分享:原代肿瘤细胞分离培养关键因素
2017-03-29
问题描述:
近期根据经验总结了原代肿瘤细胞分离培养的2个关键因素。
1、组织的活性:如果我们取的都是坏死的组织或者结缔组织,我相信任何方法都不可能分离出来活的细胞的。另外,取完的组织要冷藏存放,并且越早分离越好,最好在24h内,最久不要超过48h。
2、组织的消化:在组织消化前,组织剪的越碎越好(1mm3左右为宜),组织的大小决定了组织的消化时间,不同组织消化时间差别较大:例如肺癌在2h-2.5h;食管癌在1个多小时。
希望可以帮到各位研友,另外如果大家有更好的经验可以一起来讨论!
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飞凡细胞
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你用什么消化组织的?胰酶吗?
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goodyezi
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飞凡细胞你用什么消化组织的?胰酶吗?消化组织用胶原酶和分散酶。后期消化细胞会用到胰酶
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longshao2014
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你使用的是哪个品牌的分离培养试剂盒
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飞凡细胞
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这三种酶怎么用?可以分享吗?我一直用的胰酶消化的组织结果不怎么好
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goodyezi
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飞凡细胞这三种酶怎么用?可以分享吗?我一直用的胰酶消化的组织结果不怎么好单纯胰酶肯定是不行的,至少得有胶原酶。
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xiaocaiv
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楼主,你取完的组织冷藏保存是怎么保存,我都直接丢液氮速冻
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飞凡细胞
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楼主方便告诉酶的用量和比例吗?不方便的话可不可以寄点你配好的酶液给我用用啊
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goodyezi
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xiaocaiv楼主,你取完的组织冷藏保存是怎么保存,我都直接丢液氮速冻放到样本保存液中的。我们也冻存过,但是放在特定的冻存液中才放液氮的。您那边直接丢液氮还能提取出来细胞吗?
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木子华
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xiaocaiv楼主,你取完的组织冷藏保存是怎么保存,我都直接丢液氮速冻我也想知道你怎么保存的,用FBS+培养基么?组织还能提出细胞么?
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xiaocaiv
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goodyezi放到样本保存液中的。我们也冻存过,但是放在特定的冻存液中才放液氮的。您那边直接丢液氮还能提取出来细胞吗?直接放液氮主要是以后提DNA或者RNA,再不然就做切片,提取细胞试过但是没成功······楼主你冻存后有成功提取过吗?提取之后的细胞能正常扩增吗?
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goodyezi
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xiaocaiv直接放液氮主要是以后提DNA或者RNA,再不然就做切片,提取细胞试过但是没成功······楼主你冻存后有成功提取过吗?提取之后的细胞能正常扩增吗?可以提取细胞啊。也能传代。但是比新鲜组织提取的效果差一些
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xiaocaiv
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goodyezi可以提取细胞啊。也能传代。但是比新鲜组织提取的效果差一些真的吗?可以分享一下冻存方法吗?
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verajiao517
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先关注着,马上开始养肿瘤原代细胞了
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goodyezi
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xiaocaiv真的吗?可以分享一下冻存方法吗?冻存组织要剪碎,使用组织专用冻存液,FBS:DMSO为9:1,同时添加保持组织活性的因子。室温放置30min,再放入冻存盒.负80度过夜,后可转入液氮。
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goodyezi
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verajiao517先关注着,马上开始养肿瘤原代细胞了有什么问题可以多多在这里讨论,有什么好的经验也请多多分享哦
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xiaocaiv
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goodyezi冻存组织要剪碎,使用组织专用冻存液,FBS:DMSO为9:1,同时添加保持组织活性的因子。室温放置30min,再放入冻存盒.负80度过夜,后可转入液氮。谢谢楼主的无私分享!!
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fenlichong
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培养的话用贴壁法也可以,消化不是必须的,而且消化后分离的单个细胞贴壁率可能不高。组织活性虽然很关键,但和组织的恶性程度,侵袭性等估计也有关系,有的组织离体超过48h也有可能爬出细胞,而且用普通培养基也可以培养,但毕竟是少数。另外,培养基也很关键,好的培养基适用于培养大部分肿瘤细胞类型,但如何连续传代和细胞的纯化是个问题,请教楼主培养原代肿瘤细胞用的什么培养基,可否推荐下参考文献?如何保持连续传代培养?
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木子华
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展开引用fenlichong培养的话用贴壁法也可以,消化不是必须的,而且消化后分离的单个细胞贴壁率可能不高。组织活性虽然很关键,但和组织的恶性程度,侵袭性等估计也有关系,有的组织离体超过48h也有可能爬出细胞,而且用普通培养基也可以培养,但毕竟是少数。另外,培养基也很关键,好的培养基适用于培养大部分肿瘤细胞类型,但如何连续传代和细胞的纯化是个问题,请教楼主培养原代肿瘤细胞用的什么培养基,可否推荐下参考文献?如何保持连续传代培养?......养间充质干细胞到是用过贴壁法,原代一般还是采取的消化培养,贴壁法营养要求高,而且相比较而言容易污染一点
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lixingde
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胶原酶有很多分型,不同分型对消化影响大吗?做了几次口腔癌原代培养,用的1型胶原酶,结果养出来的细胞大部分是成纤维细胞,肿瘤细胞贴壁很少,大家遇到过这种情况吗?
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goodyezi
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展开引用fenlichong培养的话用贴壁法也可以,消化不是必须的,而且消化后分离的单个细胞贴壁率可能不高。组织活性虽然很关键,但和组织的恶性程度,侵袭性等估计也有关系,有的组织离体超过48h也有可能爬出细胞,而且用普通培养基也可以培养,但毕竟是少数。另外,培养基也很关键,好的培养基适用于培养大部分肿瘤细胞类型,但如何连续传代和细胞的纯化是个问题,请教楼主培养原代肿瘤细胞用的什么培养基,可否推荐下参考文献?如何保持连续传代培养?......组织块法我也做过,比较的话,我还是选择了消化法,我使用的方法贴壁率还是挺好的,细胞活性也很好的。IMMORTECH的培养基。我不会发附件,您看下图片。关注CR技术!
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dxy_h2lc4whq
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lixingde胶原酶有很多分型,不同分型对消化影响大吗?做了几次口腔癌原代培养,用的1型胶原酶,结果养出来的细胞大部分是成纤维细胞,肿瘤细胞贴壁很少,大家遇到过这种情况吗?怎么判断是成纤维细胞还是自己需要的癌细胞?
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goodyezi
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dxy_h2lc4whq怎么判断是成纤维细胞还是自己需要的癌细胞?这两种细胞的形态是完全不同的。一种是拉长一点的纤维状,另一种是上皮样的,铺路石状
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13996216469W
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楼主,我最近也在提原代肝癌细胞,我用的组织块法,可是我的半个月了都没有爬出来,反而组织块周围有很多点点样的东西,不是细胞,请问楼主用过组织块法提过么?
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goodyezi
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lixingde胶原酶有很多分型,不同分型对消化影响大吗?做了几次口腔癌原代培养,用的1型胶原酶,结果养出来的细胞大部分是成纤维细胞,肿瘤细胞贴壁很少,大家遇到过这种情况吗?一般用胶原酶四
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zzuzks
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楼主你好,最近需要养食管癌的原代细胞,能否留个联系方式,以便沟通
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goodyezi
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zzuzks楼主你好,最近需要养食管癌的原代细胞,能否留个联系方式,以便沟通已经私信你。
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小医生韩小徽
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展开引用goodyezi近期根据经验总结了原代肿瘤细胞分离培养的2个关键因素。1、组织的活性:如果我们取的都是坏死的组织或者结缔组织,我相信任何方法都不可能分离出来活的细胞的。另外,取完的组织要冷藏存放,并且越早分离越好,最好在24h内,最久不要超过48h。2、组织的消化:在组织消化前,组织剪的越碎越好(1mm3左右为宜),组织的大小决定了组织的消化时间,不同组织消化时间差别较大:例如肺癌在2h-2.5h;食管癌在1个多小时。希望可以帮到各位研友,另外如果大家有更好的经验可以一起......楼主,我近期要从手术室拿胃癌标本做原代细胞分离,想使用消化法。手术室距离实验室10分钟路程,希望咨询转运标本和分离所需试剂,和步骤情况。能不能留一个联系方式啊,**
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windzas
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楼主,我近期要做胃癌原代细胞分离和培养,能留个联系方式,想咨询下操作步骤和需要的试剂,谢谢。
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windzas
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展开引用小医生韩小徽楼主,我近期要从手术室拿胃癌标本做原代细胞分离,想使用消化法。手术室距离实验室10分钟路程,希望咨询转运标本和分离所需试剂,和步骤情况。能不能留一个联系方式啊,**......请问,你的胃癌原代细胞培养成功了吗?
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UchihaItachi520
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楼主大大,最近在养原代肺癌和乳腺癌细胞,可否加你一个联系方式请教下呢,谢谢
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