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Innoprot/Human Retinal Pigment Epithelial Cells/P10873
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Innoprot/Human Retinal Pigment Epithelial Cells/P10873
品牌 / 
Innoprot
货号 / 
P10873
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The retina is a multi-layered structure lining the posterior segment of the eye. It consists of photoreceptors and retinal pigment epithelial cells (RPEpiC). Localization of RPEpiC is between the neurosensory retina and the choroid; forming the outer blood-retina barrier that controls the chemical composition of the subretinal space. RPEpiC have specific polarized protein distributions within the cell. In contrast to other epithelia which normally faces an apical lumen devoid of matrix; the RPEpiC apical plasma membrane is in direct contact with the extracellular matrix. RPEpiC play a critical role in regulating the adjacent photoreceptor membrane turnover, retinoid metabolism, and protecting the retina from light-induced damages by the intracellular melanin, which suggests that RPEpiC may contribute to the pathogenesis of various ocular diseases such as proliferative retinopathy and age-related macular degeneration. Human Retinal Pigment Epithelial Cells provide an invaluable tool for understanding physiological and pathophysiological relevance in retina function and disease.

  • Reference: P10873
  • Size/Quantity: 5x105 cells / vial
  • Product Use: For research use only
  • Shipping Conditions: Dry Ice
    • Data Sheet / Cell Culture Manual
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    2021-07-22
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    瞬时转染是指外源基因进入受体细胞后,存在于游离的载体上,不整合到细胞的染色体上,结果是短暂的高水平表达,可在外源基因导入细胞24~96h内检测表达效果,表达水平与位置无关,不会受到周围染色体元件的影响。超螺旋质粒转染更倾向于瞬时表达。
    对于瞬时转染的检测:如果有报告基因,就通过报告基因的表达看转染成功与否;没有报告基因的话,就在24~96h内收获细胞通过RT-PCR和WB来鉴定。
    两种质粒是可以同时进入同一个感受态细胞的,比如构建腺病毒载体时.但是要求两种质粒进入同一个感受态细胞,转化效率非常低,一般需要电转或者其他的特殊处理.
    由于质粒的不兼容性,拥有同种复制子的质粒不能在同一细胞内稳定共存,经过几代的复制,会质粒丢失,所以并不是任何两个或两个以上质粒都可以在同一细胞内稳定存在,但是可以同时进入.
    稳定转染的细胞株,就是转染后质粒可以稳定整合到基因组上不会因细胞分裂而丢失。区别于质粒瞬时转染不能长时间保留质粒在细胞里。
    稳定细胞株筛选是一个长期的过程,稳定细胞株筛选优化,有许多条件需要摸索,而且是从源头开始①在构建载体时,目的基因直接整合到细胞染色体组上,最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法,因为转染效率没有保证②高表达载体的构建,哺乳动物表达量一直是它自身的缺点,最好根据高表达载体定向的驯化细胞,提高蛋白表达量③细胞的选择,筛选稳定细胞株我们常用的细胞是CHO,中国仓鼠细胞,由于CHO具有诸多的优点因此适合用于筛选稳定细胞株,而HEK293细胞则常用于瞬时转染④后期的筛选,双抗预防污染,筛选细胞的时候抗生素浓度一定要做预实验,而且转染的时候不能有抗生素,关于细胞转染稳定细胞系构建的相关理论

    我用腺病毒感染稳转细胞株,用到50微升的量都感染不起来,荧光不表达,PCR验证不出来?求问如果用polybrene该怎么加,转染之前预处理还是加病毒的时候加进去?

    首先你得明确这个h9c2细胞的培养是否好做,操作是否稳定。
    然后你得确定,这个细胞株对于你得研究来说不可或缺,具有明确的代表性。
    上面两个都没有问题的话,祝你顺利。
    稳转株的制备_药物123
    kahn922021-07-23
    稳定转染的细胞株,就是转染后质粒可以稳定整合到基因组上不会因细胞分裂而丢失。区别于质粒瞬时转染不能长时间保留质粒在细胞里。
    稳转细胞系常用的方法有质粒转染和慢病毒转染进行稳定株筛选,前者操作简单,但是成功率很低,费时,假阳性高,最后可能导致几个月的工作白干了,慢病毒稳定株筛选方法比较简单,并且慢病毒本身具有稳定整合入基因组的特性,没有假阳性,慢病毒。
    这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。
    转入目的基因但为什么不表达mRNA
    先提取RNA,反转录成cDNA,然后根据目的基因设计PCR引物,通过半定量RT-PCR确定目的基因表达.
    正因为检测的是mRNA,所以要先反转录成cDNA才能PCR.
    这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。
    推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。
    不能,它有Neomycin基因,可以用新霉素进行稳定株筛选,获得稳定株。