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Signagen/MAP3K7 Adenovirus/Category: Ready to Package Adenovirus/
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Signagen/MAP3K7 Adenovirus/Category: Ready to Package Adenovirus/
品牌 / 
Signagen
货号 / 
SL105012
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ProductInformation
ProductName:Mitogen-activatedProteinKinaseKinaseKinase7,clonedintoourAd
-MAX™adenovirusexpressionsystem,readytopackage.
Promoter:CMV
StorageBuffer:DMEMwith2.5%BSA,2.5%glycerol
TurnaroundTime:5~6weeks

GeneInformation
GeneName:Mitogen-activatedProteinKinaseKinaseKinase7
NCBIAcc.#:NM_003188
GeneSymbol:MAP3K7
GeneID:6885
GINumber:4507360
FusionTag:No

Customizedserviceisavailablewithotherpromoters(CAG,U6,H1,UBCorSynapsin)andreporters(GFP,mRFP,Luc,LacZ,etc).Pleaserequestaquotewithus.
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-Use sterile technique and sterile solutions in steps 1 to 3.- 1. Using a saturated starter culture, inoculate 25 to 30 ml of appropriate media in a 125 ml fla 查看更多>
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Grow 100 ml yeast cells in desired media overnight to an A600 of ~1.0 (0.6 to 1.2 works well). For growth in minimal media, 1 ml of a saturated overnight cultu 查看更多>
上海通善生物科技有限公司是qiagen DNA转染试剂盒专业供应商,价格低,质量好,批次最新,免费技术指导,免费产品代测,免运费,服务周到,是国家重点实验室及国内各大院校长期指定供应商。qiagen DNA转染试剂盒品牌的核心供应商——上海通善生物公司简介如下:依托复旦大学,集研发、销售、实验室技术服务于一体的高科技企业。产品领域:分子生物学、细胞生物学、细菌学、遗传学、免疫学、生物化学、蛋白质学、细胞治疗、临床应用等领域。qiagen 查看更多>
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目标蛋白对细胞有毒性,导致细胞死亡;
转染试剂以及DNA用量信息需要优化,否则对细胞具有伤害;
细胞贴壁转染之后没有正常换液。
建议:考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统;摸索转染试剂以及DNA用量信息,如果转染试剂毒性太大,可以考虑尝试义翘转染试剂sinofection;对转染后的细胞进行换液处理,如果细胞状态感觉不够理想,可以考虑添加一些血清来帮助细胞恢复健康。
以上所有分析、建议的前提是,细胞培养、无菌操作等等都没有问题。祝顺利,加油~
细胞 (英文名:cell)并没有统一的定义,比较普遍的提法是:细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成,但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。一般来说,细菌等绝大部分微生物以及原生动物由一个细胞组成,即单细胞生物,高等植物与高等动物则是多细胞生物。细胞可分为原核细胞、真核细胞两类,但也有人提出应分为三类,即把原属于原核细胞的古核细胞独立出来作为与之并列的一类。研究细胞的学科称为细胞生物学。细胞体形极微,在显微镜下始能窥见,形状多种多样。主要由细胞核与细胞质构成,表面有细胞膜。高等植物细胞膜外有细胞壁,细胞质中常有质体,体内有叶绿体和液泡,还有线粒体。
我目前遇到的瞬时转染,没有专门做细胞同步化的。

但是有在转染前,将细胞进行重新传代的情况,这样做的目的在于保持细胞的活性状态。
“转染前将细胞以1.5-4.5X104 cells/well 的量(具体接细胞数请参考表1)接种在孔板中,于37℃, 5%CO2 的条件下进行培养,18-24小时( sf9细胞为3-4小时)后转染。”
需要连接到载体上才能转染受体细胞,载体可能是质粒或者病毒
质粒转染细胞后多久能提RNA做PCR
实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒,转染细胞没问题。
我觉得只要是注意以下2点就可以了:
1,注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染,收集菌体沉淀时防止菌液散落,经常用75%的乙醇擦拭手套。
2,最后洗脱时最好使用无内毒素的水,我们是用注射用水的。
无论是小提还是大提我们都是用的日常型的,并没有刻意用转染级的,因为转染量大,去内毒素的操作太麻烦,损失太大。
您好,现在这个行业发展的不错,生物实验技术外包也会跟着发展,比如一些高校或者企业部分实验不想自己内部开展,或者涉及的设备比较昂贵,技术要求高,都会寻求外包。但是现在竞争也比较大,的得看单位这边整体做的怎么样。
其次要看下你选择单位的规模如何,做的比较好的,还是上海这边的,你可以看下基尔顿生物,原代细胞培养,动物造模,整体课题外包。
可以考虑在以下角度进行转染实验的优化:
细胞状态与密度;转染试剂的类型、用量;DNA的品质、用量;转染复合物的品质、作用细胞的时间长度。
无限稀释法,就是铺到96板的一个孔,然后倍数稀释下去,到最后就会有一个细胞的孔,还有就是细胞计数,然后再铺96孔,也会出现一个细胞,但是对于挑单克隆来说,我觉得没必要单个细胞,单个细胞也不容易长起来,虽然挑克隆可能是混转的,但是不会影响实验需求。
大家都是用什么方法挑选细胞单克隆的
单克隆:单克隆是指‘子代来源于一个母体.
细胞培养:细胞的大规模克隆.细胞培养,既包括微生物细胞的培养,细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞.
单克隆一般常指动植物细胞的克隆,细胞培养一般是指动物、微生物等细胞的细胞克隆.
二者没有什么明显区别.单克隆在单克隆抗体制备中比较常见.其实是对骨髓瘤细胞的细胞培养.

各位版友求助,

我使用Hek293构建转染模型,瞬转5质粒,用lipo2000做转染体系。

转染48h,发现荧光较强的细胞都在爬片的边缘,比例十分少。是因为我添加试剂的手法不对吗。

同时也发现加入转染体系后细胞状态特别差。想问一下用lipo2000时可以用无双抗的10%FBSDMEM吗。我转染前6h现在用的是纯DMEM,不含FBS。


请各位大神帮忙

我刚开始做转染,悬浮细胞,分别做过表达和敲减,看了很多文献,大都没有提及转染后是用转染的这同一批细胞同时做pcr,wb,cck8,凋亡,细胞周期;还是说这次转染只做pcr或wb,再转染一次做cck8或细胞周期。剩下的功能试验均同前,转染一次做一次?我养的是悬浮细胞,转染后做cck8这些功能试验前需要离心换液吗?跪谢解答!

求助:本人现在做细胞转染,具体实验包括转染目的基因后测MTT,凋亡,侵袭等水平差异,现在有个疑惑,如果MTT结果是促进增殖,那凋亡或侵袭结果的意义是否受其影响,比如同样数量细胞里这个组的凋亡少是否其侵袭能力就强,结果是凋亡少造成的还是有协同作用,如何避免干扰,还有转染后凋亡检测时间的选择,因为不是做的药物而是转染,应如何设置时间,78小时是否有意义?问的有点多,求大家耐心指导

腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒,目前因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。构建重组AAV(rAAV)涉及到用一个目的基因替换病毒基因组的大部分,然后将这个重组基因组包装到一个有感染性的病毒颗粒里。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。此方法的局限性包括(1) Ad辅助病毒污染rAAV,(2)rAAV的低产出,(3)生成有复制能力的AAV。在此我们描述了新的辅助质粒(pH3和pH5),排除了Ad共转染的需求。辅助质粒表达AAV的rep和cap基因和Ad E2A、VAI和E4基因。当辅助质粒在没有Ad感染的情况下共转染到人293细胞中,rAAV载体产量超过了pAAV/Ad包装质粒的80倍。另外,有复制能力的AAV在rAAV制备过程中少于0.00125%。此系统的主要优点是(1)无需感染性的腺病毒(2)只使用两个质粒就提高了转染效率和载体的产出。我们相信该双质粒转染系统因其简便性和高产出而使AAV载体系统能被更广泛地使用。该系统尤其将对多rAAV载体的临床前分析有用。