Description
GenJetInVitroDNATransfectionReagent(Ver.II)isupgradedversionofGenJetInVitroDNATransfectionReagent.Adoptinganewchemistry,moreDNAcondensinggroupswereliberatedinGenJet(Ver.II)(100%vs.80%inoldversion),leADIngto3~4foldsincreaseoftransfectionefficiencywithoutsacrificingcellviABIlity.GenJet(Ver.II)reagent,1.0ml,issufficientfor~667transfectionsin24wellplatesor~333transfectionsin6wellplates.
FeaturescomparedwitholdversionGenJetInVitroDNATrasnfectionReagent
-Cell-dependent3~4timeshigherefficiency
-Topchoiceforhard-to-transfectcells
-Efficiencyboostedinthepresenceofserumandantibioticsformostofcelltypes
-Exceptionalhighlevelsofrecombinantproteinproduction
StorageCondition
Storeat4°C.Ifstoredproperly,theproductisstablefor12monthsorlonger.
ComparisonsofTransfectionEfficiencyandCytotoxicityofGenJet(Ver.II)withOldVersionGenJetandOtherLeadingProducts
Comparisonoftransfectionefficiency(leftpanel)andtoxicity(rightpanel)GenJetVer.IIwitholdversionGenJetoncommonlyusedmammaliancells.phRL-CMVencodingRenillaLuciferasewasintroducedintocellswiththepresenceofserumandantibiotics.TheRenilliaLuciferaseactivitywasdeterminedwithRenillaLuciferaaseAssaySystem(Promega).Forcytotoxicity,MTTassaywasemployedtodeterminecellviabilitywithuntransfectedcontrolas100%.
AcomparisonoftransfectionefficiencyofGenJet(Ver.II)vs.Lipofectamine2000onprimaryrataorticsmoothmusclecells.PrimaryrataorticsmoothmusclecellswerepreparedandtransfectedwithanucleartargetedGFPCDNAbyGenJet(rightpanel)andLipofectamine2000(L2K,leftpanel)respectively.ThetransfectionefficiencywerecheckedunderaNikonEclipse2000fluorescencemicroscopy48hoursposttransfection
UpperPanel:TransfectionefficiencycomparisonofGenJetVer.IIwitholdversionGenJeton293Tcells.pEGFP-N3wastransfectedto293Tcellsat90%confluencywithpresenceofserumandantibiotics.GFPfluorescencewasdetectedwithNikonEclipse2000microscopy48hoursposttransfection
Lowerpanel:TransfectionefficiencycomparisonofGenJetVer.IIwitholdversionGenJetonHelacells.pEGFP-N3wastransfectedtoHelacellsat90%confluencywithpresenceofserumandantibiotics.GFPfluorescencewasdetectedwithNikonEclipse2000microscopy48hoursposttransfection
TechnicalInformation&Datasheet
-ACompleteTransfectionProtocol
-AShortProtocolforAdvancedUsers
-AProtocolforTransfectingSUSPension293andCHOCells
- AProtocolforLentivirusProduction
- AProtocolrAAVProduction
-TechnicalNote&TransfectionTips
RelatedProduct:GenJetInVitroDNATransfectionreagent
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其次要看下你选择单位的规模如何，做的比较好的，还是上海这边的，你可以看下基尔顿生物，原代细胞培养，动物造模，整体课题外包。
不建议你用MDCK细胞，非常难转染。
GFP发出绿色荧光的原理是Ca离子进入GFP的beta-barrel结构中引起的特定能级，因此只要这个结构仍然保持着，就可以发出荧光。
由于GFP的beta-barrel结构非常稳定，一些版本的GFP蛋白（如EGFP）甚至能抵抗94C的高温几分钟而不完全变性，因此想在溶液状态下去掉GFP的荧光是很难的，一般需要用光漂白法。
基于其非常稳定的结构，即便细胞被固定了，仍然会有一部分的GFP蛋白保持其构象而发出荧光。此时荧光可能较弱。在荧光显微镜下是有可能看得到的。
我刚开始做转染，悬浮细胞，分别做过表达和敲减，看了很多文献，大都没有提及转染后是用转染的这同一批细胞同时做pcr，wb，cck8，凋亡，细胞周期；还是说这次转染只做pcr或wb，再转染一次做cck8或细胞周期。剩下的功能试验均同前，转染一次做一次？我养的是悬浮细胞，转染后做cck8这些功能试验前需要离心换液吗？跪谢解答！
可以用移液器将细胞吸出来并高速离心，沉淀重悬于PBS中洗涤，接着就可以裂解提取蛋白了。可以用超声，酶解等等，裂解后离心收集上清。
其次要看下你选择单位的规模如何，上海这边的，你可以看下基尔顿生物，原代细胞培养，动物造模，整体课题外包。
实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒，转染细胞没问题。
我觉得只要是注意以下2点就可以了：
1，注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染，收集菌体沉淀时防止菌液散落，经常用75%的乙醇擦拭手套。
2，最后洗脱时最好使用无内毒素的水，我们是用注射用水的。
无论是小提还是大提我们都是用的日常型的，并没有刻意用转染级的，因为转染量大，去内毒素的操作太麻烦，损失太大。
转染分2种，一种是瞬时转染，即转染后让细胞表达目的蛋白后即提取蛋白，提一次蛋白，转染一次，这种方式一般不传代；
另一种转染为稳定转染，转染后加入一定选择压力进行筛选，没有转染的细胞不能存活，只留下转染的细胞，这种情况下可以筛选单个转染细胞，构建稳定表达某一特定蛋白或基因的细胞系。
