| Product Name | Myristolated PKC Zeta, Pseudosubstrate (ZIP)Myr - SIYRRGARRWRKL |
| Size | 1 mg |
| Catalog # | AS-63361 |
| US$ | $125 |
| Purity | % Peak Area By HPLC ≥ 95% |
This is a myristoylated PKCζ pseudosubstrate-derived ζ-inhibitory peptide (ZIP) found to inhibit an atypical type of Protein Kinase C ζ (zeta). It has been shown to also interact with PKC family isoforms and disrupt conventional PKC targeting and translocation leading to physiological memory impairment. The sequence corresponds to the pseudosubstrate region of the N-terminal regulatory domain that maintains the enzyme in an inactive form in the absence of activator. The pseudosubstrate peptide has also been shown to be a competitive inhibitor of PKCζ in neurons. This peptide was also used to demonstrate thatPKC ζ is involved in the regulation of integrin-dependent adhesion and chemotaxis of intact human neutrophils. | |
| Detailed Information | |
| Storage | -20°C |
| References | 1, Bogard AS. and Tavalin JS. Mol Pharmacol, 88(4):728-735 (2015). 2, Yao Y. et al. Neuropharmacol, 64:37-44 (2013). 3, Dang P M-C. et al. J Immunol, 166(2):1206-1213 (2001) |
| Molecular Weight | 1928.5 |
| Myr-SIYRRGARRWRKL | |
| Sequence(Three-Letter Code) | Myr - Ser - Ile - Tyr - Arg - Arg - Gly - Ala - Arg - Arg - Trp - Arg - Lys - Leu - OH |
| Product Citations | Bogard, A. S. et al. (2015). Protein kinase C (PKC)ζ pseudosubstrate inhibitor peptide promiscuously binds PKC family isoforms and disrupts conventional PKC targeting and translocation. Mol Pharmcol doi: 10.1124/mol.115.099457. Deng, Z. et al. (2015). Zeta inhibitory peptide (ZIP) erases long-term memories in a cockroach. Neurobiol Learning Memory 118, 89.Kim, JV. et al. (2015). Spinal dopaminergic projections control the transition to pathological pain plasticity via a D1/D5-mediated mechanism. J Neurosci 35, 6307. doi: 10.1523/JNEUROSCI.3481-14.2015.Lu, R. et al. (2015). PKCι interacts with Rab14 and modulates epithelial barrier function through regulation of claudin-2 levels. Mol Biol Cell, mbc-E14. doi: 10.1091/mbc.E14-12-1613 Tillu, DV. et al. (2015). Protease activated receptor 2 (PAR2) activation is sufficient to induce the transition to a chronic pain state Short Title: PAR2 activation causes chronic pain. Pain doi: 10.1097/j.pain.0000000000000125.Li, Q. et al. (2014). Making synapses strong: metaplasticity prolongs associativity of long-term memory by switching synaptic tag mechanisms. Cereb Cortex 24, 353. doi: 10.1093/cercor/bhs315.Vélez-Hernández, ME. et al. (2013). Inhibition of Protein kinase Mzeta (PKMζ) in the mesolimbic system alters cocaine sensitization in rats. J Drug Alcohol Res 2, 235669. doi: 10.4303/jdar/235669.Yao, Y. et al. (2013). Matching biochemical and functional efficacies confirm ZIP as a potent competitive inhibitor of PKMζ in neurons. Neuropharmacol 64, 37.Pauli, WM. et al. (2012). Inhibiting PKMζ reveals dorsal lateral and dorsal medial striatum store the different memories needed to support adaptive behavior. |
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做ELISA实验,在处理样本前应该先了解收集样本的注意事项。
【标本收集注意事项】
1.收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。
2.血清和血浆避免使用溶血,高血脂标本。
3.标本应清澈透明,悬浮物应离心去除。
4.标本收集后若不及时检测,需按一次使用量分装,冻存于-20℃,-80℃电冰箱内,避免反复冻融。
5.可根据标本的实际情况,做适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数) 。
6.收集标本,尽量做到双份的用量,避免一次实验失败,重复实验时标本缺失,从而耽误实验进程。
7.收集标本时,应该做好防护措施(比如戴手套,口罩,护目镜等),认为所有标本都具有一定的潜在危险性。
8.样本处理应该在生物安全柜里面,并且正确使用生物安全柜。
样本正确的处理方法应该是这样的:
【标本处理办法】
1.血清:将采集的全血静置冰箱4℃过夜,然后1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
2.血浆:用EDTA,枸橼酸钠,肝素等作为抗凝剂,加入血液混匀后,1000-3000rpm离
心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)
保存。
3.组织匀浆:切取组织块,0.01MPBS中过洗一次;按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例,在冰水中匀浆。匀浆完成后,5000-10000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
4.细胞培养上清:1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
5.尿液,腹水,脑脊液等:1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃3-6个月)保存。
注:样品稀释的一般原则
用户须查阅相关文献了解标本内待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。
希望可以给您提供帮助,祝您科研顺利!
1. 净化工作台
2. 离心机
3. 恒温水浴箱
4. 冰箱(4℃、-20℃、-70℃)
5. 倒置相差显微镜
6. 培养箱
7. 液氮冰箱
(二)玻璃器皿
1. 吸管(弯头、直头)
2. 培养瓶
3. 玻璃瓶(250ml、100ml)
4. 废液缸
(三)塑料器皿
1. 吸头
2. 枪头
3. 胶塞
4. 移液管(10ml)
5. 15ml离心管
6. 冻存管(1~2ml)
(四)其他物品
1. 微量加样枪
2. 红血球计数板
3. 记号笔
4. 医用橡皮膏
5. 移液枪
(五)试剂
1. D-Hanks液
2. 小牛血清
3. 培养液
4. 双抗(青霉素、链霉素)
5. 胰蛋白酶(0.08%)
6. 1NHCl
7. 7.4%NaHCO3
8. DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油 (一)细胞冻存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的冻存培养液;
2. 取对数生长期的细胞,用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来,悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中;
3. 离心1000rpm,5min;
4. 去除胰蛋白酶及旧的培养液,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml~1×107/ml;
5. 将细胞分装入冻存管中,每管1~1.5 ml;
6. 在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者;
7. 冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/ min;当温度达-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。
(二) 细胞复苏
1. 从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37℃温水中,并不时摇动令其尽快融化。
2. 从37℃水浴中取出冻存管,打开盖子,用吸管吸出细胞悬液,加到离心管并滴加10倍以上培养液,混匀;
3. 离心, 1000rpm,5min;
4. 弃去上清液,加入含10%小牛血清培养液重悬细胞,计数,调整细胞密度,接种培养瓶,37℃培养箱静置培养;
5. 次日更换一次培养液,继续培养。 1.从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存,但最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液;
2.将冻存管放入液氮容器或从中取出时,要做好防护工作,以免冻伤;
3.冻存和复苏最好用新配制的培养液。向左转|向右转
1.欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态,约为80 – 90 %致密度。
2. 冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质,例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。
3. 注意冷冻保护剂之品质,冻存液:10%DMSO+90%FBS,我做细胞试验从不加双抗,NAHCO3-未加
4. 冷冻保存的细胞浓度:
冻存方法
1.冷冻前一日前更换半量或全量培养基,观察细胞生长情形。
2.收集培养之细胞,取少量细胞悬浮液(约0.1 ml) 计数细胞浓度及冻前存活率。 离心速度不要大于1000rpm/min或800g/min。
3.离心弃上清,加入适量冷冻保存溶液,使细胞浓度为1-5 x 106 cells/ml,混匀,分装于无菌冻存管中,1 ml/vial,悬浮细胞可以浓一些。
4.冷冻保存方法1: 冷冻管置于4 oC 10 分钟→ -20 oC 30 分钟→ -80 oC 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 长期储存。 或4 oC 1h→ -20 oC 1h→ -80 oC 1h(或隔夜) → 液氮槽vapor phase
最常见的我的k562细胞就是这样做的。
阳离子脂质体法 :稳定转染,瞬时转染,所有细胞使用方法简单,可携带大片段DNA,通用于各种类型的裸露DNA或RNA,能转染各种类型的细胞,没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率,但在体内,能被血清清除,并在肺组织内累积,诱发强烈的抗炎反应,导致高水平的毒性,这在很大程度上限制了其应用。
阳离子聚合物 :稳定转染,瞬时转染,所有细胞。除了具有阳离子脂质体的转染效率高,操作简单,适用范围广,重复性好等特点外,还具有在体内,转染效率高,细胞毒性低等特点,是新一代的转染试剂。
但在干冰或-70℃冰箱中保存的细胞,活力下降很快,当然细胞与细胞之间敏感性不同。有实验验证保存在-70℃冰箱中的细胞6个月后活力损失超过50%。ATCC证明在干冰中人类细胞4个月活力损失殆尽,小鼠的细胞可到6个月。
最近与战友们探讨原液冻存的问题,各家做的五花八门,做法各不相同。
有的-20度冻存的(有的项目有问题,有的没问题)、有-35度冻存的,有-60度冻存的,有-80度冻存的。
冻存的因素:冻存温度,这个文献等于没说(依据是啥,@fjj8802战友说低于玻璃化转变温度,是否还有别的考虑)、冷冻速率(快,快到什么程度),冻时间(完全冻上,这个貌似需要估计吧,尤其是大量的,如何靠小模型能看出来)、融化温度、融化速率(搅拌)、规模(这个还真不好靠模型来评估)。评估如何来评估冻存的质量好坏,有人说冻融循环,这个小模型适合看蛋白是否对冻融敏感,但是不能很快知道这个蛋白长期冻存的稳定问题。
开本帖探讨原液冻存的注意事项及依据,战友们也可以谈谈自己家目前的做法。
链接:
//d.dxy.cn/detail/12769151
回复:【求助】蛋白制剂处方筛选及稳定性研究参考书,求电子的-蚂蚁淘论坛
CurrentPerspectivesonStABIlityofProteinDrugProductsduringFormulation,FillandFinishOperations.pdf(235.33k)

