcus Curl，产品应用总监工作流程摘要：

人血清白蛋白 (HSA) 已被确定为一种用于在体外扩增多种细胞类型的强大工具 [1]。 HSA 是一种多方面的蛋白质，能够结合许多不同类型的分子 [2]。因此，HSA 在细胞生物学中发挥多种作用，作为抗氧化剂通过与活性氧结合来改善细胞健康，作为能量输送系统通过在血液中陪伴脂肪酸，以及作为金属离子增溶和稳定的介质细胞过程所需 [2,3]。这些功能使细胞培养基中的 HSA 补充剂成为促进细胞体外生长和扩增的一个不可或缺的步骤，尤其是在去除血清或血液来源的蛋白质以用于临床生产时。使用 Cellastim S 作为细胞培养中重组和可扩展的白蛋白来源是大规模生产细胞疗法和基因疗法的有利工具。本应用说明的目的是提供有关制备 Cellastim S 用作体外细胞培养应用的储备液的分步概述。

简介：

人血清白蛋白 (HSA) 已被确定为多种细胞类型体外扩增的有力工具 [1]。 HSA 是一种多方面的蛋白质，能够结合许多不同类型的分子 [2]。因此，HSA 在细胞生物学中发挥多种作用，作为抗氧化剂通过与活性氧结合来改善细胞健康，作为能量输送系统通过在血液中陪伴脂肪酸，以及作为金属离子增溶和稳定的介质细胞过程所需 [2,3]。这些功能使 HSA 补充细胞培养基成为促进细胞体外生长和扩增的一个不可或缺的步骤，es特别是在去除血清或血液来源的蛋白质以用于临床制造时。

随着基于细胞的免疫疗法、基因疗法和干细胞疗法继续在实验室和临床中显示出前景 [4– 6]，安全且始终如一的高性能 HSA 的可用性对于这些技术的未来变得越来越重要 [7]。目前用于扩增间充质干细胞 (MSC)、造血干细胞 (HSC)、T 细胞、HEK293、VERO、MDCK、BHK-21 和许多其他关键细胞类型的 HSA 直接来源于人血清 [1,8 ].这种白蛋白来源有助于这些新疗法的构思和发展。然而，用血清来源的培养基补充剂和其他动物来源的成分补充细胞培养生长培养基可能会引入外来病原体，在细胞扩增过程扩大用于临床生产时产生变异性，并且还可能存在供应风险链瓶颈。因此，化学成分确定的培养基，辅以重组和良好表征的动物源成分替代品，越来越多地被用作减少变异、提高一致性和实现细胞疗法可扩展性的可行策略 [7,9]。 p>

Cellastim S 是一种完全无血和无动物的人白蛋白，在可扩展的非哺乳动物重组表达系统中生产。它天然不含朊病毒病原体（牛海绵状脑病和其他传染性海绵状脑病病原体），与血清衍生成分相比，来自其他哺乳动物外来病原体的潜在风险更小。除了提高安全性外，Cellastim S 在支持 T 淋巴细胞、HEK293、MSC、HSC 和 VERO 以及其他细胞类型的培养方面表现出一致的性能 [10,11]。在细胞培养中使用 Cellastim S 作为白蛋白的重组和可扩展来源是大规模生产基于细胞和基因治疗的使能工具馅饼。本应用说明的目的是逐步概述如何制备 Cellastim S，用作体外细胞培养应用的储备液。

所需材料：重组人血清白蛋白 Cellastim S (InVitria 777HSA017S) ）重建用品 125 毫升无菌 PETG 培养基瓶（ThermoFisher 2019-0125）细胞培养级 DPBS、PBS 或基础培养基，如 DMEM F/12、DMEM、MEM、RPMIVacuum 过滤系统500 毫升 0.2 微米真空过滤系统（Millipore SCGPU05RE）协议： Cellastim/Cellastim S 储备液制备

要制备 Cellastim S 的无菌 10% 浓缩液体储备液，首先称量一个空的 125 毫升无菌 PETG 培养基瓶。

$\"CellastimSReconstitutionNote1_Figure8\"$

在层流罩下，添加 10 g Cellastim S到瓶子里。称重装有粉末的瓶子，以确定添加的 Cellastim S 的实际重量。

$\"\"$ 图 1

一旦知道了 Cellastim S 的确切重量，就可以计算产生 10% 浓度的 Cellastim S 所需的体积。然后，轻轻地通过将计算出的最终体积的 70% 直接添加到 125 毫升瓶中，在细胞培养级 DPBS、PBS 或选定的基础培养基中重构粉末。请勿在此阶段添加完整的最终缓冲液体积。必须考虑到粉末引起的体积位移。

$\"\"$ 图re 2

盖上 125 毫升的瓶子，轻轻地翻转它的一侧，让粉状白蛋白落入缓冲液中。避免在此步骤中形成气泡。将容器竖直放回，让白蛋白在 4°C 黑暗中不受干扰（不摇动）溶解至少 4 小时，最好过夜。

$\"\"$ 图 3

所有粉末状 Cellastim S 溶解后，通过添加额外的重构液体使体积达到计算目标。为轻松实现这一点，请使用 50 ml 移液器将 50 ml 重组白蛋白粉末准确移至新的 125 ml 瓶中。使用相同的移液器，从原始瓶子中取出剩余的液体，注意体积。最后，移取目标体积与通过移液测量的体积之间的差异，和广告d 将此体积的重构液体添加到新瓶中。

$\"\"$ 图4

通过 0.2 µm 真空驱动的一次性过滤系统过滤对储备溶液进行灭菌。

$\"\"$ 图5

可选：对于手动过滤，InVitria 建议使用 25 mm、0.8 µm 过滤器（Pall 4188），然后使用 0.2 µm 30mm PES 低蛋白结合过滤器（Celltreat 229747），使用无菌 Luer-lock 注射器 (Medline SYR103010H)。

示例计算

$\"Cellastim$

在此处查看 PDFFootnotesFrancis GL。白蛋白和哺乳动物细胞培养：对生物技术应用的影响。细胞技术。2010；62(1)：1-16。https://doi.org/10.1007/s10616-010-9263-3He XM，Carter DC。人类血清的原子结构和化学白蛋白。自然。1992;358(6383):209-215。https://doi.org/10.1038/358209a0Taverna M, Marie AL, Mira JP, Guidet B. 人血清白蛋白的特异性抗氧化特性。安重症监护。2013 ;3(1):4. https://doi.org/10.1186/2110-5820-3-4Maude SL, Teachey DT, Porter DL, Grupp SA. CD19 靶向嵌合抗原受体 T 细胞治疗急性淋巴细胞白血病. Blood. 2015;125(26):4017-4023. https://doi.org/10.1182/blood-2014-12-580068Trounson A, Thakar RG, Lomax G, Gibbons D. 干细胞疗法的临床试验。BMC Med. 2011;9:52. https://doi.org/10.1186/1741-7015-9-52Cavazzana-Calvo M, Hacein-Bey S, de Saint Basile G 等人。人类严重联合免疫缺陷 (SCID)-X1 疾病的基因治疗。科学。 2000;288(5466):669-672.van der Valk J、Brunner D、De Smet K 等。优化化学成分确定的细胞培养基——在哺乳动物体外方法中替代胎牛血清。体外毒理学。 2010；24（4）：1053-1063。 https://doi.org/10.1016/j.tiv.2010.03.016Blázquez-Prunera A、Díez JM、Gajardo R、Grancha S。人类间充质干细胞在使用确定的异种细胞培养时保持其表型、多能性和遗传稳定性游离人血浆部分。干细胞研究。 2017；8(1)：103。 https://doi.org/10.1186/s13287-017-0552-zChisini LA、Conde MCM、Grazioli G 等。静脉血衍生物作为间充质干细胞的 FBS 替代品：系统范围界定审查。 Braz Dent J. 2017；28(6)：657-668。 https://doi.org/10.1590/0103-6440201701646Alfano RW。细胞培养基中的白蛋白——质量和功能检查。在：Brieva T，Miller W，Mason C，编辑。放大V. ECI 研讨会系列；以及基于细胞的疗法的制造； 2017 https://dc.engconfintl.org/cellbasedtherapies_v/22Pennybaker A, Alfano R. 利用重组白蛋白扩增人 T 淋巴细胞。细胞基因疗法见解。 2018;4(4):231-239.开始新搜索快速搜索链接应用：

抗体生产

细胞疗法

最终配方

食品科学

基因治疗

T细胞免疫治疗

疫苗生产

产品类别：

细胞培养添加剂

白蛋白

细胞培养基

乳铁蛋白