TEC蛋白酪氨酸激酶 (TEC 4p12p11 * 600583) 上海医疗保险网
| 实验方法原理 | 快速复苏细胞，缓慢稀释，以高细胞密度重新接种（图20.9）。
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|---|---|
| 实验步骤 | 材料 无菌 培养瓶（如果需要离心时） 生长培养基 吸量管，1ml，10ml 注射器和19号针头（如果你使用玻璃冻存管） 非灭菌 保护性手套和面罩 37℃无菌水，10cm深，盛于清洁、用乙醇擦拭过的带盖的水桶中 镊子 70%乙醇 棉签 1%萘黑（酰胺黑）或0.4%台盼蓝 操作步骤 1.检查冻存目录，确定将要复苏的冻存管的位置 2.收集所有材料，准备培养基，标记培养瓶 3.从冻存罐中取出冻存管，检查标签，确定是否是所需要的冻存管，若小管未浸没在液氮中，将小管放入塑料除菌水桶内37℃的烧杯中。尽可能避免水没过官帽，因为会增加污染的机会。 安全提示 将冻存管从液氮中取出时，必须穿实验衣，戴手套。若冻存管浸没在液氮中，则必须待面罩或护目镜，也必须穿实验衣戴手套。储存在液氮中的冻存管，包括塑料小管都可能吸入液氮，复苏时将可能发生剧烈爆炸。该种情况下，必须使用带盖的塑料水桶进行复苏，以控制爆炸。 4.当冻存管复苏时，再次检查标签以确定为所需的细胞；随后用70%乙醇彻底擦洗冻存管，然后在超净工作台内打开冻存管， 5.用1ml吸管将冻存管内含物转移至培养瓶中。 6.将培养基缓慢的加至细胞悬液中:以每2min10ml的速率进行滴加。开始时逐滴加入，然后可加快，逐渐稀释细胞和细胞保护剂。 对于需要通过离心去除细胞保护剂的细胞： （a）按照步骤6，在离心管或常规容器内缓慢稀释细胞。 （b）100g离心2min。 （c）弃去含有细胞保护剂的上清培养液。 （d）以新鲜培养基重新悬浮细胞。 （e）接种入培养瓶。 7.冻存管内残留物可用萘黑或台盼蓝染色，以测定细胞的存活率（见方案22.3.1）。 8.24h后检查： （a）对于贴壁单层细胞，依据预测密度（个细胞/cm2)的细胞照片，确认细胞是否贴壁，估计细胞存活率（见13.6.1节，16.4.5节；彩图4）。 （b）对于悬浮生长的细胞，检查外观（清晰的细胞质，缺乏细胞颗粒），稀释至常规的接种浓度。若进行细胞技术，并估计细胞存活率（见22.3.1节）后，接种浓度可能更精确，这种情况下，可以将细胞稀释至常规存活细胞接种浓度。 |
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发布于 ： 2021-09-10
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