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大家好，我是一个质粒小菜鸟，最近遇到个奇怪的事情，希望大家帮忙看看，究竟出了什么问题。

我构建了一个氨苄抗性的质粒，这个质粒在固体培养基里长出了单菌落，但是我挑菌在液体培养基里无法扩增出来。固体培养基和液体培养基一起配置的，氨苄浓度一致，唯一不同的是固体培养基里加入了琼脂。为了防止是氨苄的问题，我把这个固体培养基上的菌落挑划了新的板，依然能长出菌落。而同一次配置的液体培养基，也能扩增其他质粒，所以我实在想不出是什么其他问题，希望大家帮帮忙。

在培养基中，琼脂的作用如下：在制作微生物的培养基的过程中，可以通过添加琼脂作为凝固剂来将液体培养基转化为固体培养基或半固体培养基。（加入琼脂的固体培养基与液体培养基相比优点在于操作简便，通气问题易于解决，便于经常观察研究等。）琼脂：
琼脂，学名琼胶，英文名（agar），又名洋菜(agar-agar）、海东菜、冻粉、琼胶、石花胶、燕菜精、洋粉、寒天、大菜丝，是植物胶的一种，常用海产的麒麟菜、石花菜、江蓠等制成，为无色、无固定形状的固体，溶于热水。在食品工业中应用广泛，亦常用作细菌培养基。为什么叫琼脂，主要是用海南的麒麟菜或石花菜制作出来的。海南的简称就是琼。琼脂特性：琼脂的最有用特性是它的凝点和熔点之间的温度相差很大。它在水中需加热至95℃时才开始熔化，熔化后的溶液温度需降到40℃时才开始凝固，所以它是配制固体培养基的最好凝固剂。用琼脂配制的固体培养基，可用以进行高温培养而不熔化，在凝固之前接种时，也不致将培养物烫死。因此，琼脂是制备各种生物培养基中应用最广泛的一种凝固剂。琼脂的浓度，通常是液体培养基的1～1.5%。向左转|向右转

求助培养山羊骨髓干细胞的F12培养基里面加什么成份呢？成份量是多少。

要培养293A细胞，请教各位大神，配制好的完全培养基4度能放置多久？

培养基的配置应该注意的几大步骤：
1、常用玻璃仪器的准备制备培养基所用的吸管、锥形瓶、毛细吸管、平皿等玻璃仪器用前要用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净，晾干后备用。
（1）平皿用纸或布包好，或装在金属盒内，于121℃高压蒸汽菌3min后烘干，备用。
（2）试管管口用棉花塞或硅氟塑料试管塞塞好，再用布或报纸包扎好，121℃高压蒸汽灭菌20℃后烘干，备用。
（3）吸管及滴管先用少许棉花塞于吸口端（防止污染物吸出，或橡皮帽内的气体污染），然后用纸包后或装入金属吸管筒内，于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干，备用。其他玻璃器皿均应按上法处理，也应装金属筒内160℃干热灭菌2h后，备用。
2、培养基的制备及储存
（1）溶化：一般应放在玻璃器皿或搪瓷齐内。加入蒸馏水，隔水加热以促其溶解，加热时应经常搅拌，防止焦结，待其溶解后补足水分。
在使用干燥培养基时，先将蒸馏水按定量加入容器中，然后称取一定量培养基干粉放入水中，静置10—15min，搅拌，振荡，或延长时间以促进溶解，一般不要热，必要时加热，但时间不宜过长，温度不宜过高，避免某些营养成分被破坏。
（2）校正酸碱度（调节pH）：培养基必须有适当的pH。因此测定pH是培养基配制过程中的重要步骤之一，测定pH的标准温度为25士2℃。调节pH可用无菌的1mol/l氢氧化钠溶液或10%碳酸钠溶液、1mol/l盐酸溶液。当调节缓冲液的pH时，宜用6mol/l磷酸或10mol/l氢氧化钾溶液。灭菌后的pH会比灭菌前的pH升高或降低，一般高压灭菌前培养基的pH会比最终pH调高0.2左右，灭菌后基本合适。因此对培养基、缓冲液、试剂在灭菌前后的pH均进行测定，并记下每次pH的测定结果，有助于积累数据考察每种培养基、缓冲液、试剂对灭菌程序的耐受性，从而指导灭菌前pH的调节。干燥培养基一般已校正过pH，用时也必须再验证。测定时，一般用指示剂滴入培养基观察其颜色的变化，或用pH计校正，如与所需pH不符，可用以上的酸或碱液加以校正。调整pH后要加热过滤，使培养基澄清。( 更多质量检测、分析测试、化学计量、标准物质相关技术资料请参考中国标准物质 www.rmhot.com)
（3）培养基的分装：大批量配制时使用的自动分配器须经校准和确认。每次使用前后，均要对分配器的管道系统进行冲洗，在分装无菌培养基前，则要采用无菌硅胶管。
固体培养基一般分装在250ml、500ml锥形瓶中，高压灭菌后根据需要分装平皿或试管。
平皿：倾注平皿，应在无菌室中放置3—4h，如用塑料平皿须在35℃培养箱 中倒置30—60min。让水蒸汽自然蒸发。
斜面：制备低层斜面分装于试管，约占容积1/5，灭菌后趁热斜放在细玻璃棒和木杆上，使成斜度，分装使注意管口和瓶塞上勿沾有培养基，如沾有培养基应用布抹去，以避免污染。
高层斜面：制备高层斜面分装于试管，约占试管容积的1/3，灭菌后趁热放置成高层短斜面，待其凝固后应用。
分装好的培养基或缓冲液等及时密封后必须在配制当天（2h内最佳）进行灭菌处理。液体、半固体培养基一般在高压灭前分装，约装试管容积的1/3，在灭菌后还要加其他成分的液体、半固体培养基，灭菌后再分装于灭菌试管或锥形瓶中。
培养基的灭菌：培养基的灭菌多采用高压蒸汽灭菌，各种培养基的灭菌时间和压力，按其成分不同而定。普通培养基采用121℃、103.42kPa灭菌15min，但容器和装量较大时，应延长至20min。含糖培养基115℃、68.85kPa灭菌30min。含糖、血清、 鸡蛋等培养基可用流动蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min，连续3d，间歇灭菌。血清或组织液，采用低热56—58水浴1h，连续5—6d灭菌，一些遇高温即被破坏的物质如尿素、腹水等，可用细菌过滤器，过滤除菌。高压灭菌应严格按照操作规程执行，必须逐渐加热，彻底排除灭菌器内的空气，再逐渐升压保持预定的压力和时间，达到全部杀灭微生物。以上的灭菌时间和温度要经过验证确认，如不同类型培养基混合一起灭菌时宜采用115℃、68.85kPa灭菌30min为好。
通过无菌技术为测试制备的每一批培养基其PH在放冷至室温（25°）后，都应测定。一个扁平的pH计用于培养基表面pH值的测定，浸入式的pH计用于液体的测定。各供应商提供的培养基的pH应该在规定的±0.2的范围内，除非通过验证得到更宽的范围
　　注意：按配方计算培养基中各种成分的用量→称量,（一般动作要迅速一些,因为其中可能有些成分容易吸潮）→溶化（将称好的各种成分溶解在水中,如果是固体培养基,需要使用凝固剂,如琼脂等,熔化时,注意搅拌,防止糊底）→调pH→灭菌（高压蒸汽灭菌）→倒平板
　　1）确认培养基的成分,并精确称量；
2）加入各个成分的顺序；
3）准确调pH；
4) 适当的灭菌方法；
5）无菌条件下分装.

DMEM高糖培养基的配制：

1、高压纯水1升

2、加入培养基粉末。
3、说明书上碳酸氢钠的量是加3.7g，我加了2.0g，混匀，调PH值。
4、过滤，我们用的是泵负压吸引的。

只用水龙头上的水冲洗了两遍锥形瓶，转身忘记用蒸馏水润洗锥形瓶，会不会有什么影响

请问刚配制的DMEMF12培养基是什么颜色？桃红还是橙红？我配制的是这个颜色，正常吗？

本人是实验室新手，最近在做一个实验，是观察黄芩汤对细菌生长的影响，想要用固体培养基做加药实验。想请叫一下，含黄芩汤的固体培养基怎么制备？谢谢各位大神！

各位大神你们好：

我们是医疗器械工厂，只需配制环境监测和水检测的培养基，但是根据2015版药典规定，1105，141页有一句

而在9203，289页

“商品化的成品培养基除了应附有处方和使用说明外，还应注明有效期、贮藏条件、适用性检查试验的质控菌和用途”。

是否可以理解为只要供应商提供以上信息，使用厂家就可以不用做培养基适用性试验了？

如果购买的商品化的成品培养基不做培养基适用性试验，那么医疗器械的微生物检验将大大减少工作量了。

各位老师，细胞新手向大家请教一个问题：我做氧化损伤的细胞模型，培养基使用的就是普通的DMEM完全培养基，样品时合成的多肽，有2条多肽在使用培养基溶解时，培养基从原来的红色变成偏黄色了，除此之外没有浑浊和其他异常现象产生，请教一下是什么原因呢？会不会对实验结果造成影响？

最近一个月老是出现污染，换了培养基，胎牛，所有的耗材也换了，都要崩溃了，每次操作也很注意，但是就是污染了，污染的细胞培养基是白色流沙样，显微镜下看细胞脱落的并不多，也试着将污染的细胞再养二天，发现有少部分脱落！求大神支招。本人养的人脂肪干细胞hADSC