Description:
Epidermalgrowthfactorreceptor(EGFR)isacell-surfacereceptorwithintrinsicintracellularprotein-tyrosinekinase(TK)activity.LigandbindinginducesEGFRdimerizationandphosphorylation,le
ADIngtotheactivationofEGFRsignalingpathway.Inseveralmalignanciessuchasnon-smallcelllungcancer(NSCLC),EGFRsignalingisderegulatedduetomutationsinEGFR,whichresultsinuncontrolledproliferationandmigrationoftumorcells.EGFRmutationscanleadto“oncogene-addicted”cancers,wherethetumorcellsdependonthemutatedEGFRforcellsurvivalandmalignantphenotype. OneofthemostcommonEGFRmutationsfoundinhumanpatientsisL858Rsubstitutioninexon21,withintheactivationloopofEGFR.PatientswiththismutationaresensitivetoEGFRtyrosinekinaseinhibitors(TKIs)suchasgefitiniborerlotinib,whereaspatientswithwildtypeEGFRarenotsensitivetoTKI.AnotherclinicallyrelevantmutationassociatedwithacquiredgefitinibanderlotinibresistanceisT790M,foundinexon20.CellsexpressingEGFRwithbothL858RandT790Mmutationsareresistanttoinducedapoptosisinthepresenceofgefitiniborerlotinib.
Data:

Dose-dependentgrowthinhibitionofBaF3cellsharboringEGFRexon21L858Rmutation(EL-003),controlBa/F3cellline(EL-001)andrepresentativeErlotinibresistantcellline,EGFRL858R+T790M(EL-004).Thecellsweretreatedwiththeindicateddoseoferlotinibfor72hoursandcellviABIlitywasmeasuredusingSignosisCVCreagent.EGFRL858RmutationstablyexpressingBaF3cells(EL-003)weremoresensitivetoTKIerlotinibthanitsresistancederivativeEGFRL858R+T790MstablyexpressingBaF3cells(EL-004).
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4 月 8 日,内蒙古首例医疗事故罪案在包头市中级人民法院开庭审理,此案再一次引起网友热议。2013 年,一 3 岁男童因重症细菌性肺炎并发感染性休克,加之镇静药物的不当使用致肝脏、大脑等多器官功能损坏和衰竭死亡。村卫生室医生潘耀平被认定为承担主要责任,2014 年 9 月 19 日,检察院以医疗事故罪严重不负责任对潘耀平医生批准逮捕并提起公诉。潘耀平一审被判处有
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Preparation of Copy Standards for PCR GenotypingPCR screens must be designed to detect transgene DNA at the single copy level. To demonstrate this level of sen
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检验科独立只是美丽的误解最近一篇网文火爆全国,就是检验科将被独立出医院的传闻。说是传闻也不完全正确,国家卫计委确实下发了文件,不过解读人不同可能有不同的理解。而且文中提到的实验室不包括医院的检验科,所以检验科独立成为法人短时间内还是不可能的。所以对于文件,大家一定要亲自看全文,而且也要看附件信息,微信传的东西看看就好,包括笔者这篇
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ProceduresCover a 48-well plate with Matrigel (100μl/well) of and incubate for 30 min at 37°C, 5% CO2. Sacrifice the1-2 month old mice/rats (WT/mutant)
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上海锐赛夏季慢病毒/稳转株-----酷爽套餐! 来源:上海锐赛生物技术有限公司2013-7-23 访问量:3193评论(0)标签: 锐赛生物/ R&S 慢病毒/稳转株/促销/细胞 上海锐赛夏季慢病毒/稳转株-----酷爽套餐! 活动期间,将同一基因...
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Let human ES cells grow until the colonies are large and the cells are pretty piled up - about the time when you would normally split or even a day past that.T
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实验原理 稳定转染就是将外源基因DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒,根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代,从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。 瞬时转染/感染的特点:外源DNA不整合到宿主的染色体中,一个宿主细胞中可以存在多个拷贝数,产生短时间内的高水平的表达(只能持续几天);外源基因的表达水平不...
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Isolate cells and dissociate to single cell suspension (can use Gibco Cell Dissociation Buffer, Accutase or Trypsin)Wash with 10% FBS/DMEM:F12For surface marke
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不能,它有Neomycin基因,可以用新霉素进行稳定株筛选,获得稳定株。
G418是常用的一种,还有很多药物可以用来筛选稳定株,比如puro等,就看你的细胞或质粒带什么抗性了。
之前
转染了带GFP的质粒,冻存估计有半年了拿来复苏,想做后续实验,结果稳转的细胞荧光少还很弱,请问怎么办?急急急!
6kb并不大,作为质粒转染是没有问题的。
至于到底好不好转就跟你的细胞有关了,和细胞是否是稳转株关系不大。
这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。
推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。
稳转细胞系常用的方法有质粒转染和慢病毒转染进行稳定株筛选,前者操作简单,但是成功率很低,费时,假阳性高,最后可能导致几个月的工作白干了,慢病毒稳定株筛选方法比较简单,并且慢病毒本身具有稳定整合入基因组的特性,没有假阳性,慢病毒包装可能相对比质粒构建难度大,如果经费充足可以直接找公司包毒的。
这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。
推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。
稳转细胞系常用的方法有脂质体转染和慢病毒转染进行稳定株筛选,脂质体法筛单克隆时间耗时长,假阳性高,且效率低,大概只有1%。病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐。
如果经费充足的话可以找公司包装病毒,如武汉的普健可以提供各种载体的构建及细胞株构建的技术服务。
1、请教各位老师,
转染质粒DNA的HepG2及HUH7细胞,如何筛选稳转
细胞株?
2、有限稀释法有没有protocol?
首先你得明确这个h9c2细胞的培养是否好做,操作是否稳定。
然后你得确定,这个细胞株对于你得研究来说不可或缺,具有明确的代表性。
上面两个都没有问题的话,祝你顺利。
稳定细胞株筛选是一个长期的过程,稳定细胞株筛选优化,有许多条件需要摸索,而且是从源头开始①在构建载体时,目的基因直接整合到细胞染色体组上,最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法,因为转染效率没有保证②高表达载体的构建,哺乳动物表达量一直是它自身的缺点,最好根据高表达载体定向的驯化细胞,提高蛋白表达量③细胞的选择,筛选稳定细胞株我们常用的细胞是CHO,中国仓鼠细胞,由于CHO具有诸多的优点因此适合用于筛选稳定细胞株,而HEK293细胞则常用于瞬时转染④后期的筛选,双抗预防污染,筛选细胞的时候抗生素浓度一定要做预实验,而且转染的时候不能有抗生素,关于细胞转染稳定细胞系构建的相关理论