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| 선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
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제품특징
□ 내용 (RR086A,100 회)
| 2×One StepTB Green®RT-PCR Buffer 4*1 | 840㎕×3 |
| PrimeScript 1step Enzyme Mix 2*2 | 200㎕ |
| RNase Free dH2O | 1.25 ㎖×2 |
| ROX Reference Dye (50×conc)*3 | 100 ㎕ |
| ROX Reference Dye II (50×conc)*3 | 100 ㎕ |
*1 dNTP Mixture, Mg2+ 및 TB Green™ 포함*2 PrimeScript RTase, RNase Inhibitor, TaKaRa Ex Taq HS 포함*3 Applied Biosystems 사 Real Time PCR 장치 등, well간의 signal 보정이 필요한 기기로 해석하는 경우에 사용한다. ABI PRISM 7000/7700/7900 HT나 7300 Real-Time PCRSystem에는 Rox Reference Dye를, 7500 Real-Time PCR System에는 ROX ReferenceDye II를 이용한다.Thermal Cycler Dice Real Time System (TaKaRa Code TP800)이나 Smart CyclerSystem, LightCycler 에서는 필요없다.
□ 보존 -20℃
2×One StepTB Green®RT-PCR Buffer 4는 차광후 -20℃에서 보존
□ 제품설명
본 제품은TB Green®을 포함한 Real Time One Step RT-PCR 전용의 키트이다. RT-PCR을 하나의 튜브 내에서 연속적으로 실시할 수 있기 때문에 조작이간편하고 오염의 걱정이 없다. 또, 증폭 산물을 실시간으로 검출할 수 있어 PCR후에 전기영동 등으로 확인할 필요가 없다. RNA 바이러스 등 미량 RNA의 검출에 최적이다.반응에는 신장성이 뛰어나고 단시간의 반응으로 효율적인 cDNA 합성이 가능한PrimeScript RTase와 PCR 효소로서 정평이 있는 TaKaRa Ex Taq HS를 이용하여, 1 Step RT-PCR 에 최적화되어 있다.종래의 제품보다 반응 특이성, 증폭 효율이 향상되어 있어, 안정된 Real Time1 Step RT-PCR을 실시할 수 있다.
□ 적용 기종
Thermal Cycler Dice Real Time System (TaKaRa Code TP800)Smart Cycler System/Smart Cycler II System (Cepheid사)ABI PRISM 7000, 7700, 7900 HT 및, 7300, 7500 Real-Time PCR System(Applied Biosystems사)LightCycler (Roche Diagnostics사) 등
□ 사용상의 주의
본 키트에 의한 역전사 반응에는 PCR용의 Specific 프라이머 (Reverse)를 이용해야 합니다. Random 프라이머나 Oligo dT 프라이머는 사용할 수 없습니다.
□ 특징
1 Step RT-PCR에 의해 RNA 바이러스 등 미량의 RNA 해석을 신속하고 정확하게 실시하는 것이 가능하다.PCR에는 Hot Start용 효소 TaKaRa Ex Taq HS를 이용하고 있다. 버퍼는 RealTime PCR용으로 최적화 되어있기 때문에, 증폭 효율이 좋고, 고감도로 검출을할 수 있다. 또한 버퍼는TB Green®을 미리 포함한 2×농도의 pre-mixture이므로 반응액의 조제가 간단하다.
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想用二步酶消法来分离毛乳头细胞，一个毛囊大概有多少个毛乳头细胞？处于生长期的毛囊在显微镜下有什么特点？先谢谢大神们指点
经过无数次的大鼠肝脏插针灌注，忍受过实验结果不理想的打击和折磨，今天终于成功了，特分享些相关图片以鼓励还在奋战中的网友们。
最近在做黄体化颗粒细胞分离培养，但是注射器吸取大卵泡液或者从下颗粒细胞离心时就会凝固成果冻状，大家有碰到过这样的事情么？已经好几次了，一直是这样，大家给支个招吧
我的步骤：
1、16－22天小鼠颈椎脱臼法处死后，75%酒精浸泡30秒消毒，睾丸取出后置预冷PBS，40分钟（路上所需时间）后开始处理。
2、剔除白膜，剪碎睾丸。0.25%胰酶（含edta）1.5ml/个睾丸37°C消化30-50分钟，等体积DMEM/F12含10%FBS终止消化，1000r/MIN离心5分钟，弃上液。
3、加0.1%胶原酶消化30分钟，过200目网筛，1000r/MIN离心5分钟，弃上液。
4、DMEM/F12含10%FBS5ml重悬后转如培养瓶，入孵育箱37°C5%CO2培养。
请教各位，我到底是哪里有问题，是胰酶消化的时间长了吗？
近期根据经验总结了原代肿瘤细胞分离培养的2个关键因素。
1、组织的活性：如果我们取的都是坏死的组织或者结缔组织，我相信任何方法都不可能分离出来活的细胞的。另外，取完的组织要冷藏存放，并且越早分离越好，最好在24h内，最久不要超过48h。
2、组织的消化：在组织消化前，组织剪的越碎越好（1mm3左右为宜），组织的大小决定了组织的消化时间，不同组织消化时间差别较大：例如肺癌在2h-2.5h；食管癌在1个多小时。
希望可以帮到各位研友，另外如果大家有更好的经验可以一起来讨论！
前辈们好，近期老板布置任务需要分离小鼠肝脏细胞，查了好多文献，都没有写胶原酶的cat#,只写sigma订购，想请教下，是否有人做过，可以提供下货号和使用方法吗？十分感谢。另外，文中还提到digitonin，如果有一起用到的话麻烦帮我查看下，谢谢。
我做的临床试验，就想简单检测PBMC细胞的凋亡，上流式检测，有啥检测效果好的步骤推荐一下，谢谢
大概步骤如下：c57小鼠大概六七只，酒精浸泡后不处死取出，迅速打开胸腔取出心脏放入冰PBS冲洗。待心脏取出完毕，冲洗移入有PBS青霉素小瓶中用眼科剪剪成较小组织块。
之后加入0.1％胰酶消化（之前浓度为0.25％，活细胞数量更少。）吹打1min.放入孵箱中3min.弃去上清，加入∥型胶原酶（0.1％）吹打10Min，放入孵箱15Min。取出后加入1ml胰酶。吹打1Min后加入含血清F12培养液终止消化，800转离心5Min。之后取沉淀重悬种板。90Min差速贴壁法纯化心肌细胞。
48h后只有少量（个位数）细胞贴壁，呈三角形。
第一次用0.25％胰酶时离心后有大量鼻涕样物质。
第二次胰酶浓度减小后没有，但细胞沉淀少，且为半透明微白。是不是离心时间不够。
感觉细胞整体状态都不好，几次都没有大量心肌细胞，更不用说观察到心肌细胞搏动。
老师们能不能帮忙分析一下是哪里的原因呢。
有没有比较稳定的小鼠乳鼠心肌细胞分离步骤呢。
希望大神快点出现。
请大神前辈指点指点，已经研三了，实验很不顺利，再这样都要延期的节奏了。请问最近急性分离出来的大鼠心肌细胞很不耐钙，做膜片钳封接不上可能是什么原因造成的？谢谢了！
