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enogene/EnoGeneFec™ 2000 Transfection Reagent/1000μl/EGF2000-1000
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EnoGeneFec™ 2000 Transfection ReagentPDF
Catalog Number:
EGF2000-1000Amount:
1000μlStorage/Stability:
and stabilityEnoGeneFec™ 2000 Transfection Reagent is provided in 1μg/μL concentration. It is shipped at room temperature and is stabilized for extended storage at +4°C for one year when very tightly closed.产品介绍EnoGene新推出的EnoGeneFec™ 转染试剂以最高的转染效率、使用方便、细胞毒性小、生物可降解为设计宗旨，EnoGene的新型配方克服了常见的阳离子或脂质体转染试剂带来的细胞毒性作用，更适合做长效和瞬时转染。使用这种新的转染试剂操作方便，可用于转染质粒、线性双链DNA、反义寡核苷酸及RNAi等，在实际使用中获得了非常理想的效果。EnoGeneFec™ 2000是针对贴壁细胞设计的转染试剂，可用于体外转染质粒、线性双链DNA、反义寡核苷酸及RNAi等。对常用的贴壁细胞转染效率可达80%以上。EnoGeneFec™ 2000可以形成微小的（平均大小约100-400nm）单层脂质体，靠静电作用结合到DNA的磷酸骨架上以及带负电的细胞膜表面，并与寡核苷酸等能形成稳定的较小的纳米胶体颗粒，通过细胞"内吞作用"进入细胞，能吸收溶酶体的H+，在复合体中形成酸性环境使核酸酶失活，保护DNA免受核酸酶的降解。进入细胞后，复合体囊泡肿胀破裂，将DNA释放到细胞质中，实现基因转染。EnoGeneFec™ 2000与其他转染试剂相比无论在转染效果和实验操作上都有明显的优势，主要表现为：●转染效率很高，对大多数贴壁细胞使用效果综合评价明显高于其它常用转染试剂●细胞毒性低，需要转染较大剂量的DNA时，毒性明显低于其它常用转染试剂●操作简单，以最短的时间完成转染，转染试剂-DNA复合物的形成时间只需20min试剂盒组分组分EnoGeneFec™ 2000 Transfection ReagentEGF2000-5000.5mlEGF2000-10001mlEGF2000-15001.5ml操作步骤（以6孔板为例）转染前18-24小时使用完全培养基在6孔细胞培养板，每孔接种2ml 细胞培液（根据细胞培养条件，可含血清及抗生素），约为1-3×105个细胞，转染前细胞密度应达到70－90%。若使用其他的培养板或培养皿，可以参照下表中提供的孔（或皿）表面积和体积相应的调整细胞接种数、EnoGeneFec™ 2000加量。培养板表面积(cm2/孔or皿)可容纳培养基体积（ml/孔or皿）DNA（或其他核苷酸类成分）用量（µg）EnoGeneFec™ 2000用量待加的无血清、无抗生素的培养基体积96孔0.30.1-0.20.2μg溶于 20 μl 培养基0.4-1.0 μl 溶于 20 μl培养基50μl24孔20.5(0.2-)1 μg溶于 25 μl 培养基2-5 μl 溶于 25 μl培养基0.4ml12孔41.0(0.5-)2.0 μg溶于 100 μl培养基4-10 μl 溶于 100 μl培养基0.6ml6孔102.0(1.0-)5.0 μg溶于 100 μl培养基10-25 μl 溶于 100 μl培养基0.8ml35 mm102.0(1.0-)5.0 μg溶于 100 μl培养基10-25μl 溶于 100 μl培养基0.8ml60mm205ml(3.0-)10.0μg 溶于 500 μl培养基20-50μl 溶于 500 μl培养基2.4ml10-cm6010ml(8.0-)20.0 μg 溶于 1.5ml培养基40-100μl 溶于 800μl培养基6.4ml2. 转染复合物的制备：溶液A：将5µg 质粒DNA（或其他核苷酸类成分）加入到100μl无血清、无抗生素的培养基，在1.5ml无菌EP管中混匀后，室温放置5分钟。溶液B：EnoGeneFec™ 2000在使用前请震荡混匀。将10-25µl EnoGeneFec™ 2000加入到100μl 无血清、无抗生素的培养基中，在1.5ml无菌EP管中混匀，室温放置5分钟。将溶液A加入到溶液B中，轻轻混匀，室温放置20分钟，获得约200μl转染复合物 （注：该转染复合物在室温下5小时内是稳定的）。3. 将800μl 无血清、无抗生素的培养基加入到上述的200μl转染复合物中，轻轻混匀，获得约1.0ml转染复合物溶液。4. 将培养板中的培养基弃去，将第3步获得的1.0ml转染复合物溶液加入到培养孔中覆盖细胞。5. 于5-8小时后，弃去每孔中的转染复合物溶液，加入2.0ml完全培养基（根据细胞培养条件，可含血清及抗生素），37℃孵育转染细胞18-24小时6. 收集细胞用于分析。如要建立稳定转染，于转染24小时后将细胞按1:10传代至新鲜培养基中（根据细胞培养条件，可含血清及抗生素），传代次日可以换用选择培养基。注意事项1.质粒DNA的质量使用高纯度的质粒DNA也是转染试验中的关键因素。为了保证试验的结果，建议对提取的质粒DNA的量和纯度进行检测。DNA含量(μg/mL)=50×(260 nm的读数)×稀释倍数，另外通过检测质粒DNA在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280）估计核酸的纯度，OD260/OD280=1.8说明DNA样本纯度较高。2. 转染细胞的要求细胞的传代次数是影响转染效果的重要因素，推荐使用在50代以内的细胞进行转染试验。要求在转染前24小时对细胞再次传代。3. 血清的影响。在EnoGeneFec™ 2000和DNA形成转染复合物的过程中不能添加血清。4. EnoGeneFec™ 2000的用量为了达到更高的转染效率，对于接种细胞密度在70%-90%之间的样本，可通过预试验在EnoGeneFec™ 2000（μl ）∶DNA（μg ）=1∶1 - 5∶1之间选择最佳的比例。EnoGeneFec™ 2000（μl）∶DNA（μg）的推荐比例为2∶1或5：1。对于一般细胞，2：1即可获得理想转染效果；对于较难转染的细胞，建议使用5：1。五、储存EnoGeneFec™ 2000以1 μg/μl浓度液体形式提供，保存在4℃。常温运输。保存期：一年Price:
220$Research Area:
Stem Cells Cancer Cardiovascular Cell Biology Epigenetics & Nuclear Signaling Developmental Biologys Immunology Drug Discovery Products Metabolism Neuroscience Signal Transduction
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ORGANOTYPIC KIDNEY CULTURES -embryos are dissected from timed-pregnant mice from 11.5 d.p.c. to 13.5 d.p.c. -metanephroi and associated ureteric buds are micro 查看更多
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2021-08-31
上海杰美基因医药科技有限公司在发布的精子细胞冻存液供应信息，浏览与精子细胞冻存液相关的产品或在搜索更多与精子细胞冻存液相关的内容。 查看更多
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2018-12-26
各种细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力不同，其代谢产物也不同。用生物化学方法测定这些代谢产物，可用来区别和鉴定细菌的种类。利用生物化学方法来鉴别不同细菌，称 查看更多
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2018-12-26
菌种保存和微生物常识1、常用培养基的制备、灭菌与消毒 营养：从外部环境摄取其生命活动所必需的能量和物质，满足生长和繁殖需要的一种生理过程。是生命活动的物质基础，是生命活动 查看更多
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2018-12-26
菌株分离（separation）就是将一个混杂着各种微生物的样品通过分离技术区分开，并按照实际要求和菌株的特性采取迅速、准确、有效的方法对他们进行分离、筛选，进而得到所需微生物的过程 查看更多
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2018-12-26
For long term storage of myeloma cells, hybridoma cells, T cells, and other mammalian cell lines in liquid nitrogen, and restoring them in culture.FreezingPrep 查看更多
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2019-05-14
ProChimia ProFoldin PROGEN Proimmune Prokazyme Proliant promega Promocell ProSci ProSpec 丁香通为您找到 10 条 复苏冻存 产品的详细参数,实时报... 查看更多
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2021-09-09
货号：039-23511 查看更多
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2021-08-28
友康恒业生物科技（北京）有限公司在发布的无血清细胞冻存液供应信息，浏览与无血清细胞冻存液相关的产品或在搜索更多与无血清细胞冻存液相关的内容。 查看更多
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2021-08-26
上海科远迪生物科技有限公司在发布的即用型肿瘤细胞冻存液供应信息，浏览与即用型肿瘤细胞冻存液相关的产品或在搜索更多与即用型肿瘤细胞冻存液相关的内容。 查看更多
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2018-12-26
我们实验室一直用一种特简单但非常安全的细胞冻存方法，与大家共享：冻存液：一般用10%DMSO(推荐用sigema原装的，质量好不用预消毒)+10％血清的完全培养基，如果细胞珍贵的话最好用10％DMSO＋90％全血清降温方法：用最少两厘米厚的医用棉纱将冻存管紧紧包裹，扎紧，直接放入-70度冰箱，隔夜取出冻存 查看更多
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2019-06-24
赛业（广州）生物科技有限公司在发布的成人骨髓间质干细胞无蛋白非程序冻存液供应信息，浏览与成人骨髓间质干细胞无蛋白非程序冻存液相关的产品或在搜索更多与成人骨髓间质干细胞无蛋白非程序冻存液相关的内容。 查看更多
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讨论一下单抗原液冻存的问题 生物制药版论坛123
jackieustc2021-07-30
最近与战友们探讨原液冻存的问题，各家做的五花八门，做法各不相同。
有的-20度冻存的（有的项目有问题，有的没问题）、有-35度冻存的，有-60度冻存的，有-80度冻存的。
冻存的因素：冻存温度，这个文献等于没说（依据是啥，@fjj8802战友说低于玻璃化转变温度，是否还有别的考虑）、冷冻速率（快，快到什么程度），冻时间（完全冻上，这个貌似需要估计吧，尤其是大量的，如何靠小模型能看出来）、融化温度、融化速率（搅拌）、规模（这个还真不好靠模型来评估）。评估如何来评估冻存的质量好坏，有人说冻融循环，这个小模型适合看蛋白是否对冻融敏感，但是不能很快知道这个蛋白长期冻存的稳定问题。
开本帖探讨原液冻存的注意事项及依据，战友们也可以谈谈自己家目前的做法。
链接：
//d.dxy.cn/detail/12769151
回复：【求助】蛋白制剂处方筛选及稳定性研究参考书，求电子的-蚂蚁淘论坛
CurrentPerspectivesonStABIlityofProteinDrugProductsduringFormulation,FillandFinishOperations.pdf(235.33k)
【求助】试剂盒提取冻存全血DNA PCR技术讨论版论坛123
yangjie11262021-08-21
我用bioteke的中量全血基因组DNA提取试剂盒（溶液型）提取冻存全血DNA：蛋白质沉淀液处理后上清呈褐色或淡红色，不是无色；在加入异丙醇后是褐色或淡红色絮状沉淀，不是白色絮状DNA沉淀。
我是参照试剂盒说明一步一步来的，请问这是什么原因？
是不是溶血啦，还是蛋白质没有沉淀完全，如何解决这一问题？
感谢啦！
实验室超低温冰箱需要做温度分布验证吗质量保证蒲公英制药技术...123
才嘛顶说2642021-08-07
1、注意不要放在冷凝器出风口地方，以免阻碍散热。其它地方没什么风险。2、建议实验室低温冰箱一般是用于冻存一些样品，建议周围少放杂物，以免在取样品时，杂物掉落，对实验样品造成影响。
2014年临床医学检验主管技师考试模拟试卷及答案专业实践能力123
Trrrrrrouble2021-07-26
各位大神们，我的课题实验需要提取临床患者抗凝外周血的血浆进行冻存和后续研究，由于血样珍贵，老板让我把离心提取血浆之后所剩的沉淀也加以利用，从剩下的沉淀（血细胞）当中提取出白细胞并冻存，用于之后做western。我用自己的外周血标本试做了一下，5mlEDTA抗凝外周血，3000rpm4℃离心10min后，取上层血浆分装-80冻存用于相关ELAISA实验，然后在下层沉淀（血细胞）中加入3倍体积的溶血剂，静置10min使红细胞裂解之后离心，结果并没有明显的分层，我重复了加溶血剂裂解红细胞并离心的步骤，到最后的结果还是只能达到如图所示。可以看到一层灰白色物质，但无法完全分离提取白细胞，所以想请教各位大神：①我的操作中有哪些错误烦请大家指出；②我用的溶血剂是OptilyseC的溶血剂，是否是试剂的问题？是否需要购买专门的红细胞裂解液，或者自行配制？③为什么裂解红细胞之后分层并不明显，多次离心之后还是分不清楚？④如果可以提取出白细胞，是否可以直接加入冻存液将白细胞-80℃冻存用于之后的研究（主要是Western，不影响细胞内蛋白即可）？因为是第一次做实验，血样珍贵，这种处理方法做过的人也很少，烦请有经验的各位批评指正，向大家虚心请教学习，不胜感激！
【求助】求助细胞冻存步骤 细胞技术讨论版论坛123
你大爷WiVx2021-08-02
冻存血清与培养时的血清最好一致，保持整个体系的稳定性与持续性，
吹打最好还是用弯头的，用起来更为方便
吹打最好还是用弯头的，用起来更为方便
无菌实验室的管理要求123
二十四面怪人2021-07-28
您好，我是一个刚刚考上研究生的研一狗，导师要安排我管理一个实验室，我却完全没有任何头绪进行管理，恳请帮助，急！！！
【求助】ELISA测细胞培养上清液蛋白浓度 细胞技术讨论版 ...123
佐至夏2021-08-01
有质量好的细胞保存试剂吗?想购买.123
2021-07-27
亲，去康乃欣的细胞保存试剂供货与2000多家的医院，并且使用多年并无质量问题
冻存菌可以直接摇菌吗? 免疫学讨论版论坛123
旧城°04942021-08-10
不同的菌表现情况不同，做过的大肠杆菌基因工程菌一般不需要平板活化可以直接摇瓶培养，每次的生长情况比较稳定，这样可以简化操作步骤、节省时间和减少染菌几率，是可以尝试的；而有的菌则必须经过平板活化后再摇瓶培养，否则摇瓶培养会出现生长速度会很慢、生长很不稳定等不良状况
aliquots是什么意思 123
leo20012004-10-15
请教各位大侠，谢谢！！
【求助】求助细胞冻存步骤 经验共享 分析测试百科 123
伤逝_JayuB欼2021-08-05
细胞冻存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；
2. 取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；
4. 离心1000rpm，5min；
5. 去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml；
6. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；
7. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；
8. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；
2. 取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；
4. 离心1000rpm，5min；
5. 去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml；
6. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；
7. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；
8. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
在80度冰箱保存的植物叶片(大概两三个月了)还能提取出完整的叶绿体么...123
2021-08-11
可以，或者保存在液氮中
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