人类血液细胞分离与培养
2016-05-27
问题描述：
各位师兄师姐：
我近期负责的课题，需要进行人类血液淋巴细胞和DC细胞的分离和培养，但我在方面懂的不多，想求助这方面的大神们。后续我需要做RT-qPCR，western-blot、免疫荧光等实验，我应该去多少ml全血比较好？全血怎么保存？怎么进行分离？后续怎么培养和保存？
谢谢！
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mary055
用户
全血，一般我们Ficoll分出PBMC（外周血单个核细胞），1ml血理论上可以分出10^6个PBMC，单核细胞（CD14+）一般占全血的10%左右，一般放在48孔板里面养，FBS预铺板，然后种磁珠分出来的CD14细胞，加入诱导因子，最后LPS刺激。如果提RNA，买微量RNA提取试剂盒，10^5个数量级就够了。WB没做过，不懂。全血不好保存，一般我们都是24小时用掉。PBMC一般也不冻存，凋亡率太高了。普通测测流式提提RNA，养DC随便5ml或者10ml血就够了，WB不懂。淋巴细胞你说的太宽泛了，不造到底啥
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baichimao
用户我是想分离B淋巴细胞并进行培养，但我后续需要这细胞进行的实验有点多，我看文献上有人会转染病毒使它可以无限扩增····你能告诉我一下B淋巴细胞的培养方法吗？谢谢！
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melody敏
用户你好，有人血单个核细胞的具体方法么？
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