
Description
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Transfection Reagent for SW480 Cells (Colon Adenocarcinoma Cells, CCL-228)
- A biodegradable polymer based transfection agent – once inside the cell, the polymer degrades into smaller less toxic components reducing cell toxicity, facilitating release of the transgene, and improving transfection efficiency
- Effective transfection under conditions of up to 40% serum
- Gentle enough to be used for single cell analysis
- Download in vitro SW480 transfection protocol: [PDF]
- Download SW480 CRISPR/Cas9 transfection protocol: [PDF]
- Download PowerPoint presentation for SW480 cells transfection kit: [PPT]
- Developed and manufactured by Altogen Biosystems
Transfection Efficiency:
Reagent exhibits at least 82% transfection efficiency of siRNA delivery. Transfection efficiency was determined by qRT-PCR.
Transfection Protocol and MSDS:
Download Altogen Biosystems SW 480 Transfection Protocol: [PDF]
Download MSDS: [PDF]
SW480 Cell Line:
Colorectal cancer is the second primary cause of cancer-related deaths in men, accounting for nearly 50,000 fatalities annually in the United States, as per the American Cancer Society (ACS). Colorectal cancer cell lines are extensively employed in preclinical colon cancer research and represent accurate molecular models of primary carcinomas. The SW480 cell line was established from a Dukes type B tumor in the colon of a 50-year-old Caucasian male patient with colorectal adenocarcinoma. The cells exhibit an epithelial morphology, and are susceptible to human immunodeficiency virus 1. Also, The SW480 cell line is negative for colon antigen 3 and colon-specific antigen-p and produces granulocyte-macrophage colony-stimulating factor. This cell line is positive for keratin by immunoperoxidase staining. SW480 display elevated levels of p53 protein, and positively expresses c-myc, K-ras, H-ras, N-ras, sis, myb, and fos oncogenes. SW480 cells have a mutation in the 12 codon of the ras p.o.gene, and therefore can be used in PCR assays of mutation for this codon. This cell line is widely used in biomedical research related to the search for treatments for colon cancer. Altogen Biosystems provides polymer-based transfection kits for the SW480 cell line.
Data:
Figure 1. siRNAs targeting Lamin A/C mRNA or non-silencing control siRNA were transfected into SW480 cells following the recommended protocol. At 48 hours post-transfection the cells were analyzed by qRT-PCR for Lamin A/C gene expression levels. 18S rRNA levels were used to normalize the Lamin A/C data. Values are normalized to untreated sample. Data are means ± SD (n=4).
Figure 2. Protein expression of Lamin A/C in SW480 cells. DNA plasmid expressing Lamin A/C or siRNA targeting Lamin A/C were transfected into SW480 cells following Altogen Biosystems transfection protocol. At 72 hours post-transfection the cells were analyzed by Western Blot for protein expression levels (normalized by total protein, 10 µg of total protein loaded per each well). Untreated cells used as a negative control.
Selected in vivo transfection product citations (ALTOGEN® IN VIVO Transfection Kits used in the following publications):
- 2008 454(7203):523-7. Innate immunity induced by composition-dependent RIG-I …Saito et al [PDF]
- Am J Pathology. 2010 177(4):1870-80. Role of ocular complement factor H in a murine model … Lyzogubov et al [PDF]
- Nature Biotechnology. 2011 29(4):341-5. Delivery of siRNA to the mouse brain by … Alvarez-Erviti et al [PDF]
- Cancer Research. 2011 71(15):5144-53. Inhibition of miR-193a expression by… Iliopoulos et al [PDF]
- 2010 16(11):2108-19. RNase L releases a small RNA from HCV RNA that refolds … Malathi et al [PDF]
SW480 Transfection Kit
Altogen Biosystems:
Altogen Biosystems is a life sciences company that offers cell type-specific and pre-optimized transfection products, electroporation kits, and in vivo delivery reagents. Advanced formulation of reagents and optimized transfection protocols provide efficient intracellular delivery of protein, DNA, mRNA, shRNA and siRNA molecules. Read more about transfection technology at Altogen’s Transfection Resource.
Altogen Research Services:
Altogen Labs provides GLP-compliant contract research studies for pre-clinical research, IND applications, and drug development. Biology CRO services include: Xenograft models (30+), development of stable cell lines, ELISA assay development, cell-based and tissue targeted RNAi studies, safety pharm/tox assays, and other studies (visit AltogenLabs.com).
Volume Options:
- 0.5 ml (Catalog #6920)
- 1.5 ml (Catalog #6921)
- 1.5 ml CRISPR (Catalog #2198)
- 8.0 ml (Catalog #6922)
AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究,药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化,可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外(癌细胞系)和体内(动物组织靶向试剂、癌细胞系)递送货物分子,包括质粒DNA,各种类型的RNA(mRNA,siRNA,shRNA,microRNA),蛋白质和小分子研究。
Altogen生命科学公司致力于研发,生产和销售特定细胞系的转染试剂,用于细胞间生物分子的传递,并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物,脂质体,纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学,组合化学,和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务,包括代稳定的细胞系,细胞银行和冷冻保存,焦磷酸测序,克隆,RNA干扰(RNAi)和基因沉默服务,发展分析,siRNA文库筛选,并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生,可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择,无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务,包括设计与合成的siRNA的利益,验证siRNA的沉默效率,siRNA转染条件的优化,使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质(即RNA或DNA),通常是在生物实验室用来研究基因功能,基因表达的调节,生化映射,突变分析,和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子,这种分子,使质粒DNA(PDNA),信使RNA(mRNA),短干扰RNA(siRNA),小分子RNA(miRNA)的,并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是,无单提货的方法或转染试剂,可以适用于所有类型的细胞,细胞的细胞毒性和转染效率显着不同,取决于试剂,协议,并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子,脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂,使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应,并提供高效的siRNA转染的DNA,并在体内的蛋白质。由科学“杂志(2010年12月17日):PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒
120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司,开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子(DNA、RNA、蛋白质)的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识,开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中,常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是,由于细胞毒性和转染效率的差异很大,并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型,因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外(癌细胞系)和体内(用于动物研究的组织靶向试剂)转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发(ELISA、IC-50、qPCR)、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系,将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。
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我转的是7901、7901/DDP两种细胞,前者7901细胞很容易就转上,并且转后,状态良好,可是7901/DDP一转就死,我用的是吉玛慢病毒,转24小时后换液,刚开始一两天,没有异常,但后来细胞慢慢就死了,并且不是漂浮的,很多是贴着壁死,像是瓦解了一样
这是未转时细胞的样子
这是细胞转后,死亡的样子
并且即使是有些细胞未死,细胞后来也变得很脏,感觉有很破碎的细胞碎片
本人实验小白,**园子里大神指点,急,实在不知道怎么回事
细胞状态与密度;转染试剂的类型、用量;DNA的品质、用量;转染复合物的品质、作用细胞的时间长度。
GFP发出绿色荧光的原理是Ca离子进入GFP的beta-barrel结构中引起的特定能级,因此只要这个结构仍然保持着,就可以发出荧光。
由于GFP的beta-barrel结构非常稳定,一些版本的GFP蛋白(如EGFP)甚至能抵抗94C的高温几分钟而不完全变性,因此想在溶液状态下去掉GFP的荧光是很难的,一般需要用光漂白法。
基于其非常稳定的结构,即便细胞被固定了,仍然会有一部分的GFP蛋白保持其构象而发出荧光。此时荧光可能较弱。在荧光显微镜下是有可能看得到的。
DXY721认为:
悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大,主要差别在于转染后的筛选,当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。
其实转染的过程很简单,问题是能不能转的进去的,转染率能有多少,转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。
我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染,说明书上都有具体的操作过程,将脂质体和目的基因按比例混合,然后加到细胞悬液里就OK了,说的简单,实际上还是有一些细节要注意的,比如脂质体和目的基因混合的比例,转染的细胞数,细胞的代数,细胞的状态,有的还要求在转染的前一天传代一次,不过不要怕,这些在脂质体说明书上都有明确的说明,按照说明书做就可以了。
jinghuanlv认为:
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。
脂质体转染的原理基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。
我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法,目前为止,悬浮细胞转染的最好方法还是电转,我们实验室用的电转仪是Bio-Rad的,使用条件是电压250V,电容975uF,效果不错,不妨一用。

