Trans-Hi™ is a superior transfection reagent capable to compete against the leading products on the market. It is based on a proprietary polymer technology. It forms stable nanoparticles with DNA and rapidly releases the DNA molecules upon endocytosis into the cytoplasm. It is a broad spectrum transfection regent offering superior and reproducible transfection efficiency on the common cells such as Hela, CHO, HEK293 and many hard-to-transfect mammalian cells with minimal toxicity. Trans-Hi™is very cost-efficient and 1.0mL is sufficient for over 660 transfections in 24 well plates.
Key Features for Trans-HiTM
- Excellent transfection for single DNA transfection or multi DNA co-transfection
- Rapid onset and long-lasting transfection
- Suitable for very long DNAs
- Simple and easy to use transfection procedure
- Robust and reproducible transfection
- High level of recombinant protein production
- Very cost efficient
- Long shelf-life: 12 months
Specifications:
| Product type: | In vitro cell transfection reagent | |
| Applications | Plasmid transfection, protein overexpression | |
| Technique: | Polymer-based DNA nanoparticles | |
| Cell type: | Established cell lines, primary cells, hard-to-transfect cellsAdherent cells and suspension cells | |
| Sample type: | Plasmid DNA | |
| Serum compatibility: | Yes | |
| Product size: | 0.5, 1.0 and 10x1.0 mL | |
| Number of transfections | Up to 660 in 24-well plates with 1.0mL reagentup to 330 transfections in 6-well plates | |
| Shelf-life: | 12 months or longer when store refrigerated (2-8°C) | |
| Shipping condition: | Room temperature |
Protocols
Trans-Hi™General Protocol For In Vitro Transfection in Mammalian Cells
Trans-Hi™ - Protocol for Transfecting 293 and CHO Suspension Cells
Trans-Hi™ - Protocol for Generation of rAAV
Trans-Hi™-Technical Tips For Good In Vitro Transfection
Comparison study ofIn vitro plasmid DNA transfection of Trans-HiTM and Lipofectamine®2000in HEK293T cells with GFP vector using the manufacture recommended reagent/DNA ratio of 3:1 (µL/µg) and 0.5µg DNA per wellused for both products in 24 well plate 30 hours post transfection.
Trans-Hi™/DNA ratio (µL/µg) (HEK293T)
Study of the transfection efficiency as a function of transfection reagent/DNA ratio indicating optimal tranfection efficiency achieved at Trans-Hi™/DNA ratio of 3:1 (µL/µg) (HEK293T cells in24 well plate 30 hours post transfection, 0.5ug DNA per well).
Head-to-head comparisonTrans-Hi™ against Lipofectamine 2000HEK293A cells with GFP vector (reagent/DNA ratio of 3:1(µL/µg, 0.5ug per well), 24 well plate 48 hours post transfection).
| Trans-Hi™ | Lipofectamine-2000 | |||||
| Time | Day 1 | Day 2 | Day 3 | Day 1 | Day 2 | Day 3 |
| HEK293A (%) | 79.5 | 93.4 | 93.3 | 75.7 | 89.4 | 50.6 |
Comparison study ofIn vitroplasmid DNA transfection of Trans-Hi™and Lipofectamine®2000in Hela cellswith GFP vector ((reagent/DNA ratio of 3:1(µL/µg, 0.5ug per well),24 well plate 48 hours post transfection).
Broad Transfection Spectrum for Mammalian Cell Types
Cell Lines | Efficiency (% GFP) |
COS-7 | 85 - 90% |
Hela | 85 - 90% |
HEK-293T | 85-90% |
NIH 3T3 | 75% |
A549 | 75% |
Hep3D | 65-75% |
SHEP | 65-70% |
CaCo2 | 60% |
HepG2 | 70% |
SKOV3 | 65% |
MCF-7 | 65-70% |
3T3-442A | 35-40% |
CHO | 80-90% |
FormuMax科学公司位于加利福尼亚州北部硅谷的中心地带，是一家专业的药品配送公司，致力于满足医药/生物技术、化妆品和保健工业的配方开发外包的日益增长的需求。经营理念是成为**的伙伴，作为药物交付的***，特别是在制定具有挑战性的化合物脂质体和其他新的纳米技术。FormuMax拥有一支技术团队，在药物递送领域拥有***的专业知识，特别关注脂质体和其他基于脂质的技术。它们目前提供基础研究，配方可行性，定制配方准备，配方表征和分析科学的合同服务。FormuMax是**家提供大量预成型脂质体试剂的在线商店。已经成功地为来自世界各地的大学实验室、研究中心和各种行业的客户提供了服务和/或产品。
FormuMax供应主要产品：
Clophosome-氯膦酸盐脂质体
FormuMax提供两种预埋有氯磷酸盐分子的中性脂质体产品，该产品单次静脉或腹腔注射后可在脾脏经巨噬细胞清除率可达80-90%，并具有高度活性、稳定的理化性质（长期冰箱存放后仍保持均一性及悬浮特性），粘滞度低使用简便，适用于静脉、腹腔、皮下、鼻腔、气管等多种方式给药。
Doxoves-盐酸多柔比星脂质体
FormuMax可提供脂质定制的盐酸多柔比星脂质体（定制内容为脂质成分及脂质体大小）。FormuMax提供的产品为Doxoves，具有高度的产品稳定性和一致性,紧密的粒径分布和高效的药物包埋效率（高达4.0mg/mL(40mMlipid)的包埋药物浓度）。Doxoves系列产品在产品特性、稳定性及药代动力学特性上可媲美商业产品Doxil。
DrugLoadedliposomes
FormuMax提供多款包埋活性药物的脂质体产品，包括DoxorubicinHCl（含2.0mg/mL及4.0mg/mL两种浓度），IrinotecanHCl(2.0mg/mL)，TopotecanHCl(2.0mg/mL)，产品线仍在持续更新中。
预制脂质体
FormuMax供应的预制脂质体产品囊括多种通用的脂质体类型，使用世界*的优质脂类原料。该系列产品易于使用，稳定性、可靠性及可重复性高，节省时间和成本，并可为研究人员提供定制脂质体服务。目前FormuMax提供聚乙二醇化/非聚乙二醇化的常用脂质体，以及含浓度梯度Ammonium的脂质体
阳离子脂质体
FormuMax供应一系列的阳离子脂质体，用于需带正电荷的脂质体或细胞转染质粒DNA、反义/干扰RNA等。
荧光脂质体
FormuMax供应预制荧光标记的脂质体，包括常规荧光脂质体、生物素化的荧光脂质体以及Avdinized化的荧光脂质体，另外还提供客户定制的荧光脂质体（脂类及染料可选）。
脂质体制备薄膜
FormuMax供应一系列不同规格的聚碳酸酯薄膜，用于脂质体挤出制备。
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我转的是7901、7901/DDP两种细胞，前者7901细胞很容易就转上，并且转后，状态良好，可是7901/DDP一转就死，我用的是吉玛慢病毒，转24小时后换液，刚开始一两天，没有异常，但后来细胞慢慢就死了，并且不是漂浮的，很多是贴着壁死，像是瓦解了一样
这是未转时细胞的样子
这是细胞转后，死亡的样子
并且即使是有些细胞未死，细胞后来也变得很脏，感觉有很破碎的细胞碎片
本人实验小白，**园子里大神指点，急，实在不知道怎么回事
细胞状态与密度；转染试剂的类型、用量；DNA的品质、用量；转染复合物的品质、作用细胞的时间长度。
GFP发出绿色荧光的原理是Ca离子进入GFP的beta-barrel结构中引起的特定能级，因此只要这个结构仍然保持着，就可以发出荧光。
由于GFP的beta-barrel结构非常稳定，一些版本的GFP蛋白（如EGFP）甚至能抵抗94C的高温几分钟而不完全变性，因此想在溶液状态下去掉GFP的荧光是很难的，一般需要用光漂白法。
基于其非常稳定的结构，即便细胞被固定了，仍然会有一部分的GFP蛋白保持其构象而发出荧光。此时荧光可能较弱。在荧光显微镜下是有可能看得到的。
DXY721认为：
悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大，主要差别在于转染后的筛选，当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。
其实转染的过程很简单，问题是能不能转的进去的，转染率能有多少，转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。
我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染，说明书上都有具体的操作过程，将脂质体和目的基因按比例混合，然后加到细胞悬液里就OK了，说的简单，实际上还是有一些细节要注意的，比如脂质体和目的基因混合的比例，转染的细胞数，细胞的代数，细胞的状态，有的还要求在转染的前一天传代一次，不过不要怕，这些在脂质体说明书上都有明确的说明，按照说明书做就可以了。
jinghuanlv认为：
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。
脂质体转染的原理基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作用，将目的基因导入细胞内，而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍，所以，脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。
我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法，目前为止，悬浮细胞转染的最好方法还是电转，我们实验室用的电转仪是Bio-Rad的，使用条件是电压250V，电容975uF，效果不错，不妨一用。
