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Signagen/AAV-hSyn-DIO-GFP (AAV Serotype 8)/SL101121/>30 µL (Std Pack)
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Signagen/AAV-hSyn-DIO-GFP (AAV Serotype 8)/SL101121/>30 µL (Std Pack)
品牌 / 
Signagen
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SL101121->30µL
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Product Category: Pre-made recombinant AAV; AAV-hSynapsin-DIO-GFP; AAV-Synapsin-DIO-GFP; AAV8-hSyn-DIO-GFP; AAV8-Syn-DIO-GFP

Description:
AAV8-hSyn-DIO-GFP
is a pre-made rAAV in serotype 8 which will Cre dependently over-express GFP driven under human synapsin promoter as illustrated as the cartoon below.

GFP is a green monomer which matures extremely bright, making it possible to see results very soon after activating transcription. It is highly photostable and resistant to photobleaching. In the DIO scenario, the transgene of interest is inserted in reverse orientation relative to the 5' promoter and is flanked by oppositely oriented loxP and lox2272 sites.  In the absence of Cre expression, the transgene will not be produced. In the presence of Cre expression, the transgene will be "Flip-exchanged" or FLEXed, leading to the expression of the transgene. This is due to a permanent Cre-mediated recombination/inversion of the flanked transgene. This arrangement is called DIO (double-floxed inverse ORF), Cre-ON, Flex-rev (reverse), Flex-ON/FlexON, or DIO-AAV/AAV-DIO (double-floxed inverse ORF in AAV). 

AAV-SYN-DIO-GFP


Titer: > 1x1013 VG/mL

Size: > 30 µL (Std Pack)

Storage Buffer: Sterile PBS

Infection Protocol:


Vector Map:
AAV-Synapsin-DIO-GFP; AAV8-Synapsin-DIO-GFP; AAV-eSyn-DIO-GFP; AAV8-Syn-DIO-GFP

 

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目标蛋白对细胞有毒性,导致细胞死亡;
转染试剂以及DNA用量信息需要优化,否则对细胞具有伤害;
细胞贴壁转染之后没有正常换液。
建议:考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统;摸索转染试剂以及DNA用量信息,如果转染试剂毒性太大,可以考虑尝试义翘转染试剂sinofection;对转染后的细胞进行换液处理,如果细胞状态感觉不够理想,可以考虑添加一些血清来帮助细胞恢复健康。
以上所有分析、建议的前提是,细胞培养、无菌操作等等都没有问题。祝顺利,加油~
个人经验,BHK、CHO是很常用的转染用细胞,而且跟抗体非特异性反应也不高。一般来说,大多数可传代细胞的转染效率都是可以的,还要考虑所用转染剂的类型。

不建议你用MDCK细胞,非常难转染。
细胞转染 123
忻忻相惜4582021-08-01
对于脂质体转染与电穿孔转染都无法成功转染的细胞系建议用病毒感染,此法可以快速100%感染,检测成功率高。向左转|向右转
细胞转染GFP质粒并进行表达之后,一般细胞内会有大量的GFP蛋白,可以发出绿色荧光。
GFP发出绿色荧光的原理是Ca离子进入GFP的beta-barrel结构中引起的特定能级,因此只要这个结构仍然保持着,就可以发出荧光。
由于GFP的beta-barrel结构非常稳定,一些版本的GFP蛋白(如EGFP)甚至能抵抗94C的高温几分钟而不完全变性,因此想在溶液状态下去掉GFP的荧光是很难的,一般需要用光漂白法。
基于其非常稳定的结构,即便细胞被固定了,仍然会有一部分的GFP蛋白保持其构象而发出荧光。此时荧光可能较弱。在荧光显微镜下是有可能看得到的。

求助:本人现在做细胞转染,具体实验包括转染目的基因后测MTT,凋亡,侵袭等水平差异,现在有个疑惑,如果MTT结果是促进增殖,那凋亡或侵袭结果的意义是否受其影响,比如同样数量细胞里这个组的凋亡少是否其侵袭能力就强,结果是凋亡少造成的还是有协同作用,如何避免干扰,还有转染后凋亡检测时间的选择,因为不是做的药物而是转染,应如何设置时间,78小时是否有意义?问的有点多,求大家耐心指导

悬浮细胞的转染方法:(以下内容转自生物帮资讯)
DXY721认为:
悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大,主要差别在于转染后的筛选,当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。
其实转染的过程很简单,问题是能不能转的进去的,转染率能有多少,转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。
我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染,说明书上都有具体的操作过程,将脂质体和目的基因按比例混合,然后加到细胞悬液里就OK了,说的简单,实际上还是有一些细节要注意的,比如脂质体和目的基因混合的比例,转染的细胞数,细胞的代数,细胞的状态,有的还要求在转染的前一天传代一次,不过不要怕,这些在脂质体说明书上都有明确的说明,按照说明书做就可以了。
jinghuanlv认为:
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。
脂质体转染的原理基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。
我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法,目前为止,悬浮细胞转染的最好方法还是电转,我们实验室用的电转仪是Bio-Rad的,使用条件是电压250V,电容975uF,效果不错,不妨一用。

本人为新手,希望大家能够直到一下细胞转染效率的问题。现在已知的信息如下:

质粒上面包含了萤光虫荧光素酶基因和海参荧光素酶基因,请问我通过什么方法可以测得转染效率?

如果不能测得转染效率,请问怎么优化转染条件呢?

HAC15细胞转染,目前用的lip3000、lip2000都用过,不知道是试剂剂量使用问题,还是购买试剂问题,荧光显微镜一个视野下好的有几个荧光,有得没荧光,没荧光,没荧光,求HAC15细胞转染用什么转染试剂转染效率高!!!

可以。常用脂质体转染法。

脂质体是磷脂分散在水中时形成的脂质双分子层,又称为人工生物膜。
阳离子脂质体表面带正电荷,能与核酸的磷酸根通过静电作用将DNA分子包裹入内,形成DNA一脂复合体,也能被表面带负电荷的细胞膜吸附,再通过膜的融合或细胞的内吞作用,偶尔也通过直接渗透作用,DNA传递进入细胞,形成包涵体或进入溶酶体 其中一小部分DNA能从包涵体内释放,并进入细胞质中,再进一步进入核内转录、表达。
传统的转染试剂有一定的细胞毒性,在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如,阳离子脂质体。带正电的脂质体与核酸带负电的 磷酸基团 形成复合物被细胞内吞。血清中含有大量的蛋白质,在转染过程中,带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附,影响转染效率。另外,使用脂质体等转染 试剂时,由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞,引发细胞毒性,导致转染效率降低,故不能有血清转染。这些转染试剂要求在转染前换无血清培养基,转染后 4-6h在更换成有血清培养基,这其实是为了减轻转染造成的细胞毒性。
可以传代。
转染分2种,一种是瞬时转染,即转染后让细胞表达目的蛋白后即提取蛋白,提一次蛋白,转染一次,这种方式一般不传代;
另一种转染为稳定转染,转染后加入一定选择压力进行筛选,没有转染的细胞不能存活,只留下转染的细胞,这种情况下可以筛选单个转染细胞,构建稳定表达某一特定蛋白或基因的细胞系。

最近在Raw264.7细胞上进行干扰和用质粒进行过表达实验,脂质体根本转不进去,后来又换了一个国产的转染试剂转染效率也很低,现在考虑用电转。
我们实验室有Lonza电转仪,有没有好一点的电转染试剂或者细胞转染试剂?