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Altogen/MDCK Transfection Reagent (Kidney Cells, CCL-34)/8.0 ml(Catalog #7061)
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Altogen/MDCK Transfection Reagent (Kidney Cells, CCL-34)/8.0 ml(Catalog #7061)
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TransfectionReagentforMDCKCells(KidneyCells,CCL-34)

  • Abiodegradablepolymerbasedtransfectionreagent–onceinsidethecell,thepolymerdegradesintosmallerlesstoxiccomponentsreducingcelltoxicity,facilitatingreleaseofthetransgene,andimprovingtransfectionefficiency
  • HightransfectionefficiencyofbothsiRNAandplasmidDNAwithoutcompromisingcellviability
  • AchieverobustsiRNAuptakefordependablegenesilencing
  • Effectivetransfectionunderconditionsofupto40%serum
  • TransfectionkitincludesTransfectionEnhancerreagent
  • DownloadMDCKtransfectionprotocol:[PDF]
  • Download MDCKCRISPR/Cas9transfectionprotocol:[PDF]
  • DownloadPowerPointpresentationforMDCKcellstransfectionkit:[PPT]
  • DevelopedandmanufacturedbyAltogenBiosystems

TransfectionEfficiency:

Reagentexhibitsatleast73%transfectionefficiencyofsiRNAdelivery.TransfectionefficiencywasdeterminedbyqRT-PCR.

TransfectionProtocolandMSDS:

DownloadAltogenBiosystemsMDCKTransfectionProtocol:[PDF]

DownloadMSDS:[PDF]

MDCKCellLine:

TheepithelialcelllineMADIn-DarbyCanineKidney(MDCK)wasderivedfromthekidneycellsofanadultcockerspaniel(Canisfamiliaris)in1958andispositivelytestedforkeratinbyimmunoperoxidasestaining.Thisisamodelmammaliancelllineextensivelyemployedinbiomedicalresearch. MDCKcellsareusefulforprocessingofbeta-amyloidprecursorproteinanditsproducts.MDCKcellsaresusceptIBLetoviralinfectionbutmakegoodtransfectionhost.Thesecellscouldbehelpfulinstudyingkidneycellsfunctionandgeneexpressionforbiomedicalresearchpurposes.FurThermore,theMDCKcelllineiswidelyusedininfluenzastudies.MDCKcellsarehyperdiploidwithabi-modalchromosomenumberdistribution.MostspreadscompriseonenormalXchromosome,buttherearenoconsistentidentifiableMarkerchromosomes.AltogenBiosystemsproducespolymer-basedtransfectionreagentkitsfortheMDCKcellline.

Data:

MDCK Cell Transfection Reagent

Figure1.siRNAstargetingLaminA/CmRNAornon-silencingcontrolsiRNAweretransfectedintoMDCKcellsfollowingtherecommendedprotocol.At48hourspost-transfectionthecellswereanalyzedbyqRT-PCRforLaminA/Cgeneexpressionlevels.18SrRNAlevelswereusedtonormalizetheLaminA/Cdata.Valuesarenormalizedtountreatedsample.Dataaremeans±SD(n=4).

MDCK-cells-transfection-protocol

Figure2.ProteinexpressionofLaminA/CinMDCKcells.DNAplasmidexpressingLaminA/CorsiRNAtargetingLaminA/CweretransfectedintoMDCKcellsfollowingAltogenBiosystemstransfectionprotocol.At72hourspost-transfectionthecellswereanalyzedbyWesternBlotforproteinexpressionlevels(normalizedbytotalprotein,10µgoftotalproteinloadedpereachwell).Untreatedcellsusedasanegativecontrol.

RequestaQuotefor
MDCKTransfectionReagent

AltogenBiosystems:
AltogenBiosystemsprovidespre-optimizedtransfectionkitsandelectroporationproductsforlifesciencesandcancerresearch.Transfectionprotocolsareoptimizedforindividualcancercelllines.AltogenBiosystemsdevelopedtwotypesofinvivodeliverykits(animaltransfection):1)Tissue-targetedreagents(deliveryofproteins,DNA,andRNAintoliver,pancreas,orkidneytissues),and2)Broadrangeinvivobiodistributionreagents(PEG-Liposomebasedreagent,Nanoparticle-basedinvivoreagent,Lipid-basedtransfectionkit,andPolymer-basedkit).Advancedformulationofreagentsandoptimizedtransfectionprotocolsprovideefficientintracellulardeliveryofproteins,DNA,mRNA,shRNA,siRNA,andothernegativelychargedbiomoleculesin vitroandinvivo.Readmore abouttransfectiontechnologyatAltogen’sTransfectionResource.

AltogenLabsResearchServices:

AltogenLabsprovidesGLP-compliantcontractresearchstudiesforpre-clinicalresearch,INDapplications,anddrugdevelopment.BIOLOGyCROservices include:Xenograftmodels(30+),developmentofstablecelllines,ELISAassaydevelopment,cell-basedandtissuetargetedRNAistudies,safetypharm/toxassays,andotherstudies(visitAltogenLabs.com).

VolumeOptions:

  • 0.5ml(Catalog#6845)
  • 1.5ml(Catalog#6846)
  • 1.5mlCRISPR(Catalog#2171)
  • 8.0ml(Catalog#7061)

AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究,药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化,可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外(癌细胞系)和体内(动物组织靶向试剂、癌细胞系)递送货物分子,包括质粒DNA,各种类型的RNA(mRNA,siRNA,shRNA,microRNA),蛋白质和小分子研究。 


Altogen生命科学公司致力于研发,生产和销售特定细胞系的转染试剂,用于细胞间生物分子的传递,并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物,脂质体,纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学,组合化学,和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务,包括代稳定的细胞系,细胞银行和冷冻保存,焦磷酸测序,克隆,RNA干扰(RNAi)和基因沉默服务,发展分析,siRNA文库筛选,并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生,可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择,无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务,包括设计与合成的siRNA的利益,验证siRNA的沉默效率,siRNA转染条件的优化,使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质(即RNA或DNA),通常是在生物实验室用来研究基因功能,基因表达的调节,生化映射,突变分析,和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子,这种分子,使质粒DNA(PDNA),信使RNA(mRNA),短干扰RNA(siRNA),小分子RNA(miRNA)的,并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是,无单提货的方法或转染试剂,可以适用于所有类型的细胞,细胞的细胞毒性和转染效率显着不同,取决于试剂,协议,并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子,脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂,使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应,并提供高效的siRNA转染的DNA,并在体内的蛋白质。由科学“杂志(2010年12月17日):PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒


120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司,开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子(DNA、RNA、蛋白质)的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识,开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中,常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是,由于细胞毒性和转染效率的差异很大,并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型,因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外(癌细胞系)和体内(用于动物研究的组织靶向试剂)转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发(ELISA、IC-50、qPCR)、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系,将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。

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                   SignaGen转染试剂的比较和特点 转染细胞广谱:转染几十种哺乳动物细胞和/或难转染细胞以及悬浮细胞 转染形式多样:转染DNA、mRNA、siRNA、miRNA、shRNA以及共转染DNA/RNA 转染技术优化提升:生物可降解聚合物的合成、增强型脂质体构建和PDCC优化技术等 转染试剂 转染的分子 特性   PolyJet™ 长DNA片段(<89kb... 查看更多>
一、Mallory三色染色法1. 试剂配制(1)重铬酸钾液 重铬酸钾2.5g,醋酸5ml,蒸馏水95ml(2)苯胺蓝桔黄G液 苯胺蓝0.5g,桔黄G2g,磷钨酸1g,蒸馏水100ml(3)酸性复红液 酸性复红0.5g,蒸馏水100ml2.染色步骤(1)中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水。(2)重铬酸钾液10m 查看更多>
RationaleThe use of mouse genetic models requires an efficient system of unique animal identifiers. The means that tissue must be obtained from each animal for 查看更多>
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脂质体介导的真核细胞转染实验的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。用脂质体将DNA导人各种真核细胞的效率比其他转染方法更高,重复性更好。 查看更多>
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细胞转染 实验方法 123
一直攀爬的蜗牛2021-07-31
本人最近正在做质粒DNA的293T细胞转染,请问各位大神,有没有用过sigma的转染试剂,我们实验室买了,但是是凝胶状,不知道怎么用,请指教!
细胞转染GFP质粒并进行表达之后,一般细胞内会有大量的GFP蛋白,可以发出绿色荧光。
GFP发出绿色荧光的原理是Ca离子进入GFP的beta-barrel结构中引起的特定能级,因此只要这个结构仍然保持着,就可以发出荧光。
由于GFP的beta-barrel结构非常稳定,一些版本的GFP蛋白(如EGFP)甚至能抵抗94C的高温几分钟而不完全变性,因此想在溶液状态下去掉GFP的荧光是很难的,一般需要用光漂白法。
基于其非常稳定的结构,即便细胞被固定了,仍然会有一部分的GFP蛋白保持其构象而发出荧光。此时荧光可能较弱。在荧光显微镜下是有可能看得到的。

用lip3000转染HAC15细胞,目的把质粒转入细胞,现阶段把带EGFP的质粒转进去就难,荧光显微镜下荧光很少,可以数清,按照lip3000说明书转染的(剂量有适当调整),求转染高手指点方法!!


悬浮细胞的转染方法:(以下内容转自生物帮资讯)
DXY721认为:
悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大,主要差别在于转染后的筛选,当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。
其实转染的过程很简单,问题是能不能转的进去的,转染率能有多少,转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。
我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染,说明书上都有具体的操作过程,将脂质体和目的基因按比例混合,然后加到细胞悬液里就OK了,说的简单,实际上还是有一些细节要注意的,比如脂质体和目的基因混合的比例,转染的细胞数,细胞的代数,细胞的状态,有的还要求在转染的前一天传代一次,不过不要怕,这些在脂质体说明书上都有明确的说明,按照说明书做就可以了。
jinghuanlv认为:
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。
脂质体转染的原理基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。
我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法,目前为止,悬浮细胞转染的最好方法还是电转,我们实验室用的电转仪是Bio-Rad的,使用条件是电压250V,电容975uF,效果不错,不妨一用。
用siRNA转染A375细胞,我看到好多说这个细胞转染效率很低,求转染效率高的转染试剂!!
细胞 (英文名:cell)并没有统一的定义,比较普遍的提法是:细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成,但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。一般来说,细菌等绝大部分微生物以及原生动物由一个细胞组成,即单细胞生物,高等植物与高等动物则是多细胞生物。细胞可分为原核细胞、真核细胞两类,但也有人提出应分为三类,即把原属于原核细胞的古核细胞独立出来作为与之并列的一类。研究细胞的学科称为细胞生物学。细胞体形极微,在显微镜下始能窥见,形状多种多样。主要由细胞核与细胞质构成,表面有细胞膜。高等植物细胞膜外有细胞壁,细胞质中常有质体,体内有叶绿体和液泡,还有线粒体。
现在这个行业发展的不错,生物实验技术外包也会跟着发展,比如一些高校或者企业部分实验不想自己内部开展,或者涉及的设备比较昂贵,技术要求高,都会寻求外包。但是现在竞争也比较大,的得看单位这边整体做的怎么样。

做的比较好的,一般都是上海地区的,你可以看下基尔顿生物。
细胞转染可以:(1)真核细胞可以掺入外源DNA而获得新的遗传标志;(2)应用于转基因动植物;(3)应用于生物制药、基因治疗、RNA干扰。脂质体介导法实验原理上图所示是脂质体介导转染的示意图,它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大;病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响;所以现在对于很多普通细胞系,一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性,因此脂质体与质粒的比例,细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题,通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。上图是本次实验采用的脂质体中阳离子组分的结构的示意图。本次实验采用的脂质体是promega公司的TransFast脂质体试剂,它是一种阳离子脂质体和中性脂质体的混合物,是对于本次实验中采用的293T细胞优化的转染试剂。
可能有多种原因:

目标蛋白对细胞有毒性,导致细胞死亡;
转染试剂以及DNA用量信息需要优化,否则对细胞具有伤害;
细胞贴壁转染之后没有正常换液。
建议:考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统;摸索转染试剂以及DNA用量信息,如果转染试剂毒性太大,可以考虑尝试义翘转染试剂sinofection;对转染后的细胞进行换液处理,如果细胞状态感觉不够理想,可以考虑添加一些血清来帮助细胞恢复健康。
以上所有分析、建议的前提是,细胞培养、无菌操作等等都没有问题。祝顺利,加油~
可以。常用脂质体转染法。

脂质体是磷脂分散在水中时形成的脂质双分子层,又称为人工生物膜。
阳离子脂质体表面带正电荷,能与核酸的磷酸根通过静电作用将DNA分子包裹入内,形成DNA一脂复合体,也能被表面带负电荷的细胞膜吸附,再通过膜的融合或细胞的内吞作用,偶尔也通过直接渗透作用,DNA传递进入细胞,形成包涵体或进入溶酶体 其中一小部分DNA能从包涵体内释放,并进入细胞质中,再进一步进入核内转录、表达。

影响转染试验的因素:

1转染试剂跟细胞系不匹配

转染试剂跟细胞系也是讲究配合默契的,使用同一种试剂,不同细胞系转染效率通常不同。但细胞系的选择通常是根据实验的需要,因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献,通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然,最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。


2细胞状态变化

因为有些细胞系是不稳定的,可能随着培养时间的改变,培养条件的不同,不同的选择压力,可能引起不同的克隆选择。因此就算是同一个细胞系,在不同条件下转染能力的差异可能会

很大

(1)转染试剂与细胞不匹配

细胞转染最适合的不是原代细胞,也不是传代很多次的细胞。这是因为细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变,总染色体重组或基因调控变化等而演化。这会导致和转染相关的细胞行为的变化。最适合转染的细胞是经过几次传代后达到对数生长期的细胞,细胞生长旺盛,最容易转染。

(2)把握时机

没错!转染也有适当的时机,相比较非分裂细胞——分裂细胞往往要比静止细胞更易于摄取并表达外源DNA。因此对大多数转染操作而言,细胞都在转染当天或前一天种板。

同样重要的是细胞在种板进行转染时不应处于过度生长的状态,如癌细胞数量过多,互相叠加,营养物质耗竭,代谢废物积聚,转染率低下也是很正常的!

因此,一定要在最适细胞密度时转染,才能获得较高的转染率。不同的转染试剂,要求转染时的最适细胞密度各不相同,即使同一种试剂,也会因不同的细胞类型或应用而异。

(3)微生物来捣乱

培养物可被细菌、酵母、真菌、病毒、支原体、甚至其他细胞种类所污染。各种污染都会导致产生错误的结果。

(4)交叉污染

如果同一个实验室同时培养不同种类的细胞,很同意发生“细胞串门”的现象,造成交叉污染。


3转染方法

不同转染试剂有不同的转染方法,但大多大同小异。转染时应跟据具体转染试剂推荐的方法,但也要注意,因不同实验室培养的细胞性质不同,质粒定量差异,操作手法上的差异等,其转染效果可能不同,应根据实验室的具体条件来确定最佳转染条件。

(1)血清

转染后未及时加入血清,会导致细胞大量死亡。一般要在转染后的4-6小时换液且换为有血清的培养基。也可以在原来的无血清培养基里面滴加血清。这个时候,最好不要换液,不要打扰细胞,让它安安静静地休息。但是也不能过早加入血清。过早的话,会引起未转染的细胞疯狂生长。那么,什么是最佳时机呢?在20%的细胞变圆的时候,就是加血清的最佳时机。

不过要特别注意:血清是一种包含生长因子及其它辅助因子的不确切成分的添加物,对不同细胞的生长作用有很大的差别。血清质量的变化直接影响细胞生长,因此也会影响转染效率。新加培养基的预热对细胞转染很有帮助。

(2)DNA质量

DNA质量对转染效率影响非常大。一般的转染技术(如脂质体等)基于电荷吸引原理,如果DNA不纯,如带少量的盐离子,蛋白,代谢物污染都会显著影响转染复合物的有效形成及转染的进行。


4载体构建

转染载体的构建(病毒载体,质粒DNA,RNA,PCR产物,寡核苷酸等)也影响转染结果。因此选择组成或可调控,强度合适的启动子也很重要,同时做空载体及其它基因的相同载体构建的转染正对照可排除毒性影响的干扰。

所以转染用的质粒首先要保证数量,一般为2μg以上。质粒纯度不够或者含有细菌LPS或其他对细胞有毒害作用的物质,也会影响转染效率。这个时候,就应该对质粒进行纯化和浓缩。

以上就是细胞转染率低的主要原因了,在实验过程中有没有遇到什么棘手的问题呢,欢迎留言讨论


您好,现在这个行业发展的不错,生物实验技术外包也会跟着发展,比如一些高校或者企业部分实验不想自己内部开展,或者涉及的设备比较昂贵,技术要求高,都会寻求外包。但是现在竞争也比较大,的得看单位这边整体做的怎么样。
其次要看下你选择单位的规模如何,做的比较好的,还是上海这边的,你可以看下基尔顿生物,原代细胞培养,动物造模,整体课题外包。