Product Information
Strain CVB101, an chemical competent E. coli B strain (hsdR, lon11, sulA1), contains pBirAcm , an IPTG inducible plasmid containing the BirA gene engineered into pACYC184. It is compatible with most cloning vectors and is maintained with chloramphenicol (10 μg/ml). This strain is recommended for protein expression because of its robust growth and the absence of the OmpT and Lon proteases.
At the time of induction, Biotin should be added at a concentration of 50 μM. The pAN and pAC vectors containing the AviTag™ require Ampicillin (100 μg/ml).
Cells are supplied as 10 vials of 100μl liquid culture in 30% glycerol. Store at -80oC
Avidity是一家开创抗体寡核苷酸结合(AOC)的公司。™)AOCs结合了单克隆抗体的组织选择性和基于寡核苷酸的治疗方法的精确性,以克服寡核苷酸传递的障碍和疾病的目标遗传驱动因素。它们的AOC平台,演示了疾病相关RNA在细胞类型和组织中的调节,包括肌肉、心脏、肝脏、肿瘤和免疫细胞。专有的平台技术可以在单一抗体支架上传递多种治疗性寡核苷酸。AOCs具有类似于抗体的药物性质,并允许将寡核苷酸有效载荷传递到其他运载平台所不提供的非肝组织。AOC也有其独特之处,因为可以处理不可药物的目标。 它们正在推进一系列的治疗计划,重点是罕见的肌肉疾病和其他严重疾病。主要项目是开发治疗杜氏肌营养不良和肌营养不良患者的治疗方法。还与制药合作伙伴合作开展项目。并得到了经验丰富的团队和受人尊敬的生命科学投资者的支持。
带有AviTag标签的人类全长ORF克隆已经被构建在多种T7和CMV启动子表达系统,可以立即购买使用。AviTag标签蛋白可以被体内或体外的生物素连接酶生物素化,而且抗生物素蛋白或链霉亲和素可以专一地与生物素结合,正基于这两个反应,AviTag™技术可以应用于蛋白的固定,纯化和显影。虽然Avidity是一个小公司,科学带来的好处及其AviTag已得到认可。目前,AviTag技术已经在22个国家的世界十 大制药公司和研究人员中得到认可。
Avidity带有AviTag标签的人类全长ORF克隆已经被构建在多种T7和CMV启动子表达系统,可以立即购买使用。AviTag标签蛋白可以被体内或体外的生物素连接酶生物素化,而且抗生物素蛋白或链霉亲和素可以专一地与生物素结合,正基于这两个反应,AviTag技术可以应用于蛋白的固定,纯化和显影。 Avitag™技术 亲合力开发和销售用于连接分子的分子亲和力工具。我们的zhuan利AviTag™技术采用来自大肠杆菌的生物素连接酶(BirA),在独特的15氨基酸肽标签上使用单一生物素的高度靶向酶促缀合。AviTag™序列是GLNDIFEAQKIEWHE。以链霉抗生物素蛋白包被的表面为导向,这为分子结合相互作用创造了理想的表现形式。 avidity的AviTag技术的科学优势引起了人们的注意。目前,AviTag技术已被全球十大制药公司中的七家授权,并被22个国家的研究人员使用。 Avidity公司历史 avidity LLC由Millard Cull,Larry Lansing,Ron Gill博士和Mark Seville博士于1996年创立,根据生物素对抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白的非凡亲和力开发肽标签和分子生物学产品。在Affymax担任研究员期间,Millard参与了AviTag技术的发现,发现了其商业潜力,并获得了Affymax的*权利。他创建了avidity作为试剂公司,将AviTag技术的使用权转让给其他公司,并销售与该技术一起使用的产品。 AviTag历史 AviTag是一种获得zhuan利的生物素标记技术,由Affymax博士在Peter Schatz博士的“定向进化”方法中发现,称为“质粒上的肽”。定向进化方法鉴定了许多可被大肠杆菌的BirA酶生物素化的肽序列,这些序列中蕞 好的被称为AviTag。大肠杆菌酶BirA将15个氨基酸的AviTag生物素化为其天然底物生物素羧基载体蛋白(BCCP)的两倍。 使用AviTag技术的蛋白质的酶促生物素化优于蛋白质的化学生物素化,因为BirA酶温和且高度特异性地标记AviTag的赖氨酸残基。在AviTag之前,最小的生物素接受结构域由75个氨基酸组成。
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各位师兄师姐:
我近期负责的课题,需要进行人类血液淋巴细胞和DC细胞的分离和培养,但我在方面懂的不多,想求助这方面的大神们。后续我需要做RT-qPCR,western-blot、免疫荧光等实验,我应该去多少ml全血比较好?全血怎么保存?怎么进行分离?后续怎么培养和保存?
谢谢!
我的步骤:
1、16-22天小鼠颈椎脱臼法处死后,75%酒精浸泡30秒消毒,睾丸取出后置预冷PBS,40分钟(路上所需时间)后开始处理。
2、剔除白膜,剪碎睾丸。0.25%胰酶(含edta)1.5ml/个睾丸37°C消化30-50分钟,等体积DMEM/F12含10%FBS终止消化,1000r/MIN离心5分钟,弃上液。
3、加0.1%胶原酶消化30分钟,过200目网筛,1000r/MIN离心5分钟,弃上液。
4、DMEM/F12含10%FBS5ml重悬后转如培养瓶,入孵育箱37°C5%CO2培养。
请教各位,我到底是哪里有问题,是胰酶消化的时间长了吗?
请大神前辈指点指点,已经研三了,实验很不顺利,再这样都要延期的节奏了。请问最近急性分离出来的大鼠心肌细胞很不耐钙,做膜片钳封接不上可能是什么原因造成的?谢谢了!
前辈们好,近期老板布置任务需要分离小鼠肝脏细胞,查了好多文献,都没有写胶原酶的cat#,只写sigma订购,想请教下,是否有人做过,可以提供下货号和使用方法吗?十分感谢。另外,文中还提到digitonin,如果有一起用到的话麻烦帮我查看下,谢谢。
大概步骤如下:c57小鼠大概六七只,酒精浸泡后不处死取出,迅速打开胸腔取出心脏放入冰PBS冲洗。待心脏取出完毕,冲洗移入有PBS青霉素小瓶中用眼科剪剪成较小组织块。
之后加入0.1%胰酶消化(之前浓度为0.25%,活细胞数量更少。)吹打1min.放入孵箱中3min.弃去上清,加入∥型胶原酶(0.1%)吹打10Min,放入孵箱15Min。取出后加入1ml胰酶。吹打1Min后加入含血清F12培养液终止消化,800转离心5Min。之后取沉淀重悬种板。90Min差速贴壁法纯化心肌细胞。
48h后只有少量(个位数)细胞贴壁,呈三角形。
第一次用0.25%胰酶时离心后有大量鼻涕样物质。
第二次胰酶浓度减小后没有,但细胞沉淀少,且为半透明微白。是不是离心时间不够。
感觉细胞整体状态都不好,几次都没有大量心肌细胞,更不用说观察到心肌细胞搏动。
老师们能不能帮忙分析一下是哪里的原因呢。
有没有比较稳定的小鼠乳鼠心肌细胞分离步骤呢。
希望大神快点出现。
想用二步酶消法来分离毛乳头细胞,一个毛囊大概有多少个毛乳头细胞?处于生长期的毛囊在显微镜下有什么特点?先谢谢大神们指点
经过无数次的大鼠肝脏插针灌注,忍受过实验结果不理想的打击和折磨,今天终于成功了,特分享些相关图片以鼓励还在奋战中的网友们。
近期根据经验总结了原代肿瘤细胞分离培养的2个关键因素。
1、组织的活性:如果我们取的都是坏死的组织或者结缔组织,我相信任何方法都不可能分离出来活的细胞的。另外,取完的组织要冷藏存放,并且越早分离越好,最好在24h内,最久不要超过48h。
2、组织的消化:在组织消化前,组织剪的越碎越好(1mm3左右为宜),组织的大小决定了组织的消化时间,不同组织消化时间差别较大:例如肺癌在2h-2.5h;食管癌在1个多小时。
希望可以帮到各位研友,另外如果大家有更好的经验可以一起来讨论!
最近在做黄体化颗粒细胞分离培养,但是注射器吸取大卵泡液或者从下颗粒细胞离心时就会凝固成果冻状,大家有碰到过这样的事情么?已经好几次了,一直是这样,大家给支个招吧