| Storage: | Powder:4oC1year.DMSO:4oC3month;-20oC1year. |
| Purity: | ≥98% |
| CAS#: | 1227158-85-1 |
| MolecularWeight: | 525.53 |
| Formula: | C26H26F3N7O22 |
| Solubility: | DMSOupto1mM;EtOHupto15mM(heating) |
| ChemicalName: | 5-(1-((2-(4-cyclopropylpiperazin-1-yl)pyridin-4-yl)methyl)-5-methyl-1H-pyrazol-3-yl)-3-(4-(trifluoromethoxy)phenyl)-1,2,4-oxADIazole |
BIOLOGicalActivity:
BAY87-2243isahighlypotentandselectivehypoxia-inducIBLefactor-1(HIF-1)inhibitor.ItinhibitsHIF-1reportergeneactivityandtargetgeneCA9expressionwithIC50of0.7nMand2nM,respectively.InhypoxiclungcancerH460cells,BAY87-2243suppressesHIFtargetgeneexpression,andinhibitsHIF-1αproteinaccumulation.Underglucosedepletion,BAY87-2243inhibitscellproliferationviainterferencewithmitochondrialfunction.BAY87-2243hadnoeffectonHIFtargetgeneexpressionlevelsinRCC4cellslackingVonHippel-Lindau(VHL)activitynordidthecompoundaffecttheactivityofHIFprolylhydroxylase-2.AntitumoractivityofBAY87-2243,suppressionofHIF-1αproteinlevels,andreductionofHIF-1targetgeneexpressioninvivoweredemonstratedinaH460xenograftmodel.BAY87-2243iscurrentlyinphaseIclinicaltrials.
HowtoUse:
Invitro:BAY87-2243wasusedat0.1-10µMfinalconcentrationinvariousinvitroassays.
Invivo:BAY87-2243wasdosedtoMicebearinglungcarcinomaH460xenograftsviaoralgavageat4mg/kgonceperday.Formulationis1%(v/v)solutionofethanol/solutol/water(10/40/50%).
Reference:
- 1.EllinghausP,etal.BAY87-2243,ahighlypotentandselectiveinhibitorofhypoxia-inducedgeneactivationhasantitumoractivitiesbyinhibitionofmitochondrialcomplexI.(2013)CancerMed.2(5):611-24.
BAY87-2243_spec.pdf
BAY87-2243_MSDS.pdfebiomall.com
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我用conA和LPS分别刺激脾细胞,当然细胞均有明显的增殖,可是如果把这两种有丝分裂原同时用来刺激细胞时,细胞的增殖明显受到了抑制,比起单独采用ConA或者LPS都低很多。conA和LPS分别刺激T细胞和B细胞的增殖,两者同时加入时,作用应该更强,为什么反而大幅减弱呢?
此外,我研究的这种成分单独刺激皮细胞时,细胞也有一定程度的增殖,但是如果这种物质与conA联合使用时,比起单独用conA时,细胞的增殖程度明显降低了一些,这又是什么原因呢?难道可以解释为我研究的这种物质有类似于LPS的作用——刺激B细胞增殖?
如果真的是这样来解释,哪位大侠能把第一个现象(conA和LPS共同作用产生拮抗)的机理帮我解释一下呢?
当抗体结合到示踪剂上时,340nm的激发光激发铕标分子,导致能量转移到Alexa Fluor 647染料上,结果产生665nm的发射光。荧光的强度与样品中的cAMP含量成反比。
本试剂盒用于检测在GPCR激动剂刺激下活细胞或者细胞膜制备品产生的cAMP。对于偶联Gαs的受体,激动剂刺激导致665nm的荧光强度降低,而拮抗剂则可以逆转这一效应;对于偶联Gαi的受体,在激动剂刺激的同时用forskolin刺激cAMP产生,那么激动剂则抑制forskolin诱导的cAMP的生成,因此对照只给forskolin的细胞组可以通过665nm荧光强度的增加反应激动剂的效应。
该试剂盒的灵敏度很高,室温下反应在20h内是稳定的。本试剂盒适用于在384孔板中进行24μl的微量分析。
2.保存条件
避光2~4℃保存,过期时间见装。
3.盒内试剂
cAMP标准品:1管,1ml。(50μM)
生物素标记的cAMP(b-cAMP):1管,25μl。
铕标的抗生物素蛋白链菌素:1管,25μl。
荧光标记的cAMP抗体:1管,40μl。
检测缓冲液:1瓶,25ml。
4.需要自配的其他溶液
l Hank’s balanced salt solution (HBSS): NaCl 8.0g、CaCl2 0.14g、KCl 0.4g、 KH2PO4 0.06g、Na2HPO4?7H2O0.09g、MgCl2.6H2O0.10 g、MgSO4.7H2O0.10 g、NaHCO30.35g、葡萄糖1.0g,加H2O至 1000ml (用7.5%NaHCO调节PH值=7.4)
l Versene消化液(1L):EDTA 0.372 g,NaCl 8.0g,KCl 0.20 g,KH2PO40.20g,Na2HPO4 1.15 g,D-glucouse 0.2 g,pH 7.4
l HEPES缓冲液(1mol/L):取2.383gHEPES溶于10ml去离子水中。
l 7.5%BSA溶液:取0.75gBSA溶于10ml去离子水中
l 0.5M IBMX溶液:11.11mg IBMX溶于100μl DMSO中,-20℃冻存。
l 刺激缓冲液(SB):14 ml HBSS(1×)+75μlHEPES(1mol/L)+200μlBSA (7.5%)。(注:在测定细胞cAMP时,反应缓冲液中要加入IBMX 0.5mmol/L)
l 吗啡贮存液(10mM):盐酸吗啡37.585mg溶于10ml生理盐水中,0.22μm滤膜过滤除菌,4℃保存备用。
l 纳络酮母液(100mM):纳络酮4mg溶于100μl 生理盐水中,用时工作液按照1:500稀释,溶剂为含有IBMX的反应缓冲液。
抑制剂刺激细胞后,需要用PBS清洗后再做后续实验吗
我做的是细胞因子的刺激和抑制某条通路后观察是否有影响,分组为空白组,空白+抑制剂,刺激组,刺激+抑制剂,最开始用的单因素方差分析,LSD-T和SNK-Q检验,但是同学说我这里面有两个处理因素,所以不能单因素方差分析,应该直接空白和空白+抑制,空白和刺激,刺激和刺激+抑制剂进行独立样本T检验,现在脑子是混乱的,拜托园子里的大神们帮我看看,感激不尽!!

