DescriptionLiposomal formulations
Clodronate liposomes:
Artificial spheres consisting of concentric phospholipid bilayers encapsulating an aqueous PBS (phosphate buffered saline) solution containing clodronate. Liposomes are particles, sized at a max. of 3 micron. They form a suspension in PBS and will tend to precipitate upon storage, forming a pellet on the bottom of the tube or flask. The suspension should be shaken before administration to laboratory animals in order to recover the homogeneous suspension. The concentration of clodronate in the suspension is ca. 5 mg/ml.
Liposoma在开发脂质体配方方面有40多年的经验,主要生产氯膦酸脂质体、空白对照品脂质体和荧光标记脂质体,他们将知名脂质体学者的知识整合到了他们的脂质体技术中,创造了真正由磷脂囊泡组成的脂质体产品,而不是含有磷脂作为表面活性剂的乳剂,确保了活性物质被囊泡真正的包裹,而不是仅仅存在于脂质体之间(而且大部分在脂质体之外)。
Clodronateliposomes
氯膦酸脂质体C-005
由包裹含有氯膦酸盐的PBS(磷酸盐缓冲盐水)水溶液的同心磷脂双层组成的人工球体。脂质体是微粒,最大粒径为3微米。它们在PBS中形成悬浮液,储存时容易沉淀,在管或烧瓶底部形成颗粒。实验动物给药前应摇动混悬液,以恢复均匀的混悬液。
Liposoma常用产品报价单
产品名 | 货号 | 公司分类 | 商城分类 | 美金价 |
Liposoma(Clodronate Liposomes)/Liposomalformulations/150ml/CI-150-150 | CI-150-150 | | 脂质体 | 5196.59 |
CLODRONATELIPOSOMES&CONTROLLIPOSOMES(PBS) | CP-005-005 | | 细胞标记 | 323.91
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荧光蛋白
第一批用于细胞生物学的荧光蛋白包括藻胆蛋白(phycobiliproteins)和从蓝藻(cyanobacteria)中提取的触角光合色素(photosynthetic antenna pigments)。这些生物大分子都含有多种胆汁三烯生色基团(bilin chromophores)。这些生色基团都包裹在一种基质结构中,这样就能将它们的淬灭作用降至最小,因此这些藻胆蛋白的荧光亮度要比小分子荧光染料的亮度高出两个数量级。不过这些藻胆蛋白的“个头(分子量高达200KD)”也限制了它们在细胞内的扩散,因此,它们也只能与抗体联用,在流式细胞术试验或ELISA试验中用来检测细胞表面的蛋白质分子。
自从科学家从维多利亚发光水母(jellyfish Aequorea victoria)中发现了绿色荧光蛋白(GFP)之后,生物成像领域就发生了革命性的改变。单独表达绿色荧光蛋白或与其它蛋白融合表达就可以在细胞内发出绿色荧光了,使用这种方法除了需要氧气O2之外,不再需要任何其它的试剂参与,因为生色基团是通过自发环化作用形成的,需要对深埋在直径约2.4纳米至4纳米的β桶(beta barrel)核心里的三个氨基酸(丝氨酸-酪氨酸-氨基乙酸)进行氧化才能发出荧光。绿色荧光蛋白只是荧光蛋白大家族中的一员,这些荧光蛋白大部分都来自海洋腔肠动物,因为各自含有共价结构不同以及非共价环境不同的生色基团,所以可以发出不同颜色的荧光。在实验室中对这些荧光蛋白进行遗传修饰之后可以进一步的丰富它们的特性,比如增加亮度和折叠效率、减少寡聚体形成等。突变既可以增加荧光蛋白的光稳定性,还可以赋予荧光蛋白光操控性,比如控制荧光发射与否,或者发出哪种荧光。这种光操控性既可以是可逆的也可以是不可逆的,可以用于监测蛋白的弥散过程、运输过程和老化过程等。虽然荧光蛋白在生色基团形成的过程中会生成H2O2,但似乎没有产生太多的活性氧簇(ROS),这一点也并不奇怪,因为荧光蛋白在进化过程中都是暴露在阳光下的。不过我们也可以对荧光蛋白进行改造使其能够形成ROS。荧光蛋白发出的荧光一般对它们所处的生化环境都不太敏感,但是酸性环境或变性剂的存在可以淬灭荧光。不过现在我们已经有了经过改造的、能耐受酸性环境或者能对金属离子、卤化物离子和巯基二硫化物氧化还原剂起反应的荧光蛋白。展开
太浓了,有文献称Dapi用5ug/ml的就够了
是这个文献nanomedicine 2009;5:73-82
Karmali写的
请问各位老师,有没有简单的办法(转染技术除外),可以使一种活细胞带上荧光?请赐教啊!
(1)死/活细胞染色法 : 使用选择性死/活细胞染色的特殊染料如不易穿透活细胞膜的台盼兰、苯胺黑及用于活细胞着色的中性红、健那绿、亚甲蓝、甲苯胺蓝等,通过染色区分死活细胞并计数来间接判断细胞膜通透性的改变情况。该方法简单,方便,价廉;但灵敏度和精确性差。
(2)荧光标记法 : 使用二乙酸荧光素(FDP)、碘化丙啶(PI)或异硫氰酸荧光素钠标记的荧光染料与细胞共孵育,用流式细胞仪检测荧光染色阳性细胞的比率。此法其实是(1)法的“荧光”版,但其在灵敏性和准确性方面明显要优于后者。
(3)硝酸镧(La)示踪法: 在正常的生物组织中镧微粒可沉积于细胞间隙,但不能穿过具有1~ 2nm 微小间隙的细胞膜性结构(包括细胞膜和细胞器膜),也不能穿过细胞间的紧密连接。在膜性结构通透性增高时, 镧微粒则可进入细胞、细胞器和紧密连接内, 并在电镜下显示, 镧盐标记技术被认为是一种有效的监测细胞膜通透性变化的标记技术。
(4)LDH释放法: 在正常情况下,细胞内大分子物质LDH 是不能通过细胞膜的, 但在细胞膜受损伤而通透性增加时,可通过受损的细胞膜释放出来。LDH 能较好地反映细胞膜损伤程度。类似的还有检测细胞外K+的漏出率等。
请问各位用流式测定豚鼠哮喘模型支气管肺泡灌洗液中的中性粒细胞数目,计算其所占的比例,中性粒细胞用什么标记比较好?
可以用CCR3的抗体标记其他细胞,再反推中性粒细胞所占的比例吗?肺泡灌洗液中主要有嗜酸性粒细胞,淋巴细胞,中性粒细胞和巨噬细胞。
千万不是空白对照,而是isotype对照。
比如你用的CD1a-FITC(如果是鼠单抗IgG1,那对照抗体就要用相同物种的非特异性IgG1-FITC)。注意浓度要相同。一般提供抗体的公司BD,santa cruz等有提供的。其他就按照说明书的推荐浓度和孵育时间。
是的,每一种细胞几乎都有其特异性标志。先说人的吧:T细胞(CD3+CD19-)、B细胞(CD3-CD19+)、辅助T细胞(CD3+CD4+)、NK细胞(CD3-CD56+)、细胞毒性T细胞(CD3+CD8+CD28+)、DC细胞(CD80等)。。。小鼠某些免疫细胞和人分子编号相同,但功能有所差别,详见下述:B细胞 CD45R/B220(相应mAb为RA3- 6B2)是小鼠全B细胞最常用标记,也表达于活化T细胞、活化NK细胞和NK祖细胞。CD19是B细胞较特异的标记。2. T细胞 小鼠重要的T细胞标记有Thy- 1(CD90)和成熟T细胞标记CD3e。CD4和CD8可用于区别辅助性T细胞和杀伤性T细胞。CD161(NK1.1,又称Ly59和NKR- P1C)是小鼠第三群T细胞的标记,即NK1.1+T细胞,可有Th和Tc的性质。小鼠记忆T细胞标记有CD44、CD62L和CD45RB。活化T细胞标记有CD152(CTLA- 4)、CD154(gp39)、CD134(OX- 40)、CD95L、CD45R/B220以及Ly- 6E(TSA,Sca- 2)。3.NK细胞 小鼠最为常用的全NK标记是CD161,但此标记只表达在某些小鼠品系如C57BL/6、NZB、CE等,此外CD161在某些T细胞亚群中也有表达。小鼠CD56 mAb并不与小鼠NK细胞反应。最近报道有一新的mAb DX5可与所有品系NK细胞反应。此外,CD122(IL- 2Rb )、CD161a和Ly49家族(Klra,Killer cell lectin- like receptor)等标记也可用于NK的鉴定。4.Mf /Mo和DC细胞 抗Ly- 71 mAb F4/80广泛应用于小鼠组织中Mf 的分布和功能研究,此mAb与Eo、DC也有反应。小鼠CD14(rmC5- 3)在静止血Mo几乎测不到。其它MOMA- 1、MOMA- 2、Mac- 2、Mac- 3和巨噬细胞scavenger受体的mAbs也可应用于Mf /Mo的鉴定。Ly- 75(DEC- 205)抗原和CD11c是DC较限制的标记。其它用于DC有用的标记还有Ly- 79和Ly- 74(Ep- CAM,gp40)。
实验新手:小鼠外周血流式,T细胞用哪些标记啊,只需要标记一个CD4或者CD8吗?还是多标记?不是很懂。
CD11B: 单核细胞,巨噬细胞,中性粒细胞,NK细胞等
CD11C:树突细胞,单核细胞,巨噬细胞,中性粒细胞