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enogene/EnoGeneFec™ 2000 Transfection Reagent/1000μl/EGF2000-1000
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EnoGeneFec™ 2000 Transfection ReagentPDF
Catalog Number:
EGF2000-1000Amount:
1000μlStorage/Stability:
and stabilityEnoGeneFec™ 2000 Transfection Reagent is provided in 1μg/μL concentration. It is shipped at room temperature and is stabilized for extended storage at +4°C for one year when very tightly closed.产品介绍EnoGene新推出的EnoGeneFec™ 转染试剂以最高的转染效率、使用方便、细胞毒性小、生物可降解为设计宗旨，EnoGene的新型配方克服了常见的阳离子或脂质体转染试剂带来的细胞毒性作用，更适合做长效和瞬时转染。使用这种新的转染试剂操作方便，可用于转染质粒、线性双链DNA、反义寡核苷酸及RNAi等，在实际使用中获得了非常理想的效果。EnoGeneFec™ 2000是针对贴壁细胞设计的转染试剂，可用于体外转染质粒、线性双链DNA、反义寡核苷酸及RNAi等。对常用的贴壁细胞转染效率可达80%以上。EnoGeneFec™ 2000可以形成微小的（平均大小约100-400nm）单层脂质体，靠静电作用结合到DNA的磷酸骨架上以及带负电的细胞膜表面，并与寡核苷酸等能形成稳定的较小的纳米胶体颗粒，通过细胞"内吞作用"进入细胞，能吸收溶酶体的H+，在复合体中形成酸性环境使核酸酶失活，保护DNA免受核酸酶的降解。进入细胞后，复合体囊泡肿胀破裂，将DNA释放到细胞质中，实现基因转染。EnoGeneFec™ 2000与其他转染试剂相比无论在转染效果和实验操作上都有明显的优势，主要表现为：●转染效率很高，对大多数贴壁细胞使用效果综合评价明显高于其它常用转染试剂●细胞毒性低，需要转染较大剂量的DNA时，毒性明显低于其它常用转染试剂●操作简单，以最短的时间完成转染，转染试剂-DNA复合物的形成时间只需20min试剂盒组分组分EnoGeneFec™ 2000 Transfection ReagentEGF2000-5000.5mlEGF2000-10001mlEGF2000-15001.5ml操作步骤（以6孔板为例）转染前18-24小时使用完全培养基在6孔细胞培养板，每孔接种2ml 细胞培液（根据细胞培养条件，可含血清及抗生素），约为1-3×105个细胞，转染前细胞密度应达到70－90%。若使用其他的培养板或培养皿，可以参照下表中提供的孔（或皿）表面积和体积相应的调整细胞接种数、EnoGeneFec™ 2000加量。培养板表面积(cm2/孔or皿)可容纳培养基体积（ml/孔or皿）DNA（或其他核苷酸类成分）用量（µg）EnoGeneFec™ 2000用量待加的无血清、无抗生素的培养基体积96孔0.30.1-0.20.2μg溶于 20 μl 培养基0.4-1.0 μl 溶于 20 μl培养基50μl24孔20.5(0.2-)1 μg溶于 25 μl 培养基2-5 μl 溶于 25 μl培养基0.4ml12孔41.0(0.5-)2.0 μg溶于 100 μl培养基4-10 μl 溶于 100 μl培养基0.6ml6孔102.0(1.0-)5.0 μg溶于 100 μl培养基10-25 μl 溶于 100 μl培养基0.8ml35 mm102.0(1.0-)5.0 μg溶于 100 μl培养基10-25μl 溶于 100 μl培养基0.8ml60mm205ml(3.0-)10.0μg 溶于 500 μl培养基20-50μl 溶于 500 μl培养基2.4ml10-cm6010ml(8.0-)20.0 μg 溶于 1.5ml培养基40-100μl 溶于 800μl培养基6.4ml2. 转染复合物的制备：溶液A：将5µg 质粒DNA（或其他核苷酸类成分）加入到100μl无血清、无抗生素的培养基，在1.5ml无菌EP管中混匀后，室温放置5分钟。溶液B：EnoGeneFec™ 2000在使用前请震荡混匀。将10-25µl EnoGeneFec™ 2000加入到100μl 无血清、无抗生素的培养基中，在1.5ml无菌EP管中混匀，室温放置5分钟。将溶液A加入到溶液B中，轻轻混匀，室温放置20分钟，获得约200μl转染复合物 （注：该转染复合物在室温下5小时内是稳定的）。3. 将800μl 无血清、无抗生素的培养基加入到上述的200μl转染复合物中，轻轻混匀，获得约1.0ml转染复合物溶液。4. 将培养板中的培养基弃去，将第3步获得的1.0ml转染复合物溶液加入到培养孔中覆盖细胞。5. 于5-8小时后，弃去每孔中的转染复合物溶液，加入2.0ml完全培养基（根据细胞培养条件，可含血清及抗生素），37℃孵育转染细胞18-24小时6. 收集细胞用于分析。如要建立稳定转染，于转染24小时后将细胞按1:10传代至新鲜培养基中（根据细胞培养条件，可含血清及抗生素），传代次日可以换用选择培养基。注意事项1.质粒DNA的质量使用高纯度的质粒DNA也是转染试验中的关键因素。为了保证试验的结果，建议对提取的质粒DNA的量和纯度进行检测。DNA含量(μg/mL)=50×(260 nm的读数)×稀释倍数，另外通过检测质粒DNA在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280）估计核酸的纯度，OD260/OD280=1.8说明DNA样本纯度较高。2. 转染细胞的要求细胞的传代次数是影响转染效果的重要因素，推荐使用在50代以内的细胞进行转染试验。要求在转染前24小时对细胞再次传代。3. 血清的影响。在EnoGeneFec™ 2000和DNA形成转染复合物的过程中不能添加血清。4. EnoGeneFec™ 2000的用量为了达到更高的转染效率，对于接种细胞密度在70%-90%之间的样本，可通过预试验在EnoGeneFec™ 2000（μl ）∶DNA（μg ）=1∶1 - 5∶1之间选择最佳的比例。EnoGeneFec™ 2000（μl）∶DNA（μg）的推荐比例为2∶1或5：1。对于一般细胞，2：1即可获得理想转染效果；对于较难转染的细胞，建议使用5：1。五、储存EnoGeneFec™ 2000以1 μg/μl浓度液体形式提供，保存在4℃。常温运输。保存期：一年Price:
220$Research Area:
Stem Cells Cancer Cardiovascular Cell Biology Epigenetics & Nuclear Signaling Developmental Biologys Immunology Drug Discovery Products Metabolism Neuroscience Signal Transduction
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上海笃玛生物科技有限公司在发布的精子细胞冻存液进口原装供应信息，浏览与精子细胞冻存液进口原装相关的产品或在搜索更多与精子细胞冻存液进口原装相关的内容。 查看更多
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2018-12-26
第二节 含微生物样品的富集培养富集（enrichment）培养是在目的微生物含量较少时，根据微生物的生理特点，设计一种选择性培养基，创造有利的生长条件，使目的微生物在最适的环境下迅速 查看更多
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2019-12-28
Anatrace Ancell 丁香通为您找到 3 条 复苏冻存 产品的详细参数,实时报价、价格行情、优质批发/供应等信息,您还可以找 冻存细胞复苏,cm6,固体密度计 等产品信... 查看更多
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2019-03-03
北京华迈科生物技术有限责任公司在发布的细菌冻存液供应信息，浏览与细菌冻存液相关的产品或在搜索更多与细菌冻存液相关的内容。 查看更多
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2018-12-26
Announcement Codon Usage Database is an extended WWW version of CUTG (Codon Usage Tabulated from GenBank). The frequency of codon use in each organism is made 查看更多
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2021-09-11
缩小细胞培养体积试验证明，MSCs最好培养于直径15cm的Nunclon或Corning板中，面积在140cm2和150cm2之间。细胞产率取决于培养皿的数量，一般使用此方法传代，每个培养皿中可收获5X105个细胞。来源：《人干细胞培养》 查看更多
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赛业（广州）生物科技有限公司在发布的间质干细胞无蛋白非程序冻存液供应信息，浏览与间质干细胞无蛋白非程序冻存液相关的产品或在搜索更多与间质干细胞无蛋白非程序冻存液相关的内容。 查看更多
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2020-04-23
重庆市寰宇安泰生物科技有限公司在发布的STEM-CELLBANKER 细胞冻存液供应信息，浏览与STEM-CELLBANKER 细胞冻存液相关的产品或在搜索更多与STEM-CELLBANKER 细胞冻存液相关的内容。 查看更多
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2021-08-31
上海杰美基因医药科技有限公司在发布的精子细胞冻存液供应信息，浏览与精子细胞冻存液相关的产品或在搜索更多与精子细胞冻存液相关的内容。 查看更多
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2021-09-18
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细胞冻存液的原理及配制方法 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提 查看更多
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哪些人需要做精液冷冻保存呢?精液保存生殖男科/四川省人类精子...123
2021-08-18
只有医院生殖中心和精子库才有资格做吧，自己好像不允许也没那个条件
酵母转化试剂盒中peg中文名是什么意思123
亚由美JOA2017-09-29
酵母转化试剂盒中peg中文名是什么意思
1、毕氏酵母氯化锂转化法
(1)试剂1M LiCl(用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌;必要时用消毒去离子水稀释)50% PEG3350(Sigma P3640 用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌，用较紧的盖子的瓶子分装)2mg/ml salmon sperm DNA / TE(10mM Tris-Cl, pH8.0, 1.0mM EDTA)-20℃保存注：醋酸锂对毕氏酵母无效，仅氯化锂有效;PEG3350可屏蔽高浓度LiCl的毒害作用;
(2)感受态毕氏酵母的制备接种Pachia pastoris到50ml YPD培养基中，30℃摇菌过夜(约24～28h)培养到OD值为0.8～1.0(约108 Cells/ml);收获细胞，用25ml无菌水洗涤一次，室温下1500g离心10min;重悬细胞于1ml 100mM LiCl溶液中，将悬液转入1.5ml离心管;离心机最大速度离心15秒沉淀菌体，重悬菌体于400ul 100mM LiCl溶液中;按50ul/管分装，立即进行转化;注：不要将感受态酵母菌冰浴;
(3)毕氏酵母的转化煮沸1ml鲑鱼精DNA 5min，迅速冰浴以制备单链担体DNA;将感受态酵母菌离心，以Tips去除残余的LiCl溶液;对于每一个转化，按以下顺序加入：50% PEG3350 240ul1M LiCl 36ul2mg/ml 单链Salmon sperm DNA 25ul5～10ug/50ul H2O 质粒DNA 50ul剧烈旋涡混匀直至沉淀菌体完全分布均匀(约1min);30℃水浴孵育30min;42℃水浴热休克20～25min;6000～8000rpm离心收集酵母菌体;重悬酵母于1ml YPD培养基，30℃摇床孵育;1～4h后，取25～100ul菌液铺选择性培养基平板，于30℃培养2～3天鉴定;
2、毕氏酵母PEG1000转化法
(1)试剂缓冲液A：1.0M Sorbitol，10mM Bicine，pH8.35(sigma),3%(v/v)ethylene glycol缓冲液B：40%(w/v)PEG1000(sigma)，0.2M Bicine，pH8.35缓冲液C：0.15M NaCl，10mM Bicine，pH8.35未污染的新鲜、试剂级DMSO，-70℃保存注：缓冲液A、B、C均用滤膜过滤，-20℃保存;将DNA直接加在冻结的酵母细胞上是本实验的关键之处(即使在冰上解冻的待转化细胞，其摄取外源DNA的能力也在解冻过程中迅速下降;如进行多样品的转化，建议按6样品/组进行);
(2)待转化毕氏酵母的制备接种环接种Pachia pastoris于YPD平板，30℃培养2d;挑取单克隆酵母菌株于10mlYPD培养基中，30℃振荡培养过夜;取步骤2中小量菌液接种到100mlYPD培养基中振荡培养，待其OD值从0.1升到0.5～0.8;室温下3000g离心收集酵母菌体，50ml缓冲液A洗涤一次;重悬菌体于4ml缓冲液A中，按0.2ml/管分装于1.5ml的离心管中，每管加入11ulDMSO，混合后迅速于液氮中冷冻，-70℃保存
(3)毕氏酵母的转化将约50ug线性化质粒DNA溶于20ul TE或水中，直接加于冻结的酵母细胞中;加入担体DNA(40ug变性超声线性化鲑鱼精DNA)以获得最大转化率;37℃水浴孵育5min，中间混合样品1～2次;取出离心管，加入1.5ml缓冲液B，彻底混匀;30℃水浴孵育1h;室温下2000g离心10min，去除上清液，菌体沉淀重悬于1.5ml缓冲液C中;离心样品，去除上清液，轻微操作将样品重悬于0.2ml缓冲液C中;将所有转化液铺于选择性平板，于30℃孵育3～4天后，鉴定;
3、毕氏酵母电转化法
(1)E.coli TOP10F’感受态细胞的制备取10ul TOP10F’菌液，接种于200ml LB液体培养基中活化培养，37℃，200 rpm，16～18小时。取100ul菌液接种于200ml液体LB培养基中。37℃，200 rpm，培养16～18小时。灭菌500 ml离心管，4℃，4000 rpm，20 min。得菌体沉淀。弃上清，菌体用10%甘油重悬并洗涤。重复洗涤3次。第三次离心后，弃绝大部分上清，留下约1ml 液体用于重悬菌体。从制得得感受态细胞中，取200ul于灭菌EP管中，加入连接反应产物5ul，混匀，不要产生气泡，在冰上放置5min。将混匀后得200ul菌液移入电击杯中。使用电击穿孔仪进行转化，设置为电压 2500 V，时间 5 ms。电击后，往电击杯中加入 800ul SOC培养基，冲洗出菌体，转移至灭菌1.5 ml EP管中。37℃，150 rpm ，轻摇45～60 min。取全部均匀涂布于含 Zeocin 25 ug/ml 的LLB-Zeocin平板上，正放，待涂布液不在流动，37℃ 培养12～16小时。
(2)线性化质粒DNA对Pichia pastorisGS115的转化取新鲜制备的(或-70℃冻存的)感受态细胞置于冰浴中，使其完全解冻;
1)将100μl菌体移出至一新的无菌Eppendorf管中，加入5-20μg线性化质粒(5～10μl)，轻弹混匀，尽数吸出转移到0.2cm型的电穿孔转化杯中;
2) 转化杯置于冰浴中5～10分钟，保持低温。
3) 电穿孔转化电击条件：电压：1500V;电阻：400Ω;电容：25μF;脉冲时间：10mS;一次电击。
4) 电击后，马上在电击转化杯中加入1ml 4℃预冷的1M的山梨醇溶液，用微量移液枪吹打均匀，置于冰浴中;5) 取30℃烘至表面半干的MD培养基平板，在超净工作台上无菌操作涂布平板，400μl/板
1、毕氏酵母氯化锂转化法
(1)试剂1M LiCl(用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌;必要时用消毒去离子水稀释)50% PEG3350(Sigma P3640 用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌，用较紧的盖子的瓶子分装)2mg/ml salmon sperm DNA / TE(10mM Tris-Cl, pH8.0, 1.0mM EDTA)-20℃保存注：醋酸锂对毕氏酵母无效，仅氯化锂有效;PEG3350可屏蔽高浓度LiCl的毒害作用;
(2)感受态毕氏酵母的制备接种Pachia pastoris到50ml YPD培养基中，30℃摇菌过夜(约24～28h)培养到OD值为0.8～1.0(约108 Cells/ml);收获细胞，用25ml无菌水洗涤一次，室温下1500g离心10min;重悬细胞于1ml 100mM LiCl溶液中，将悬液转入1.5ml离心管;离心机最大速度离心15秒沉淀菌体，重悬菌体于400ul 100mM LiCl溶液中;按50ul/管分装，立即进行转化;注：不要将感受态酵母菌冰浴;
(3)毕氏酵母的转化煮沸1ml鲑鱼精DNA 5min，迅速冰浴以制备单链担体DNA;将感受态酵母菌离心，以Tips去除残余的LiCl溶液;对于每一个转化，按以下顺序加入：50% PEG3350 240ul1M LiCl 36ul2mg/ml 单链Salmon sperm DNA 25ul5～10ug/50ul H2O 质粒DNA 50ul剧烈旋涡混匀直至沉淀菌体完全分布均匀(约1min);30℃水浴孵育30min;42℃水浴热休克20～25min;6000～8000rpm离心收集酵母菌体;重悬酵母于1ml YPD培养基，30℃摇床孵育;1～4h后，取25～100ul菌液铺选择性培养基平板，于30℃培养2～3天鉴定;
2、毕氏酵母PEG1000转化法
(1)试剂缓冲液A：1.0M Sorbitol，10mM Bicine，pH8.35(sigma),3%(v/v)ethylene glycol缓冲液B：40%(w/v)PEG1000(sigma)，0.2M Bicine，pH8.35缓冲液C：0.15M NaCl，10mM Bicine，pH8.35未污染的新鲜、试剂级DMSO，-70℃保存注：缓冲液A、B、C均用滤膜过滤，-20℃保存;将DNA直接加在冻结的酵母细胞上是本实验的关键之处(即使在冰上解冻的待转化细胞，其摄取外源DNA的能力也在解冻过程中迅速下降;如进行多样品的转化，建议按6样品/组进行);
(2)待转化毕氏酵母的制备接种环接种Pachia pastoris于YPD平板，30℃培养2d;挑取单克隆酵母菌株于10mlYPD培养基中，30℃振荡培养过夜;取步骤2中小量菌液接种到100mlYPD培养基中振荡培养，待其OD值从0.1升到0.5～0.8;室温下3000g离心收集酵母菌体，50ml缓冲液A洗涤一次;重悬菌体于4ml缓冲液A中，按0.2ml/管分装于1.5ml的离心管中，每管加入11ulDMSO，混合后迅速于液氮中冷冻，-70℃保存
(3)毕氏酵母的转化将约50ug线性化质粒DNA溶于20ul TE或水中，直接加于冻结的酵母细胞中;加入担体DNA(40ug变性超声线性化鲑鱼精DNA)以获得最大转化率;37℃水浴孵育5min，中间混合样品1～2次;取出离心管，加入1.5ml缓冲液B，彻底混匀;30℃水浴孵育1h;室温下2000g离心10min，去除上清液，菌体沉淀重悬于1.5ml缓冲液C中;离心样品，去除上清液，轻微操作将样品重悬于0.2ml缓冲液C中;将所有转化液铺于选择性平板，于30℃孵育3～4天后，鉴定;
3、毕氏酵母电转化法
(1)E.coli TOP10F’感受态细胞的制备取10ul TOP10F’菌液，接种于200ml LB液体培养基中活化培养，37℃，200 rpm，16～18小时。取100ul菌液接种于200ml液体LB培养基中。37℃，200 rpm，培养16～18小时。灭菌500 ml离心管，4℃，4000 rpm，20 min。得菌体沉淀。弃上清，菌体用10%甘油重悬并洗涤。重复洗涤3次。第三次离心后，弃绝大部分上清，留下约1ml 液体用于重悬菌体。从制得得感受态细胞中，取200ul于灭菌EP管中，加入连接反应产物5ul，混匀，不要产生气泡，在冰上放置5min。将混匀后得200ul菌液移入电击杯中。使用电击穿孔仪进行转化，设置为电压 2500 V，时间 5 ms。电击后，往电击杯中加入 800ul SOC培养基，冲洗出菌体，转移至灭菌1.5 ml EP管中。37℃，150 rpm ，轻摇45～60 min。取全部均匀涂布于含 Zeocin 25 ug/ml 的LLB-Zeocin平板上，正放，待涂布液不在流动，37℃ 培养12～16小时。
(2)线性化质粒DNA对Pichia pastorisGS115的转化取新鲜制备的(或-70℃冻存的)感受态细胞置于冰浴中，使其完全解冻;
1)将100μl菌体移出至一新的无菌Eppendorf管中，加入5-20μg线性化质粒(5～10μl)，轻弹混匀，尽数吸出转移到0.2cm型的电穿孔转化杯中;
2) 转化杯置于冰浴中5～10分钟，保持低温。
3) 电穿孔转化电击条件：电压：1500V;电阻：400Ω;电容：25μF;脉冲时间：10mS;一次电击。
4) 电击后，马上在电击转化杯中加入1ml 4℃预冷的1M的山梨醇溶液，用微量移液枪吹打均匀，置于冰浴中;5) 取30℃烘至表面半干的MD培养基平板，在超净工作台上无菌操作涂布平板，400μl/板
lps刺激raw264.7细胞 生物科学 细胞科学论坛学术科研...123
破碎的儵2017-09-29
RAW264.7细胞为小鼠单核巨噬细胞白血病细胞
培养基:1640+10%FBS
消化条件: 预冷PBS浸泡5－10Min
细胞正常形态为圆形,贴壁生长,生长速度较快,细胞难消化,消化时用预冷的PBS淋洗,然后浸泡5min,让后用枪轻轻吹起吹散收集离心,这个过程很关键,如果没有消化到位就吹打或消化过久,细胞次日贴壁就会分化,分化之后的形态是细胞两端长出尖尖的触角,细胞不再圆形贴壁,而是平铺向四周扩散生长。
所以你换培养基试试看，我养的挺好的！
培养基:1640+10%FBS
消化条件: 预冷PBS浸泡5－10Min
细胞正常形态为圆形,贴壁生长,生长速度较快,细胞难消化,消化时用预冷的PBS淋洗,然后浸泡5min,让后用枪轻轻吹起吹散收集离心,这个过程很关键,如果没有消化到位就吹打或消化过久,细胞次日贴壁就会分化,分化之后的形态是细胞两端长出尖尖的触角,细胞不再圆形贴壁,而是平铺向四周扩散生长。
所以你换培养基试试看，我养的挺好的！
样品进入无菌室的管理123
_DJ___IXfrj°2021-07-29
进入前肯定是要进行消毒的，穿戴好衣服鞋帽，下面给你介绍下一些实验室要注意的安全事项吧。 1、加入试剂之前，把它混匀一下，以免放置时间长了浓度不均。冻存的试剂更是要等全部融化后才能使用。
冻存菌可以直接摇菌吗? 免疫学讨论版论坛123
旧城°04942021-08-10
不同的菌表现情况不同，做过的大肠杆菌基因工程菌一般不需要平板活化可以直接摇瓶培养，每次的生长情况比较稳定，这样可以简化操作步骤、节省时间和减少染菌几率，是可以尝试的；而有的菌则必须经过平板活化后再摇瓶培养，否则摇瓶培养会出现生长速度会很慢、生长很不稳定等不良状况
做ELISA实验前,事先收集好的标本该如何处理?123
zhanyc852021-08-09
这个问题由武汉新启迪生物来为您解答。
做ELISA实验，在处理样本前应该先了解收集样本的注意事项。
【标本收集注意事项】
1.收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2.血清和血浆避免使用溶血，高血脂标本。
3.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。
4.标本收集后若不及时检测，需按一次使用量分装，冻存于-20℃，-80℃电冰箱内，避免反复冻融。
5.可根据标本的实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数) 。
6.收集标本，尽量做到双份的用量，避免一次实验失败，重复实验时标本缺失，从而耽误实验进程。
7.收集标本时，应该做好防护措施（比如戴手套，口罩，护目镜等），认为所有标本都具有一定的潜在危险性。
8.样本处理应该在生物安全柜里面，并且正确使用生物安全柜。
样本正确的处理方法应该是这样的：
【标本处理办法】
1.血清：将采集的全血静置冰箱4℃过夜，然后1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
2.血浆：用EDTA，枸橼酸钠，肝素等作为抗凝剂，加入血液混匀后，1000-3000rpm离
心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）
保存。
3.组织匀浆：切取组织块，0.01MPBS中过洗一次；按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例，在冰水中匀浆。匀浆完成后，5000-10000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
4.细胞培养上清：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
5.尿液，腹水，脑脊液等：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃3-6个月）保存。
注：样品稀释的一般原则
用户须查阅相关文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。
希望可以给您提供帮助，祝您科研顺利！
做ELISA实验，在处理样本前应该先了解收集样本的注意事项。
【标本收集注意事项】
1.收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2.血清和血浆避免使用溶血，高血脂标本。
3.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。
4.标本收集后若不及时检测，需按一次使用量分装，冻存于-20℃，-80℃电冰箱内，避免反复冻融。
5.可根据标本的实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数) 。
6.收集标本，尽量做到双份的用量，避免一次实验失败，重复实验时标本缺失，从而耽误实验进程。
7.收集标本时，应该做好防护措施（比如戴手套，口罩，护目镜等），认为所有标本都具有一定的潜在危险性。
8.样本处理应该在生物安全柜里面，并且正确使用生物安全柜。
样本正确的处理方法应该是这样的：
【标本处理办法】
1.血清：将采集的全血静置冰箱4℃过夜，然后1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
2.血浆：用EDTA，枸橼酸钠，肝素等作为抗凝剂，加入血液混匀后，1000-3000rpm离
心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）
保存。
3.组织匀浆：切取组织块，0.01MPBS中过洗一次；按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例，在冰水中匀浆。匀浆完成后，5000-10000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
4.细胞培养上清：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
5.尿液，腹水，脑脊液等：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃3-6个月）保存。
注：样品稀释的一般原则
用户须查阅相关文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。
希望可以给您提供帮助，祝您科研顺利！
细胞冻存 123
血刺怪怪482021-08-06
细胞冻存注意事项：
1.欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态，约为80 – 90 ％致密度。
2. 冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。
3. 注意冷冻保护剂之品质，冻存液：10%DMSO+90%FBS,我做细胞试验从不加双抗，NAHCO3-未加
4. 冷冻保存的细胞浓度：
冻存方法
1.冷冻前一日前更换半量或全量培养基，观察细胞生长情形。
2.收集培养之细胞，取少量细胞悬浮液(约0.1 ml) 计数细胞浓度及冻前存活率。 离心速度不要大于1000rpm/min或800g/min。
3.离心弃上清，加入适量冷冻保存溶液，使细胞浓度为1-5 x 106 cells/ml，混匀，分装于无菌冻存管中，1 ml/vial，悬浮细胞可以浓一些。
4.冷冻保存方法1: 冷冻管置于4 oC 10 分钟→ -20 oC 30 分钟→ -80 oC 16～18 小时(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 长期储存。 或4 oC 1h→ -20 oC 1h→ -80 oC 1h(或隔夜) → 液氮槽vapor phase
最常见的我的k562细胞就是这样做的。
阳离子脂质体法 ：稳定转染,瞬时转染,所有细胞使用方法简单，可携带大片段DNA，通用于各种类型的裸露DNA或RNA，能转染各种类型的细胞，没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率，但在体内，能被血清清除，并在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，导致高水平的毒性，这在很大程度上限制了其应用。
阳离子聚合物 ：稳定转染,瞬时转染,所有细胞。除了具有阳离子脂质体的转染效率高，操作简单，适用范围广，重复性好等特点外，还具有在体内，转染效率高，细胞毒性低等特点，是新一代的转染试剂。
1.欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态，约为80 – 90 ％致密度。
2. 冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。
3. 注意冷冻保护剂之品质，冻存液：10%DMSO+90%FBS,我做细胞试验从不加双抗，NAHCO3-未加
4. 冷冻保存的细胞浓度：
冻存方法
1.冷冻前一日前更换半量或全量培养基，观察细胞生长情形。
2.收集培养之细胞，取少量细胞悬浮液(约0.1 ml) 计数细胞浓度及冻前存活率。 离心速度不要大于1000rpm/min或800g/min。
3.离心弃上清，加入适量冷冻保存溶液，使细胞浓度为1-5 x 106 cells/ml，混匀，分装于无菌冻存管中，1 ml/vial，悬浮细胞可以浓一些。
4.冷冻保存方法1: 冷冻管置于4 oC 10 分钟→ -20 oC 30 分钟→ -80 oC 16～18 小时(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 长期储存。 或4 oC 1h→ -20 oC 1h→ -80 oC 1h(或隔夜) → 液氮槽vapor phase
最常见的我的k562细胞就是这样做的。
阳离子脂质体法 ：稳定转染,瞬时转染,所有细胞使用方法简单，可携带大片段DNA，通用于各种类型的裸露DNA或RNA，能转染各种类型的细胞，没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率，但在体内，能被血清清除，并在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，导致高水平的毒性，这在很大程度上限制了其应用。
阳离子聚合物 ：稳定转染,瞬时转染,所有细胞。除了具有阳离子脂质体的转染效率高，操作简单，适用范围广，重复性好等特点外，还具有在体内，转染效率高，细胞毒性低等特点，是新一代的转染试剂。
...无菌冷冻管 用于分装试剂用的无菌细胞冻存管 液氮细胞冻存管耐低...123
姚水娃2021-07-22
有2ml和5ml的，单位老师统一订的晶安生物2ml的，望采纳！
分装试剂用冻存管好还是离心管好_问答详情_蚂蚁淘,【正品极速】...123
乔爱熙4142017-09-29
冻存管存好 这样子便于试剂在合理的条件下储存 以后还能继续使用哈
【求助】血浆提取RNA方法 实验方法123
淆之战2021-08-15
我要提取血浆RNA，现在冻存于-80度，采集时已将血浆和血细胞分离，现在要抽提RNA，不知道还能提出来不？想问下用哪个protocol较好？还有提出后，如何保存，因为还要做RT-PCR，谢谢各位了！
【求助】冻存组织用EP管好还是用细胞冻存管好啊? 实验室建设与...123
长地久◇2021-08-13
1. 新鲜组织标本放入液氮要用冻存管，EP管密封性不好，液氮容易漏进去，而且也耐受不了-198°的低温，容易爆管
2. 普通冻存管就可以，不用特意再去灭酶处理，因为RNA酶污染主要是内源性的，外界的很少，主要来自于人的皮肤、呼吸，戴好口罩手套就可以了，冻存管这些，影响很小忽略不计
3. 组织在液氮里冻硬了就可以拿到-80°保存，随时取用，不用长期在液氮里。当然我们是不会长期保存的，没有试过在-80°里呆一年。不过话说回来，除非是几千例标本的大型课题，一般都很少需要保存标本保存1年以上的吧，几十例一百例的东西，两三个月最多半年就处理掉了，所以我们做小课题的都是取到组织后立马放液氮，再转移到-80°
（仅供参考）
2. 普通冻存管就可以，不用特意再去灭酶处理，因为RNA酶污染主要是内源性的，外界的很少，主要来自于人的皮肤、呼吸，戴好口罩手套就可以了，冻存管这些，影响很小忽略不计
3. 组织在液氮里冻硬了就可以拿到-80°保存，随时取用，不用长期在液氮里。当然我们是不会长期保存的，没有试过在-80°里呆一年。不过话说回来，除非是几千例标本的大型课题，一般都很少需要保存标本保存1年以上的吧，几十例一百例的东西，两三个月最多半年就处理掉了，所以我们做小课题的都是取到组织后立马放液氮，再转移到-80°
（仅供参考）
【求助】如何冻存肿瘤组织呢?SOS! 再生医学与组织工程讨论版...123
爱景efWU52021-08-16
当然是可以的。但是你要保证你的肿瘤组织是保存在配制好的冻存液中，冻存的过程也是从低温逐步转移至液氮中而不是直接扔进液氮里。然后按照标准的复苏流程对肿瘤组织进行复苏。可以成功将肿瘤组织在免疫缺陷的小鼠身上复苏成功。而且复苏成功率很高。
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