Description
GenJet DNA In Vitro
Transfection Reagent for HepG2 Cells is pre-optimized
for HepG2 cell transfection.
HepG2 (Hepatocellular carcinoma, human) is a perpetual add cell line which
was derived from the liver tissue of a 15 year old caucasian male with a well
differentiated hepatocellular carcinoma. These cells are epithelial in
morphology, have a model chromosome number of 55 and are not tumorigenic in nude
mice. The cells secrete a variety of major plasma proteins e.g.. albumin, alpha
2-macroglobulin, alpha 1-antitrypsin, transferrin and plasminogen. They
have been grown successfully in large scale cultivation systems. Hepatitis
B virus surface antigens have not been detected. HepG2 cells have been shown to
be G418 resistant (400µg/mL). The cells will respond to stimulation with human
growth hormone.
Refer to the following optimal transfection conditions for maximal transfection
efficiency on HepG2 cells. GenJet reagent, 1.0 ml, is sufficient for 300 to
600 transfections in 24 well plates or 150 to 300 transfections in 6 well plates.
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Summary of
Optimal Transfection Conditions: |
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Storage Condition
Store at 4 °C. If stored properly, the product is stable for 12 months or longer
A Picture Showing Transfection Efficiency of GenJet Reagent on HepG2 Cells
GenJet reagent is optimized for
HepG2 cells (ATCC # HB-8065)
with exceptional efficiency in comparison of Lipofectamine 2000 (L2K) and Amaxa
electroporation device.
HepG2 cells
were grown per ATCC recommended culture medium on a collagen type I treated
culture dish and transfected with pEGFP-N3 by
GenJet. The efficiency was checked 48 hours post transfection.
Right Panel: Comparison of transfection efficiency of GenJet with Lipofecatmine
2000 (L2K),
and Amaxa electroporation
device on
HepG2 cells. GFP DNA (pEGFP-N3, 4.7 kb) was introduced to HepG2 cell (cultured
on Collagen pretreated dishes) with different transfection reagents per manufacturer's protocols
. GFP positive cell (%)
and fluorescence intensity were detected by passing through FACS 48 hours post transfection
Left Panel: presence of serum and antibiotics enhances GenJet reagent's
efficiency on HepG2 cells. HepG2 cell (grown on collagen treated dishes)
was transfected with three different conditions-------serum and antibiotics
free, presence of 10% serum and antibiotics followed by removal 5 hours post transfection and presence of 10% serum and antibiotics without removal 5 hours
post transfection.
GenJet reagent is optimized for
HepG2 cells (ATCC # HB-8065).
HepG2 cells
were grown per ATCC recommended culture medium on a collagen type I treated
culture dish and transfected with GFP (pEGFP-N3, 4.7 kb, right panel) and
β-galactosidase cDNA
(pSV-β-galactosidase,
6.9 kb, left panel) by pre-optimized GenJet DNA Transfection Reagent for HepG2
cells . The efficiency was checked 48 hours post transfection
by Zeiss 510 Confocal Microscopy and
β-galactosidase staining kit
respectively.
Data Sheet
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Testimonials
It has been tested and better results were obtained than with Amaxa Nucleofactor.
A colleague and I, will be using it for all of our transfection experiments.
----------Fouad Francis., Ph.D., NICHD/NIH
I have got 70% efficiency with a GFP plasmid. With my protein of interest,
which is 200KDa, I got 20% efficiency, pretty comparable to Amaxa
electroporation. Thank you SignaGen.
--------Marina
Uhart, Ph.D., NHLBI/NIH
Wow!!!!! What a product. We have been using Lipofectamine 2000 on HepG2
and have been struggling to get even modest transfection efficiency. In
contrast, GenJet gave us dramatically higher transfection efficiency. By
eye, looks like 5-10 fold improvement. The especially impressive
part is that one uses less reagent and less DNA to get much better results. Our
future HepG2 experiments will now all be done with GenJet. Thanks.
--------Erik Snapp, Ph.D., Albert Einstein College of Medicine.
ebiomall.com
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DXY721认为：
悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大，主要差别在于转染后的筛选，当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。
其实转染的过程很简单，问题是能不能转的进去的，转染率能有多少，转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。
我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染，说明书上都有具体的操作过程，将脂质体和目的基因按比例混合，然后加到细胞悬液里就OK了，说的简单，实际上还是有一些细节要注意的，比如脂质体和目的基因混合的比例，转染的细胞数，细胞的代数，细胞的状态，有的还要求在转染的前一天传代一次，不过不要怕，这些在脂质体说明书上都有明确的说明，按照说明书做就可以了。
jinghuanlv认为：
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。
脂质体转染的原理基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作用，将目的基因导入细胞内，而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍，所以，脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。
我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法，目前为止，悬浮细胞转染的最好方法还是电转，我们实验室用的电转仪是Bio-Rad的，使用条件是电压250V，电容975uF，效果不错，不妨一用。
“转化”是指含外源基因的重组质粒（载体）将外源基因直接导入原核细胞（如细菌）；
“转导”指通过重组病毒载体将外源基因导入真核细胞或原核细胞；
“转染”指重组质粒载体或游离核苷酸在脂质体等介导下进入真核细胞；
“感染”在基因转移实验中强调重组病毒载体入侵受体细胞的过程。
在使用这4 个名词时， 应仔细分析基因转移实验的四要素——转移物、载体、介导方法、受体细胞类型，而正确区 分载体和受体细胞类型是辨析的关键点。当载体是重组质粒时，如受体细胞是原核细胞应使 用“转化”，如受体细胞是真核细胞则使用“转染”；当载体是重组病毒时，如强调转移物进 入受体细胞应使用“转导”，如强调重组病毒载体进入受体细胞的过程则使用“感染”。
我刚开始做转染，悬浮细胞，分别做过表达和敲减，看了很多文献，大都没有提及转染后是用转染的这同一批细胞同时做pcr，wb，cck8，凋亡，细胞周期；还是说这次转染只做pcr或wb，再转染一次做cck8或细胞周期。剩下的功能试验均同前，转染一次做一次？我养的是悬浮细胞，转染后做cck8这些功能试验前需要离心换液吗？跪谢解答！
实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒，转染细胞没问题。
我觉得只要是注意以下2点就可以了：
1，注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染，收集菌体沉淀时防止菌液散落，经常用75%的乙醇擦拭手套。
2，最后洗脱时最好使用无内毒素的水，我们是用注射用水的。
无论是小提还是大提我们都是用的日常型的，并没有刻意用转染级的，因为转染量大，去内毒素的操作太麻烦，损失太大。
本人研究生
悬浮细胞的转染方法：（以下内容转自生物帮资讯）
DXY721认为：
悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大，主要差别在于转染后的筛选，当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。
其实转染的过程很简单，问题是能不能转的进去的，转染率能有多少，转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。
我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染，说明书上都有具体的操作过程，将脂质体和目的基因按比例混合，然后加到细胞悬液里就OK了，说的简单，实际上还是有一些细节要注意的，比如脂质体和目的基因混合的比例，转染的细胞数，细胞的代数，细胞的状态，有的还要求在转染的前一天传代一次，不过不要怕，这些在脂质体说明书上都有明确的说明，按照说明书做就可以了。
jinghuanlv认为：
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。
脂质体转染的原理基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作用，将目的基因导入细胞内，而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍，所以，脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。
我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法，目前为止，悬浮细胞转染的最好方法还是电转，我们实验室用的电转仪是Bio-Rad的，使用条件是电压250V，电容975uF，效果不错，不妨一用。
DXY721认为：
悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大，主要差别在于转染后的筛选，当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。
其实转染的过程很简单，问题是能不能转的进去的，转染率能有多少，转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。
我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染，说明书上都有具体的操作过程，将脂质体和目的基因按比例混合，然后加到细胞悬液里就OK了，说的简单，实际上还是有一些细节要注意的，比如脂质体和目的基因混合的比例，转染的细胞数，细胞的代数，细胞的状态，有的还要求在转染的前一天传代一次，不过不要怕，这些在脂质体说明书上都有明确的说明，按照说明书做就可以了。
jinghuanlv认为：
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。
脂质体转染的原理基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作用，将目的基因导入细胞内，而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍，所以，脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。
我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法，目前为止，悬浮细胞转染的最好方法还是电转，我们实验室用的电转仪是Bio-Rad的，使用条件是电压250V，电容975uF，效果不错，不妨一用。
