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RayBiotech/Human/Mouse/Rat AKT (S473) Cell-Based ELISA/1 Plate Kit/CBEL-AKT-1
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4000-520-616
Antigen Information
Accession Number:
- P31749
Gene ID:
- 207
Gene Symbols:
- AKT1
- PKB
- RAC
Protein Name & Synonyms:
RAC-alpha serine/threonine-protein kinase (EC 2.7.11.1) (Protein kinase B) (PKB) (Protein kinase B alpha) (PKB alpha) (Proto-oncogene c-Akt) (RAC-PK-alpha)
Assay Format
Pathway:
- Insulin Signaling
- mTOR Signaling
- PI3K-AKT Signaling
Specificity:
The antibodies provided in this kit recognizes human/mouse/rat AKT phosphorylated at Serine-473 and total AKT for comparison.
Number of Targets Detected:
1
Species Detected:
- Human
- Mouse
- Rat
Compatible Sample Types:
- Adherent Cell Culture
Design Principle:
- Cell-based
Method of Detection:
Colorimetric
Quantitative/Semi-Quantitative:
- Semi-Quantitative
Solid Support:
96-well Microplate
Product Specifications
Size:
1, 2, or 5 x 96-Well Microplate Kit
Product Features
- Site and signal pathway-specific
- In vitro detection of adherent cell culture
- No sample lysis is needed
- Compatible with a standard ELISA plate reader
- Faster results than with ELISA
- Adaptable for high-throughput screening and drug discovery
Application Notes
Kit Components
- uncoated 96-well Microplate
- Wash Buffer A
- Wash Buffer B
- Fixing Solution
- Quenching Buffer
- Blocking Buffer
- Anti-phospho antibody
- Anti-pan antibody
- HRP-Conjugated Secondary Antibody
- TMB One-Step Substrate
- Stop Solution
Other Materials Required
- Distilled or deionized water
- 100 ml and 1 liter graduated cylinders
- Tubes to prepare sample dilutions
- Protease and Phosphatase inhibitors
- Precision pipettes to deliver 2 µl to 1 ml volumes
- Adjustable 1-25 ml pipettes for reagent preparation
- Benchtop rocker or shaker
- Microplate reader capable of measuring absorbance at 450 nm
Protocol Outline
- Seed 10,000-30,000 cells into each well and incubate overnight.
- Apply various treatment, inhibitors or activators according to manufacture"s instructions.
- Add 100 µl of Fixing Solution into each well and incubate for 20 min at RT with shaking.
- Add 200 µl of prepared 1X Quenching Buffer and incubate 20 min at RT.
- Add 200 µl of Blocking Solution and incubate for 1 h at 37 °C.
- Add 50 µl of 1X anti-phospho-protein specific antibody or anti-pan-protein specific antibody to each well and incubate for 2 h at RT.
- Add 50 µl of prepared 1X HRP-Anti-Rabbit or Mouse IgG and incubate for 1 h at RT.
- Add 100 µl of TMB One-Step Substrate Reagent to each well.
- Incubate 30 min at RT.
- Add 50 µl of Stop Solution to each well.
- Read at 450 nm immediately.
Storage/Stability
The entire kit may be stored at -20°C for up to 6 months from the date of shipment. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
SUNY Stony Brook University06/12/2018, 11:23 AM
Manual
SDS
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公司简介
蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
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2017-05-22
在医学和生物学领域，在实验的过程中，经常需要在恒温下对实验对象进行振荡混匀操作。如果用人工的方法，既不好保证恒温，更不容易振荡混匀，为了解决这个难题，技术人员研发出恒温混匀仪，它可以在很短的时间内就达到实验要求的温度并且保持恒温，而且可以轻易的实现振荡混匀的操作，这在很大程度上加快了实验的速度，不但提高了工作效率，更重要的是实验的准确度大大的得到了提升。 查看更多
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2021-07-14
（一）6孔板接种和换液： 问：我的细胞传代很正常，但一种到六孔板里（不管加药和对照），总有两三个孔（随机）细胞长得不好，很小，像破碎了。有人遇到过这种情况吗？到底是啥原因呢？请各位指点 答：可能跟你加液的温度有关。如果你细胞刚刚拿出来换液加液，培养基也是从4度冰箱拿出来不久，很容易细胞就会冻死了。建议你最好把培养基先在培养箱里边孵育15mi 查看更多
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2021-07-17
KJMR-II型血液混匀器 查看更多
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2021-08-26
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2021-08-03
恒温混匀仪（制冷）JXH-200上海净信科技是由上海净信实业发展有限公司代理或销售的上海净信品牌的仪器，产品来源于上海。上海净信实业发展有限公司是中国最权威的恒温混匀仪（制冷）JXH-200上海净信科技销售服务商之一，在上海等地方销售恒温混匀仪（制冷）JXH-200上海净信科技已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业恒温混匀仪（制冷）JXH-200上海净信科技仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的恒温混匀仪（制冷）JXH-200上海净信科技产品 查看更多
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2017-10-30
东南科仪在发布的VELP CLASSIC漩涡混匀器供应信息，浏览与VELP CLASSIC漩涡混匀器相关的产品或在搜索更多与VELP CLASSIC漩涡混匀器相关的内容。 查看更多
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2017-12-28
山东巴罗克生物科技股份有限公司在发布的可调式漩涡混匀仪供应信息，浏览与可调式漩涡混匀仪相关的产品或在搜索更多与可调式漩涡混匀仪相关的内容。 查看更多
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2018-04-10
西安华辰乐天实验室设备有限公司在发布的德国IKA Vortex 3 天才3旋涡混匀器供应信息，浏览与德国IKA Vortex 3 天才3旋涡混匀器相关的产品或在搜索更多与德国IKA Vortex 3 天才3旋涡混匀器相关的内容。 查看更多
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山东巴罗克生物科技股份有限公司在发布的恒温振荡金属浴 加热 制冷 混匀供应信息，浏览与恒温振荡金属浴 加热 制冷 混匀相关的产品或在搜索更多与恒温振荡金属浴 加热 制冷 混匀相关的内容。 查看更多
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2021-08-02
珠海市茂亦生物科技有限公司在发布的恒温混匀仪供应信息，浏览与恒温混匀仪相关的产品或在搜索更多与恒温混匀仪相关的内容。 查看更多
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2021-07-16
血液混匀器特点、使用范围 查看更多
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2021-08-27
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如何快速鉴定转化子DNA 实验方法 123
root2021-07-22
首先说明，因为最近有人向我要，我以前也发过，好像是试剂配方不全，所以在此补发一个，望版主不要删了！多谢！
快速细胞破碎法鉴定转化子DNA（分离效果一般，二者要相差比较大才行，我常用前者，一般T载体上的要五百bp以上，一千bp以上最好！）
快速细胞破碎法鉴定转化子DNA
1、转化子菌落接种于相应的抗性培养基2.0ml，过夜培养。（要求设立对照！）
2、制备0.8%琼脂糖胶。
3、取1.5ml过夜培养物离心，15kr/min，1min；弃上清。（剩余保种！）
4、加水重悬，离心如上。留沉淀。
5、每管加50—100µl破碎细胞缓冲液(见后配方)，充分涡旋，使菌体悬浮均匀
6、水浴37℃，15min。
7、离心15kr/min，15min。
8、立即取20-30µl上清点样进行电泳，4—6V/cm。
9、电泳，当溴酚蓝到达凝胶板的2/3时，停止电泳。
10、染胶15—30min。
配方：50mMTris-HCl(pH6.8)；1%SDS；2mMEDTA；400mM蔗糖；0.01%溴酚兰
配法：1MTris-HCl(pH6.8),10ml;20%SDS,10ml;250mMEDTA,1.6ml;蔗糖27.2g;1.2%溴酚兰1.67ml加水至200ml;
煮沸法快速分析转化子DNA
1、挑单菌落于2.0ml相应抗生素液体培养基中，37℃振荡过夜（约16小时）。
2、取1.5ml过夜培养物于离心管中，15kr/min，1min。（剩余保种！）
3、弃上清，倒扣、流尽。
4、加入350µl由下列试剂组成溶液，混匀。
(8%蔗糖、0.5%TritonX-100、50mMEDTA(pH8.0)、10mMTris-HCl(pH8.0))
5、加入25µl新鲜配制的10mg/ml的溶菌酶（溶于10mMTris-HClpH8.0中），涡旋3--5sec。
6、立即将离心管浸入沸水浴40sec。
7、离心15kr/min，10min。
8、转移上清至另一离心管，加入2.5MNaAc40µl，加入异丙醇420µl，混匀后冰浴15min，沉淀DNA。
9、离心15kr/min，15min，将上层异丙醇弃去，真空抽干。
10、加入50µlTE缓冲液重悬，（含Rnase50µg/ml）。37℃保温10min。
11、取10µl样品点样，电泳，染胶。观察质粒DNA的区带位置。（要求有对照电泳！）
快速细胞破碎法鉴定转化子DNA（分离效果一般，二者要相差比较大才行，我常用前者，一般T载体上的要五百bp以上，一千bp以上最好！）
快速细胞破碎法鉴定转化子DNA
1、转化子菌落接种于相应的抗性培养基2.0ml，过夜培养。（要求设立对照！）
2、制备0.8%琼脂糖胶。
3、取1.5ml过夜培养物离心，15kr/min，1min；弃上清。（剩余保种！）
4、加水重悬，离心如上。留沉淀。
5、每管加50—100µl破碎细胞缓冲液(见后配方)，充分涡旋，使菌体悬浮均匀
6、水浴37℃，15min。
7、离心15kr/min，15min。
8、立即取20-30µl上清点样进行电泳，4—6V/cm。
9、电泳，当溴酚蓝到达凝胶板的2/3时，停止电泳。
10、染胶15—30min。
配方：50mMTris-HCl(pH6.8)；1%SDS；2mMEDTA；400mM蔗糖；0.01%溴酚兰
配法：1MTris-HCl(pH6.8),10ml;20%SDS,10ml;250mMEDTA,1.6ml;蔗糖27.2g;1.2%溴酚兰1.67ml加水至200ml;
煮沸法快速分析转化子DNA
1、挑单菌落于2.0ml相应抗生素液体培养基中，37℃振荡过夜（约16小时）。
2、取1.5ml过夜培养物于离心管中，15kr/min，1min。（剩余保种！）
3、弃上清，倒扣、流尽。
4、加入350µl由下列试剂组成溶液，混匀。
(8%蔗糖、0.5%TritonX-100、50mMEDTA(pH8.0)、10mMTris-HCl(pH8.0))
5、加入25µl新鲜配制的10mg/ml的溶菌酶（溶于10mMTris-HClpH8.0中），涡旋3--5sec。
6、立即将离心管浸入沸水浴40sec。
7、离心15kr/min，10min。
8、转移上清至另一离心管，加入2.5MNaAc40µl，加入异丙醇420µl，混匀后冰浴15min，沉淀DNA。
9、离心15kr/min，15min，将上层异丙醇弃去，真空抽干。
10、加入50µlTE缓冲液重悬，（含Rnase50µg/ml）。37℃保温10min。
11、取10µl样品点样，电泳，染胶。观察质粒DNA的区带位置。（要求有对照电泳！）
求快速破碎大量大肠杆菌的方法 微生物 学术 科研...123
hxwyq2021-07-24
我想用大肠杆菌来表达一种磷脂酶，目前我用的方法是先加溶菌酶和保护剂，15－20min后，再用超声波1min，可是跑出的带很不清晰，看上去就是一片蓝而已，好像是有所降解吧。不知是哪里做的不好了
真菌细胞壁的破碎方法 免疫学讨论版论坛123
zhangzaiguozyf2021-07-23
大家好，有谁知道真菌细胞壁的破碎方法，各种试剂的使用浓度，越详细越好，谢谢
处方分析全123
选择性失忆19922017-09-30
硼酸和石蜡研磨能充分混匀吗
请教天然橡胶的使用工艺及注意事项乳胶技术橡胶技术网123
swlrsis82017-09-30
一种碎胶机破碎系统，包括底座、转刀、固定刀、筛孔刀，所述底座前后面设有平板，平板上设置有旋转轴，转刀固定在旋转轴上，所述底座的内端面左右两侧设有固定刀，固定刀的刃部面向旋转轴，所述筛孔刀安装在底座下部，筛孔刀位于旋转轴的正下方。通过设置转刀、固定刀和筛孔刀，三刀同时工作，胶块受到三重切割，可有效快捷的将大胶块破碎并且得到预定规格胶粒的颗粒更加均匀，降低了功耗，提高了工作效率，同时设置有液压缸控制筛孔刀的抽出和复位，打开门时便于对检修刀具及对内部进行清洁，不仅结构简单、操作维护也更加方便，且经济实用。
【求助】酵母表达——玻璃珠振荡破碎细胞问题 经验共享 分析...123
beerni2008-06-10
在酵母表达表达时遇到问题：
1.少量表达时用玻璃珠振荡的方法破碎细胞，跑胶时蛋白量总是很低，有什么好的方法进行少量酵母细胞的破碎吗？
2.好像有一种试剂加到玻璃珠振荡破碎的酵母细胞样品中来镜鉴细胞是否破碎的，是什么试剂啊？
多谢指点！
1.少量表达时用玻璃珠振荡的方法破碎细胞，跑胶时蛋白量总是很低，有什么好的方法进行少量酵母细胞的破碎吗？
2.好像有一种试剂加到玻璃珠振荡破碎的酵母细胞样品中来镜鉴细胞是否破碎的，是什么试剂啊？
多谢指点！
冻融法破碎细胞的冻融时间与破碎程度有无关联 细胞技术讨论版...123
sun212021-07-20
想问一下，一般破碎细胞冻融时间要多久，几次。冻融时间与次数与细胞破碎程度有关吗？因为我们这一般都是十二小时一次，共三次。但因为我必须一天完成，所以我第一次三小时，化一小时，第二次二小时，化半小时，第三次冻只有一小时。我不知这样破碎是否完全。
另外还想问一下，还有其他可行的破碎方法吗
谢谢
另外还想问一下，还有其他可行的破碎方法吗
谢谢
【求助】关于用超声波破碎细胞的问题 经验共享 分析测试百科 123
血刺潇潇w椦2017-09-30
对细胞破碎后获得的生物大分子的电泳方法大都采用凝胶电泳。如果要分析核酸等大的DNA或者RNA分子通常利用琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳；如果是分析蛋白质，则通常在加入十二烷基硫酸钠的聚丙烯酰胺凝胶中进行。
以DNA凝胶电泳为例，电泳的操作步骤如下：
1、安装电泳槽
将有机玻璃的电泳凝胶床洗净，晾干，用胶带将两端的开口封好，放在水平的工作台上，插上样品梳。
2、琼脂糖凝胶的制备
称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中，（按0.3-1.5%的琼脂糖含量，1-25kb大小的DNA用1%的凝胶，20-100kb的DNA用0.5%的凝胶，200-2000bp的DNA用1.5%的凝胶）置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化（不要加热至沸腾），取出摇匀。
3、灌胶
将冷却到60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上。
4、待琼脂糖胶凝固后，在电泳槽内加入电泳缓冲液，然后拔出梳子。
5、加样
将DNA样品（DNA样品是细胞破碎之后用离心管离心沉淀获得的）与加样缓冲液按4：1混匀后，用微量移液器将混合液加到样品槽中，每槽加10-20μl，记录样品的点样次序和加样量。
6、电泳
安装好电极导线，点样孔一端接负极，另一端接正极，打开电源，调电压至3-5V/cm，电泳1-3hr，当溴酚蓝移到距凝胶前沿1-2cm时，停止电泳。
7、染色和观察
取出凝胶，放在含有溴化乙锭的染色液中染色30min，即可在254nm的紫外灯下观察，有橙红色荧光条带的位置，即为DNA条带，或在紫外灯下照相记录电泳图谱。溴化乙锭是致癌剂，操作时要小心，必须戴手套。
扩展知识：
在外加直流电源的作用下，胶体微粒在分散介质里向阴极或阳极作定向移动，这种现象叫做电泳。利用电泳现象使物质分离，这种技术也叫做电泳。
凝胶电泳通常用于分析用途，但也可以作为制备技术，在采用某些方法（如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹）检测之前部分提纯分子。
琼脂糖 ( Agarose ) 是一种线性多糖聚合物 , 系从红色海藻产物琼脂中提取而来的。当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的 电泳介 质 , 其密 度是由 琼脂 糖的浓 度决 定的。经过化学修饰的低熔点 (LMP) 的琼脂糖 , 在结构上比较脆弱 , 因此在较低的温度下便会熔化 , 可用于DNA片段的制备电泳。
聚丙烯酰胺凝胶主要有两种方式 : 一是用于分离和纯化双链DNA片段的非变性聚丙烯酰胺凝胶。在未变凝胶中分离 DNA的缺点是DNA的迁移 率受碱 基组成和序列的影响。由于无法得知未知DNA的迁移是否反常 , 故不能用未变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳确定双链DNA的大小。二是用于分离及纯化单链DNA片 段的变性聚丙烯 酰胺凝 胶。这类聚丙烯酰胺凝胶是在核苷酸碱基配对抑制剂 ( 尿素或甲酰胺 ) 的存在下聚合而成 , 变性DNA的移动速度同其碱基组成及序列几乎完全无关 , 故可用于分离及纯化单链DNA片段和DNA测序等。
以DNA凝胶电泳为例，电泳的操作步骤如下：
1、安装电泳槽
将有机玻璃的电泳凝胶床洗净，晾干，用胶带将两端的开口封好，放在水平的工作台上，插上样品梳。
2、琼脂糖凝胶的制备
称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中，（按0.3-1.5%的琼脂糖含量，1-25kb大小的DNA用1%的凝胶，20-100kb的DNA用0.5%的凝胶，200-2000bp的DNA用1.5%的凝胶）置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化（不要加热至沸腾），取出摇匀。
3、灌胶
将冷却到60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上。
4、待琼脂糖胶凝固后，在电泳槽内加入电泳缓冲液，然后拔出梳子。
5、加样
将DNA样品（DNA样品是细胞破碎之后用离心管离心沉淀获得的）与加样缓冲液按4：1混匀后，用微量移液器将混合液加到样品槽中，每槽加10-20μl，记录样品的点样次序和加样量。
6、电泳
安装好电极导线，点样孔一端接负极，另一端接正极，打开电源，调电压至3-5V/cm，电泳1-3hr，当溴酚蓝移到距凝胶前沿1-2cm时，停止电泳。
7、染色和观察
取出凝胶，放在含有溴化乙锭的染色液中染色30min，即可在254nm的紫外灯下观察，有橙红色荧光条带的位置，即为DNA条带，或在紫外灯下照相记录电泳图谱。溴化乙锭是致癌剂，操作时要小心，必须戴手套。
扩展知识：
在外加直流电源的作用下，胶体微粒在分散介质里向阴极或阳极作定向移动，这种现象叫做电泳。利用电泳现象使物质分离，这种技术也叫做电泳。
凝胶电泳通常用于分析用途，但也可以作为制备技术，在采用某些方法（如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹）检测之前部分提纯分子。
琼脂糖 ( Agarose ) 是一种线性多糖聚合物 , 系从红色海藻产物琼脂中提取而来的。当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的 电泳介 质 , 其密 度是由 琼脂 糖的浓 度决 定的。经过化学修饰的低熔点 (LMP) 的琼脂糖 , 在结构上比较脆弱 , 因此在较低的温度下便会熔化 , 可用于DNA片段的制备电泳。
聚丙烯酰胺凝胶主要有两种方式 : 一是用于分离和纯化双链DNA片段的非变性聚丙烯酰胺凝胶。在未变凝胶中分离 DNA的缺点是DNA的迁移 率受碱 基组成和序列的影响。由于无法得知未知DNA的迁移是否反常 , 故不能用未变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳确定双链DNA的大小。二是用于分离及纯化单链DNA片 段的变性聚丙烯 酰胺凝 胶。这类聚丙烯酰胺凝胶是在核苷酸碱基配对抑制剂 ( 尿素或甲酰胺 ) 的存在下聚合而成 , 变性DNA的移动速度同其碱基组成及序列几乎完全无关 , 故可用于分离及纯化单链DNA片段和DNA测序等。
[求助] 溶菌酶破碎大肠杆菌 生物科学 学术科研互动社区123
badigo2008-12-04
我打算做蛋白提取，以前单纯用超声效果不好，为了尽量保留活性，选择用溶菌酶见超声破碎的方法。
我按照分子克隆上的步骤：
1.菌体称重为0.4g，加PBSbuffer3ml（PH=8.05），充分混匀。
2.加现配的50mg/ml溶菌酶溶液240微升，至终浓度4mg/ml。冰置3小时。
3.超声400w，10s，10s，40次，结果目测还是乳白色，镜检很多菌体。
为什么破不开，搞不懂，我前几天做预实验的时候，还能变澄清？？？
注：预实验的步骤与现在的一样，只是菌体重量是0.1g加PBS3ml，再加溶菌酶至1mg/ml，超声400w，10s,10s,20次。
麻烦大家能给以帮助，先谢谢了...
我按照分子克隆上的步骤：
1.菌体称重为0.4g，加PBSbuffer3ml（PH=8.05），充分混匀。
2.加现配的50mg/ml溶菌酶溶液240微升，至终浓度4mg/ml。冰置3小时。
3.超声400w，10s，10s，40次，结果目测还是乳白色，镜检很多菌体。
为什么破不开，搞不懂，我前几天做预实验的时候，还能变澄清？？？
注：预实验的步骤与现在的一样，只是菌体重量是0.1g加PBS3ml，再加溶菌酶至1mg/ml，超声400w，10s,10s,20次。
麻烦大家能给以帮助，先谢谢了...
如何除去破碎后的细胞中的生物大分子123
油条c222017-09-30
对细胞破碎后获得的生物大分子的电泳方法大都采用凝胶电泳。如果要分析核酸等大的DNA或者RNA分子通常利用琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳；如果是分析蛋白质，则通常在加入十二烷基硫酸钠的聚丙烯酰胺凝胶中进行。以DNA凝胶电泳为例，电泳的操作步骤如下：
1、安装电泳槽
将有机玻璃的电泳凝胶床洗净，晾干，用胶带将两端的开口封好，放在水平的工作台上，插上样品梳。
2、琼脂糖凝胶的制备
称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中，（按0.3-1.5%的琼脂糖含量，1-25kb大小的DNA用1%的凝胶，20-100kb的DNA用0.5%的凝胶，200-2000bp的DNA用1.5%的凝胶）置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化（不要加热至沸腾），取出摇匀。
3、灌胶
将冷却到60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上。
4、待琼脂糖胶凝固后，在电泳槽内加入电泳缓冲液，然后拔出梳子。
5、加样
将DNA样品（DNA样品是细胞破碎之后用离心管离心沉淀获得的）与加样缓冲液按4：1混匀后，用微量移液器将混合液加到样品槽中，每槽加10-20μl，记录样品的点样次序和加样量。
6、电泳
安装好电极导线，点样孔一端接负极，另一端接正极，打开电源，调电压至3-5V/cm，电泳1-3hr，当溴酚蓝移到距凝胶前沿1-2cm时，停止电泳。
7、染色和观察
取出凝胶，放在含有溴化乙锭的染色液中染色30min，即可在254nm的紫外灯下观察，有橙红色荧光条带的位置，即为DNA条带，或在紫外灯下照相记录电泳图谱。溴化乙锭是致癌剂，操作时要小心，必须戴手套。
1、安装电泳槽
将有机玻璃的电泳凝胶床洗净，晾干，用胶带将两端的开口封好，放在水平的工作台上，插上样品梳。
2、琼脂糖凝胶的制备
称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中，（按0.3-1.5%的琼脂糖含量，1-25kb大小的DNA用1%的凝胶，20-100kb的DNA用0.5%的凝胶，200-2000bp的DNA用1.5%的凝胶）置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化（不要加热至沸腾），取出摇匀。
3、灌胶
将冷却到60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上。
4、待琼脂糖胶凝固后，在电泳槽内加入电泳缓冲液，然后拔出梳子。
5、加样
将DNA样品（DNA样品是细胞破碎之后用离心管离心沉淀获得的）与加样缓冲液按4：1混匀后，用微量移液器将混合液加到样品槽中，每槽加10-20μl，记录样品的点样次序和加样量。
6、电泳
安装好电极导线，点样孔一端接负极，另一端接正极，打开电源，调电压至3-5V/cm，电泳1-3hr，当溴酚蓝移到距凝胶前沿1-2cm时，停止电泳。
7、染色和观察
取出凝胶，放在含有溴化乙锭的染色液中染色30min，即可在254nm的紫外灯下观察，有橙红色荧光条带的位置，即为DNA条带，或在紫外灯下照相记录电泳图谱。溴化乙锭是致癌剂，操作时要小心，必须戴手套。
【求助】如何利用超声波破碎来提高卵黄抗体回收率_问答详情_破碎混...123
烟袋巷100号2007-08-10
最近在用水稀释法加硫酸铵做卵黄抗体的初步纯化，在水稀释这步担心由于颗粒物质没有和水溶液充分混合，导致卵黄抗体回收率降低，于是将第一次水稀释后得到的上清进行离心后，又将沉淀用水重悬混合，用相同的方法再来考察是否有残留的卵黄抗体，从SDS-PAGE中可以发现，沉淀中是有残留的，而且量还不算少，于是我考虑在卵黄加入水稀释后，用超声波来混匀，使卵黄里面的颗粒物质更均匀更充分的释放在水溶液里，我的问题是应该采取怎么样的一个程序呢，即不影响我的蛋白活性也能更好的提高回收率？
大家请赐教！
大家请赐教！
货物学试题(2)123
找不回的岁月2017-09-30
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