Product Category: Pre-made recombinant lentivirus; LV-EF1α-iCre-Puro; LV-EF1A-iCre-Puro; LV-EF1α-iCre-IRES-Puro; EF1A-iCre-Puro Lentivirus;
EF1α-iCre-Puro Lentivirus
Description: Cre recombinase is a type I topoisomerase from bacteriophage P1 that catalyzes the site-specific recombination of DNA between loxP sites. Cre recombinase is used as a tool to genetically modify genes, such as to delete a segment of DNA flanked by LoxP
sites in
cells or experimental animals. By optimizing the mammalian codon usage for
Cre recombinase, Cre expression is improved in the mammalian cells. This codon-improved
Cre (known as iCre) transgene shows lower CpG content from the prokaryotic
coding sequence, thus reducing the chances of epigenetic silencing in mammals.
This
LV-EF1α-iCre-Puro
pre-made lentivirus expresses
iCre recombinase with
co-expression of puromycin selection in an IRES cassette under EF1α
promoter. Ready to use
format.
Titer: > 1x109 TU/mL
Selection Antibiotic: Puromycin
Purity*: In vivo grade and OK for both in vitro tissue culture infection and in vivo injection
Size: 2 x 25 µL (Std Pack)
Storage Buffer: PBS
Infection Protocol: 
Transfer Vector Map:
* Concentrated via PEG precipitation followed by ultra-centrifugation at 25000 rpm
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但是有在转染前，将细胞进行重新传代的情况，这样做的目的在于保持细胞的活性状态。
“转染前将细胞以1.5-4.5X104 cells/well 的量(具体接细胞数请参考表1）接种在孔板中，于37℃， 5%CO2 的条件下进行培养，18-24小时（ sf9细胞为3-4小时）后转染。”
其次要看下你选择单位的规模如何，上海这边的，你可以看下基尔顿生物，原代细胞培养，动物造模，整体课题外包。
我刚开始做转染，悬浮细胞，分别做过表达和敲减，看了很多文献，大都没有提及转染后是用转染的这同一批细胞同时做pcr，wb，cck8，凋亡，细胞周期；还是说这次转染只做pcr或wb，再转染一次做cck8或细胞周期。剩下的功能试验均同前，转染一次做一次？我养的是悬浮细胞，转染后做cck8这些功能试验前需要离心换液吗？跪谢解答！
目标蛋白对细胞有毒性，导致细胞死亡；
转染试剂以及DNA用量信息需要优化，否则对细胞具有伤害；
细胞贴壁转染之后没有正常换液。
建议：考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统；摸索转染试剂以及DNA用量信息，如果转染试剂毒性太大，可以考虑尝试义翘转染试剂sinofection；对转染后的细胞进行换液处理，如果细胞状态感觉不够理想，可以考虑添加一些血清来帮助细胞恢复健康。
以上所有分析、建议的前提是，细胞培养、无菌操作等等都没有问题。祝顺利，加油~
转染分2种，一种是瞬时转染，即转染后让细胞表达目的蛋白后即提取蛋白，提一次蛋白，转染一次，这种方式一般不传代；
另一种转染为稳定转染，转染后加入一定选择压力进行筛选，没有转染的细胞不能存活，只留下转染的细胞，这种情况下可以筛选单个转染细胞，构建稳定表达某一特定蛋白或基因的细胞系。
各位版友求助，
我使用Hek293构建转染模型，瞬转5质粒，用lipo2000做转染体系。
转染48h，发现荧光较强的细胞都在爬片的边缘，比例十分少。是因为我添加试剂的手法不对吗。
同时也发现加入转染体系后细胞状态特别差。想问一下用lipo2000时可以用无双抗的10%FBSDMEM吗。我转染前6h现在用的是纯DMEM，不含FBS。
请各位大神帮忙
不建议你用MDCK细胞，非常难转染。
做的比较好的，一般都是上海地区的，你可以看下基尔顿生物。
