
Description
Details
MapMarker® 1000 contains 23 discrete DNA fragments ranging in size from 50 to 1000 base pairs labeled with Tetramethylrhodamine at 16fmol/band/ul. The fragments are 50. 75, 100, 125, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 475, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 and 1000 base pairs.Unit Size:200ul (800 Loadings)
MapMarker® DNA sizing standards are sets of high quality fluorescently labeled DNA fragments designed to provide accurate base calling and precision sizing of samples with consistent intensities and migration patterns. They are compatible with the most commonly used fluorescent-based separation instruments systems, including capillary-based gel electrophoresis genetic analysis systems.
MapMarker® standards are stable for a minimum of 18 months when stored in the dark at 4°C.
If you require a different combination of bands you can create your own custom single-stranded fluorescent DNA sizing standard for your unique application using our MapMarker® design tool.
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Thy-1、c-kit散在分布于HB组织中,主要集中在汇管区,而正常肝脏组织中不表达;CD34及SCF在HB中的表达明显高于正常肝脏组织(P0.05),其中CD34主要在血管内皮系统中分布,SCF主要表达在汇管区;CD56表达于成簇的神经纤维组织中,在HB及正常肝脏组织中表达差异无统计学意义(P0.05)。结论不同干细胞相关表面标志物分布于HB组织中,并且集中表达在特定区域。表达Thy-1/c-kit阳性细胞可能对HB的发生起一定作用。
第一批用于细胞生物学的荧光蛋白包括藻胆蛋白(phycobiliproteins)和从蓝藻(cyanobacteria)中提取的触角光合色素(photosynthetic antenna pigments)。这些生物大分子都含有多种胆汁三烯生色基团(bilin chromophores)。这些生色基团都包裹在一种基质结构中,这样就能将它们的淬灭作用降至最小,因此这些藻胆蛋白的荧光亮度要比小分子荧光染料的亮度高出两个数量级。不过这些藻胆蛋白的“个头(分子量高达200KD)”也限制了它们在细胞内的扩散,因此,它们也只能与抗体联用,在流式细胞术试验或ELISA试验中用来检测细胞表面的蛋白质分子。
自从科学家从维多利亚发光水母(jellyfish Aequorea victoria)中发现了绿色荧光蛋白(GFP)之后,生物成像领域就发生了革命性的改变。单独表达绿色荧光蛋白或与其它蛋白融合表达就可以在细胞内发出绿色荧光了,使用这种方法除了需要氧气O2之外,不再需要任何其它的试剂参与,因为生色基团是通过自发环化作用形成的,需要对深埋在直径约2.4纳米至4纳米的β桶(beta barrel)核心里的三个氨基酸(丝氨酸-酪氨酸-氨基乙酸)进行氧化才能发出荧光。绿色荧光蛋白只是荧光蛋白大家族中的一员,这些荧光蛋白大部分都来自海洋腔肠动物,因为各自含有共价结构不同以及非共价环境不同的生色基团,所以可以发出不同颜色的荧光。在实验室中对这些荧光蛋白进行遗传修饰之后可以进一步的丰富它们的特性,比如增加亮度和折叠效率、减少寡聚体形成等。突变既可以增加荧光蛋白的光稳定性,还可以赋予荧光蛋白光操控性,比如控制荧光发射与否,或者发出哪种荧光。这种光操控性既可以是可逆的也可以是不可逆的,可以用于监测蛋白的弥散过程、运输过程和老化过程等。虽然荧光蛋白在生色基团形成的过程中会生成H2O2,但似乎没有产生太多的活性氧簇(ROS),这一点也并不奇怪,因为荧光蛋白在进化过程中都是暴露在阳光下的。不过我们也可以对荧光蛋白进行改造使其能够形成ROS。荧光蛋白发出的荧光一般对它们所处的生化环境都不太敏感,但是酸性环境或变性剂的存在可以淬灭荧光。不过现在我们已经有了经过改造的、能耐受酸性环境或者能对金属离子、卤化物离子和巯基二硫化物氧化还原剂起反应的荧光蛋白。展开
神经胶质细胞(neuroglia cell)简称神经胶质(neuroglia ),广泛分布于中枢和周围神经系统.普通染色只能显示胞核,用特殊银染方法才能显示神经胶质细胞整体形态.神经胶质细胞一般较神经细胞小,突起多而不规则,数量约为神经细胞的十倍.多分布在神经元胞体、突起以及中枢神经毛细血管的周围.神经胶质细胞具有支持.一营养、保护、髓鞘形成及绝缘,并有分裂增殖与再生修复等多种作用.
(-)中枢神经系统的神经胶质细胞
1.星形胶质细胞(astrocyte)是胶质细胞中最大的一种,胞体呈星形,核大呈圆形或椭圆形,染色较浅.胞质内有交织走行的神经胶质丝(neuroglial filament).由胞体伸出许多呈放射状走行的突起,部分突起末端膨大形成脚板(end foot),附着在毛细血管基膜上,或伸到脑和脊髓的表面形成胶质界膜(gliolimitan).星形胶质细胞约占全部胶质细胞的20%.星形
胶质细胞依其分布及结构又可分为两种.
(1)原浆性星形胶质细胞(protoplasmie astrocyte):分布于中枢神经系统的灰质内,位于神经细胞体及其突起的周围.原浆性星形胶质细胞的突起不规则,分支多而短曲,表面不光滑.胞质内的神经胶质丝少.
(2)纤维性星形胶质细胞(fibrous astrocyte):分布于白质内,位于神经纤维之间.其突起呈放射状,细长而直,分支少,表面光滑.胞质内有许多交织排列的原纤维,其超微结构是一种中间丝,称神经胶质丝,其内含有胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein GFAP),用免疫细胞化学染色技术能特异性地显示出这类细胞.
星形胶质细胞含有高浓度的K+,并能摄取某些神经递质(如γ-氨基丁酸).它通过调节细胞间隙的K+和神经递质浓度,来影响神经元的功能活动.因此,星形胶质细胞对维持神经细胞微环境的稳定和调节代谢过程起重要作用.当中枢神经系统损伤时,星形胶质细胞迅速分裂增殖,以形成胶质瘢痕形式进行修复.
(2)荧光标记法 : 使用二乙酸荧光素(FDP)、碘化丙啶(PI)或异硫氰酸荧光素钠标记的荧光染料与细胞共孵育,用流式细胞仪检测荧光染色阳性细胞的比率。此法其实是(1)法的“荧光”版,但其在灵敏性和准确性方面明显要优于后者。
(3)硝酸镧(La)示踪法: 在正常的生物组织中镧微粒可沉积于细胞间隙,但不能穿过具有1~ 2nm 微小间隙的细胞膜性结构(包括细胞膜和细胞器膜),也不能穿过细胞间的紧密连接。在膜性结构通透性增高时, 镧微粒则可进入细胞、细胞器和紧密连接内, 并在电镜下显示, 镧盐标记技术被认为是一种有效的监测细胞膜通透性变化的标记技术。
(4)LDH释放法: 在正常情况下,细胞内大分子物质LDH 是不能通过细胞膜的, 但在细胞膜受损伤而通透性增加时,可通过受损的细胞膜释放出来。LDH 能较好地反映细胞膜损伤程度。类似的还有检测细胞外K+的漏出率等。
当然也有几项研究成功地应用Gd3+复合物通过胞饮作用或细胞内吞作用进入细胞内而后行MRI 的报道。Modo 等应用右旋糖酐聚合物连接的Gd-DTPA 与若丹明颗粒(gadolinium rhodamine dextran,GRID )可同时提供MRI 和荧光组织显像,将之标记永生化小鼠神经干细胞MHP36 细胞后移植至脑缺血大鼠的海马后进行4.7 T MR 离体成像, 证实MRI 能可靠分辨移植细胞以及示踪细胞迁移。
另一类是通过葡聚糖生物高分子包裹Fe3O4 晶体形成核壳式结构的超顺磁性氧化铁(superpara-magnetic iron oxide,SPIO) 纳米材料对比剂, 主要产生较强的T2 负性对比效应。其特点是粒径小、穿透力强且弛豫率约为同样 564 国际医学放射学杂志International Journal of Medical Radiology 2009 Nov; 32(6) 条件下Gd3+的7~10 倍,在很低浓度(nmol)时即可在 MRI 上形成对比且具有生物可降解性,能被细胞代谢后进入正常血浆铁池与红细胞血红蛋白结合或用于其他代谢过程。
以上特点使氧化铁类对比剂更受关注,是目前较理想的磁共振示踪剂。近年来,间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)磁标记后MRI 示踪已成功应用于中枢神经系统和心脏等器官。Jendelova 等[21]将SPIO 和BrdU 双重标记的MSCs 经对侧脑半球局部移植入大鼠脑皮质损伤模型, 术后28 d 常规1.5 T MRI 显示MSCs 从注射点向对侧脑损伤区域迁移,脑损伤区域内见特异性低信号分布持续至术后50 d。
切片BrdU 免疫组化分析显示移植的MSCs 分化为神经元细胞,术后大鼠的神经功能改善,因此认为损伤组织可产生丰富的化学因子促使移植的MSCs 进行靶向迁移性修复。Kraitchman 等[22]利用Feridex 标记MSCs 经导管注入犬心肌梗死模型周边区域, 术后持续8 周,1.5 T MRI 明确观察到移植部位发出一条低信号线指向心肌梗死区域,心肌梗死面积逐渐减小。活体MRI 示踪磁标记MSCs 在骨关节领域也显示出重要的应用前景。
Mayer-Kuckuk 等应用与荧光基团结合的氧化铁粒子标记7F2 细胞和MC3T3-E1#4 细胞, 从股骨干骨骺端注射30 μL 含1×105 个磁标记细胞的磷酸盐缓冲液(PBS)至小鼠股骨髓腔,7 T MR 活体成像显示骨髓腔内见特异性低信号持续至术后第9 天,此后髓腔内信号增高,提示移植MSCs 在股骨髓腔内部分丢失。
居等应用磁性氧化铁纳米粒子和多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine, PLL) 的偶联物 Fe2O3-PLL , 有效地标记了人脐血间充质干细胞,成功地进行了磁共振标记细胞成像, 且对细胞的活力、凋亡等生物学特性无明显影响。
国内一些研究者进行的实验室结合前期间充质干细胞的磁标记工作,正在进行肝干细胞、神经干细胞的磁探针标记, 评价其对细胞活力增殖与凋亡代谢分化的影响,评价MRI 不同序列上不同浓度标记细胞的信号特点,并将标记后的肝干细胞进行正常及肝衰大鼠体内移植,神经干细胞标记后进行正常及大脑半球缺血大鼠体内移植,用MRI 动态示踪移植细胞分析移植细胞的生存状态,总结MRI 示踪干细胞的理论依据、技术方法及影像学表现特征,达到活体下追踪干细胞存活迁移的目的[24-27]。虽然MRI 示踪干细胞已经显示出了良好的应用前景,但磁标记会随着细胞分裂而稀释,在监测移植后干细胞的分化方面尚存在不足[28],有待进一步改进。
综上所述,有关干细胞标记和活体示踪方面的研究虽然取得了重要进展,但尚有许多问题需要解决,目前应用的各种标记示踪方法都有自己的优缺点, 但是随着科技的发展以及相关实验的不断深入,各种标记示踪方法目前存在的问题必定能够得到解决,其中尤其以MRI 活体示踪磁标记干细胞技术值得期待。利用无创伤性影像学技术活体示踪干细胞的研究将会取得重大突破。

