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Signagen/GenMute™ siRNA Transfection Reagent for Primary Keratinocytes/SL100568-KER/0.1 mL
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Signagen/GenMute™ siRNA Transfection Reagent for Primary Keratinocytes/SL100568-KER/0.1 mL
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Description:
GenMute™ siRNA Transfection Reagent for Primary Keratinocytes is pre-optimized for transfecting siRNA to primary keratinocytes. Primary keratinocytes are known for notorious resistance for DNA and siRNA transfections. With the pre-optimized transfection conditions, average 90% silencing can be obtained.

Size & content:
- GenMute™ Reagent, 1.0 ml, sufficient for ~833 reactions based on transfecting 20 pmoles siRNA or miRNA mimics in 24-well plate
- GenMute™ Transfection Buffer (5x ), formulated for maximal transfection efficiency, 8.0 ml to make 40 ml working solution

Refer to the following optimal transfection conditions for maximal silencing on primary keratinocytes. GenMute™ reagent, 1.0 ml, is sufficient for ~833 transfections in 24 well plates or ~416 transfections in 6 well plates.

Summary of Optimal Transfection Conditions:
Cell culture medium
Confluency of cell on the day of transfection
Optimal siRNA concentration
Diluent for siRNA and GenMute
™ Reagent
Incubation Time to Form GenMute™/siRNA Complex
Maximal Silencing Efficiency

Transfection Results:
Reporter Gene
Silencing Efficiency (% )


DMEM with 4.5 g/L glucose, 10% FBS

~70%
40 nM

1xGenMute™ Transfection Buffer
~15 minutes at RT
48 hours


Renilla Luciferase
90%


Storage:
Store at 4 °C. If stored properly, the product is stable for 12 months or longer.

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胰高血糖素是一种由胰岛细胞分泌的蛋白质激素,它与胰岛素一起发挥作用来调节血糖的水平。当血糖(葡萄糖)浓度低时,胰高血糖素刺激肝脏将储存的糖原转化为葡萄糖,并立即释放到血流中,以此来升高血糖的浓度。胰高血糖素还可以增加肝脏中蛋白质生成葡萄糖的速率。... 查看更多>
RationaleThe use of mouse genetic models requires an efficient system of unique animal identifiers. The means that tissue must be obtained from each animal for 查看更多>
SignaGen 是一家专注于开发和生产基因转导工具的企业,服务于生物医学研究领域。借助我们独有的技术平台(美国专利商标局号码为 072308 和 61135606),SignaGen 已经成功开发出三大类 DNA/siRNA 转染试剂,经验证我们的产品比市场上主导产品效率更高,细胞毒性更低。更重要的是我们提供一个合理的价位。 查看更多更新引用文献 more info Recent Product & Service Cit... 查看更多>
上海通善生物科技有限公司是qiagen DNA转染试剂盒专业供应商,价格低,质量好,批次最新,免费技术指导,免费产品代测,免运费,服务周到,是国家重点实验室及国内各大院校长期指定供应商。qiagen DNA转染试剂盒品牌的核心供应商——上海通善生物公司简介如下:依托复旦大学,集研发、销售、实验室技术服务于一体的高科技企业。产品领域:分子生物学、细胞生物学、细菌学、遗传学、免疫学、生物化学、蛋白质学、细胞治疗、临床应用等领域。qiagen 查看更多>
转染试剂选择与介绍在选择转染方法时,需考虑您希望输送的运载物(DNA、RNA或蛋白质)以及您希望转染的细胞类型。您可通过下表选择Life Technologies™的各类阳离子脂质体转染试剂和Neon®转染系统.我们提供了各种DNA、siRNA、寡核苷酸和RNA输送选择,让您可以对自己的结果更加自信. 卓越的输送效果—可转染多种类型的细胞 无毒性作用—您之所以能看到结果,是因为核酸存在,而不是因为试剂 需要的优化工作更少—针对大多数... 查看更多>
济南思科生物科技有限公司在发布的LipoJet™转染试剂盒供应信息,浏览与LipoJet™转染试剂盒相关的产品或在搜索更多与LipoJet™转染试剂盒相关的内容。 查看更多>
体内DNA转染试剂是由上海新睿生物科技有限公司代理或销售的SignaGen品牌的试剂,产品来源于美国。上海新睿生物科技有限公司是中国最权威的体内DNA转染试剂试剂销售服务商之一,在上海等地方销售体内DNA转染试剂试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业体内DNA转染试剂仪器产品及图片,以便挑选到性价比高,合适的体内DNA转染试剂产品 查看更多>
-Use sterile technique and sterile solutions in steps 1 to 3.- 1. Using a saturated starter culture, inoculate 25 to 30 ml of appropriate media in a 125 ml fla 查看更多>
总有机碳在实验室纯水系统中的在线监测实验室纯水在分子生物学科研领域有着举足轻重的作用。衡量纯水的指标一般有电阻率、总有机碳(TOC)、细菌及热源等等。其中有机碳含量会直接影响实验的检测结果和重复性,并会破坏纯水系统的反渗透膜和树脂功能,增加细菌生长。为了确保水中的有机物保 查看更多>
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细胞转染GFP质粒并进行表达之后,一般细胞内会有大量的GFP蛋白,可以发出绿色荧光。
GFP发出绿色荧光的原理是Ca离子进入GFP的beta-barrel结构中引起的特定能级,因此只要这个结构仍然保持着,就可以发出荧光。
由于GFP的beta-barrel结构非常稳定,一些版本的GFP蛋白(如EGFP)甚至能抵抗94C的高温几分钟而不完全变性,因此想在溶液状态下去掉GFP的荧光是很难的,一般需要用光漂白法。
基于其非常稳定的结构,即便细胞被固定了,仍然会有一部分的GFP蛋白保持其构象而发出荧光。此时荧光可能较弱。在荧光显微镜下是有可能看得到的。
可以。常用脂质体转染法。

脂质体是磷脂分散在水中时形成的脂质双分子层,又称为人工生物膜。
阳离子脂质体表面带正电荷,能与核酸的磷酸根通过静电作用将DNA分子包裹入内,形成DNA一脂复合体,也能被表面带负电荷的细胞膜吸附,再通过膜的融合或细胞的内吞作用,偶尔也通过直接渗透作用,DNA传递进入细胞,形成包涵体或进入溶酶体 其中一小部分DNA能从包涵体内释放,并进入细胞质中,再进一步进入核内转录、表达。

本人为新手,希望大家能够直到一下细胞转染效率的问题。现在已知的信息如下:

质粒上面包含了萤光虫荧光素酶基因和海参荧光素酶基因,请问我通过什么方法可以测得转染效率?

如果不能测得转染效率,请问怎么优化转染条件呢?

细胞转染的详细过程123
dppezmiu2017-10-02
您好,现在这个行业发展的不错,生物实验技术外包也会跟着发展,比如一些高校或者企业部分实验不想自己内部开展,或者涉及的设备比较昂贵,技术要求高,都会寻求外包。但是现在竞争也比较大,的得看单位这边整体做的怎么样。
其次要看下你选择单位的规模如何,上海这边的,你可以看下基尔顿生物,原代细胞培养,动物造模,整体课题外包。
细胞 (英文名:cell)并没有统一的定义,比较普遍的提法是:细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成,但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。一般来说,细菌等绝大部分微生物以及原生动物由一个细胞组成,即单细胞生物,高等植物与高等动物则是多细胞生物。细胞可分为原核细胞、真核细胞两类,但也有人提出应分为三类,即把原属于原核细胞的古核细胞独立出来作为与之并列的一类。研究细胞的学科称为细胞生物学。细胞体形极微,在显微镜下始能窥见,形状多种多样。主要由细胞核与细胞质构成,表面有细胞膜。高等植物细胞膜外有细胞壁,细胞质中常有质体,体内有叶绿体和液泡,还有线粒体。
传统的转染试剂有一定的细胞毒性,在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如,阳离子脂质体。带正电的脂质体与核酸带负电的 磷酸基团 形成复合物被细胞内吞。血清中含有大量的蛋白质,在转染过程中,带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附,影响转染效率。另外,使用脂质体等转染 试剂时,由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞,引发细胞毒性,导致转染效率降低,故不能有血清转染。这些转染试剂要求在转染前换无血清培养基,转染后 4-6h在更换成有血清培养基,这其实是为了减轻转染造成的细胞毒性。

最近在Raw264.7细胞上进行干扰和用质粒进行过表达实验,脂质体根本转不进去,后来又换了一个国产的转染试剂转染效率也很低,现在考虑用电转。
我们实验室有Lonza电转仪,有没有好一点的电转染试剂或者细胞转染试剂?

用siRNA转染A375细胞,我看到好多说这个细胞转染效率很低,求转染效率高的转染试剂!!
转染试剂有的毒性很大,要准时换液。可以换个低毒性的试试。或者你转染的东西有致死性。
我目前遇到的瞬时转染,没有专门做细胞同步化的。

但是有在转染前,将细胞进行重新传代的情况,这样做的目的在于保持细胞的活性状态。
“转染前将细胞以1.5-4.5X104 cells/well 的量(具体接细胞数请参考表1)接种在孔板中,于37℃, 5%CO2 的条件下进行培养,18-24小时( sf9细胞为3-4小时)后转染。”
细胞转染可以:(1)真核细胞可以掺入外源DNA而获得新的遗传标志;(2)应用于转基因动植物;(3)应用于生物制药、基因治疗、RNA干扰。
脂质体介导法
实验原理

上图所示是脂质体介导转染的示意图,它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。
外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大;病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响;所以现在对于很多普通细胞系,一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。
利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性,因此脂质体与质粒的比例,细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题,通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。

上图是本次实验采用的脂质体中阳离子组分的结构的示意图。
本次实验采用的脂质体是promega公司的TransFast脂质体试剂,它是一种阳离子脂质体和中性脂质体的混合物,是对于本次实验中采用的293T细胞优化的转染试剂。
需要连接到载体上才能转染受体细胞,载体可能是质粒或者病毒