划做一些血清的细胞因子检测，不知道哪些公司的板子比较好？或者有没有做类似芯片的可以一次大批量检测多个因子或多个样本的？请高手指教，谢谢。

看网上说Gibco和Hyclone血清，在中国大陆很难买到真的了，是这样吗？这两个牌子这么响，看网上的资料就不敢买了，选择困难症出现了，请大家推荐性价比高一点的血清，谢谢啦！

本人科研小白，研究新生！

课题准备检测血清中骨桥蛋白（OPN）含量

现在计划是先将所有血标本离心取血清先冻存，待所有标本收集齐后再统一做

大概要收集2个月，约70个病例。

现在我的问题就是：1、离心后的血清，如何分装、冻存？（具体条件、流程、用什么管子冻存，是否需要买冻存液等）

2、冻存后如何复苏？（最好有具体流程，具体复苏条件，是否需要买什么复苏液、培养基什么的）

刚来读书，一下子拿到这个题目有点懵，网上搜了一些，比较杂，比较乱，没有底，想请教各位哥哥姐姐给我提供点帮助，先谢谢了！

前段时间有个同学因为细胞状态不好，培养基里有小黑点，怀疑是支原体污染。于是检测了一下，果真是的，就买了支原体清除剂。别说效果还真好，3天后细胞状态就好了。

既然细胞状态好了，就停用了，没想到一停用，细胞状态就又差了。把培养箱、细胞房都清理一遍还是不行，就问到了我，既然这些因素都排除了，最后只有一个可能了，刚买的Gibco的胎牛血清，本来心里还想，同学实验室真是土豪啊，我就问了价格，南美胎牛1500……澳州胎牛血清3000……，简直惊讶到了，现在Gibco的血清简直是一货难求，澳州胎牛血清已经炒到了8000+了。
就断定这个血清肯定是假的，用检测试剂盒检测了一下，果然是这个问题，假血清真是害人啊，这些无良奸商……由于支原体比较小，滤器过滤不掉，所以大家买血清的时候一定要先试用，检测一下支原体（现在好多大牌子都会有支原体检测报告）
这里来分享一下支原体检测方法：
1，PCR检测法。

2支原体检测跑胶图-20084539882.jpg
这个Primers是依据支原体基因组中高度保守的16SrRNA编码域而设计的，只需简单的PCR反应就可检测M.Arginini,M.Fermentans,M.Hyorhinis,M.Orale,M.Salivarium,M.Hominis,M.Pneumonia等常见的支原体。
2，DNA萤光染色法
利用萤光染剂（bisbenzimide,Hoechst33258）侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine(A-T)rich区域，因为支原体之DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点，即为支原体之DNA，证明有支原体之污染。

Cell+细胞卫士__MycoTestKit(支原体检测试剂盒)：

支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。

MycoTestKit是利用降落聚合酶链式反应技术（TD-PCR）对支原体16SrRNA基因高度保守区域特异性片段进行扩增检测。该方法灵敏度高，特异性强，可用于各种生物材料（如细胞培养基、实验动物分泌物、动物血清等）支原体感染的检测。

Cell+细胞卫士__NocardTreatment(支原体清除剂)：

（1）推荐NocardTreatment的稀释比例为1:1000，例如：1mL培养基加入1μL的NocardTreatment；

（2）弃去旧的培养基，用PBS将细胞清洗干净，再加入新鲜的含有NocardTreatment的培养基，1天1次，连续处理3-6天。

本人做动物实验，每组设7只，需要测定小鼠的相关指标，初次接触有几点不明白
1、测定指标时，是否可以每组7只，每只测定一次，一共测定7次？
2、是否可以每组选择3只，每只测定一次，共3次？
3、是否可以每组选择3只，每只自身平行测定3次，共9次？
4、测定指标时，是否可以前3只鼠测定A指标，后4只鼠测定B指标吗？
请问1、2、3中的三个方法哪种方法是否具有可行性？4中的测定方法是否可以？

请问无血清培养基是指在培养过程中只需要加这种培养基不需要加血请，还是指培养基本身不含血清而在培养过程中需要加血清？

Nutrients.2017May10;9(5).

ClinicalSignificanceandPrognosticEffectofSerum25-hydroxyvitaminDConcentrationsinCriticalandSevereHand,FootandMouthDisease.

手足口病危重儿血清25-羟维生素D浓度的临床意义与预后影响

作者党红星，刘成军，李静，程时骄，许峰

摘要

Abstract

目的：探讨血清25羟维生素D[25（OH)D]浓度与手足口病危重症的关系及评估手足口病危重儿血清25-羟维生素D浓度的临床意义与预后影响。

OBJECTIVE:

Toexaminetheassociationofserum25-hydroxyvitaminD[25(OH)D]concentrationswithcriticalandseverehand,footandmouthdisease(HFMD)andassesstheclinicalsignificanceandprognosticeffectof25(OH)DconcentrationsinchildrenwithHFMD.

方法：本研究为前瞻性观察研究。

METHODS:

ThisisaProspectiveobservationalstudy.

将138例手足口病患儿分为普通组（49例）、重症组（52例）和危重组（37例）。另选取同期门诊体检的59例健康儿童作为对照组。

The138childrenwithHFMDweredividedintocommon(49cases),severe(52cases),andcritical(37cases)HFMDgroups.Another59healthychildrenundergoingoutpatientmedicalexaminationsduringthesameperiodwerechosenasthecontrolgroup.

测定所有对象的血清25（OH）D浓度，每组再分为血清25（OH）D正常组（≥30ng/mL）；不足组（20-29.9ng/mL）；缺乏组（低于20ng/mL）。

Serum25(OH)Dconcentrationsweremeasuredinallthesubjects,andeachgroupwassuBDividedbyserum25(OH)Dconcentrationinto25(OH)Dnormal(≥30ng/mL);insufficiency(20-29.9ng/mL),anddeficiency(<20ng/mL)groups.

手足口病危急重症组在入住儿科ICU（PICU）时记录小儿危重病例评分（PCIS）。

Thepediatriccriticalillnessscore(PCIS)wasrecordedforthecriticalandsevereHFMDgroupuponadmissiontothepediatricintensivecareunit(PICU).

监测小儿危重手足口病患者血乳酸（LAC）、血清钙离子（Ca2+）、D-二聚体（DD）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平；脑干脑炎、神经源性肺水肿、循环衰竭的发生情况；14天病死率。

ChildrenwithcriticalandsevereHFMDwerealsomonitoredforbloodlactate(LAC),serumcalciumions(Ca++),D-dimer(DD),lactatedehydrogenase(LDH),andcreatinekinase-MB(CK-MB)levels;theincidencesofbrainstemencephalitis,neurogenicpulmonaryedema,andcirculatoryfailure;andthe14-daymortalityrate.

结果：

RESULTS：

各组血清25（OH）D浓度普遍较低。

Serum25(OH)Dconcentrationsweregenerallylowinallgroups.

与对照组（28.1±6.6ng/mL,8%）、普通组（29.5±8.1ng/mL,10%）和重症组（31.9±9.7ng/mL,8%）相比，危重组患者血清25（OH）D平均浓度（20.0±8.4ng/mL）明显较低，血清25（OH）D缺乏比例（18％）明显较高(P＜0.05）。

ThecriticalHFMDgroupshowedasignificantlylowerserum25(OH)Dmeanconcentration(20.0±8.4ng/mL)andahigherproportionofdeficiency(18%)comparedwiththecontrolgroup(28.1±6.6ng/mL,8%),common(29.5±8.1ng/mL,10%)andsevere(31.9±9.7ng/mL,8%)HFMDgroups(p<0.05).

在危重组中，25（OH）D缺乏组比25（OH）D正常组及不足组具有更低的PCIS值（P＜0.05）；而比后两组具有更高LAC、LDH、CK-MB和DD；具有（更高的）脑干脑炎、神经源性肺水肿、循环衰竭发生率及病死率（P＜0.05）。

InthecriticalandsevereHFMDgroups,the25(OH)DdeficiencygrouphadlowerPCISsthanthe25(OH)Dnormalandinsufficiencygroups(p<0.05);andhadhighervaluesthanthelattertwogroupsforLAC,LDH,CK-MBandDD;andtheincidencesofbrainstemencephalitis,neurogenicpulmonaryedema,circulatoryfailure,andmortality(p<0.05).

死亡组较存活组具有显著降低的血清25（OH）D浓度和PCIS（P＜0.05），具有较高的LAC、LDH、CK-MB和DD水平；较高的脑干脑炎、神经源性肺水肿、循环衰竭发病率（P＜0.05）。

Thedeathgroupshowedsignificantlylowerserum25(OH)DconcentrationsandPCISsthanthesurvivalgroup(p<0.05)andhadhigherLAC,LDH,CK-MBandDDlevelsandhigherincidencesofbrainstemencephalitis,neurogenicpulmonaryedema,andcirculatoryfailure(p<0.05).

Logistic回归分析显示，血清25（OH）D浓度是影响重症手足口病患儿病死率的独立因素。

Logisticregressionanalysisrevealedthattheserum25(OH)DconcentrationwasanindependentfactorthatinfluencedmortalityinchildrenwithcriticalandsevereHFMD.

CONCLUSIONS:

结论：

在这项研究中，我们发现，血清25（OH）D浓度在手足口病危重患儿中大幅降低，并与手足口病的严重程度相关。

Inthisstudy,wefindtheserum25(OH)DconcentrationsaresubstantiallyreducedinchildrenwithcriticalandsevereHFMDandareassociatedwiththeseverityofHFMD.

血清25（OH）D浓度对判断重症手足口病进展和预测死亡风险具有临床价值。

Theserum25(OH)DconcentrationsmayhaveclinicalvaluefordeterminingtheprogressionofcriticalHFMDandpredictingtheriskofdeath.

在确定25（OH）D浓度在手足口病诊断的临床价值之前，仍需进一步的证据。

Furtherevidenceisneededbeforeitcanbestatedthat25(OH)DconcentrationshaveclinicalvalueinHMFDdiagnosis.

关键词：

KEYWORDS:

25-hydroxyvitaminD;criticalillness;footandmouthdisease;hand

25羟维生素D；危重病；手足口病