求助：超声波破碎的技术资料

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求助：超声波破碎的技术资料

2004-10-19

问题描述：

我最近做超声波破碎大肠杆菌，但是一直效果都不好，看了一些帖子，但是还是没弄明白。请问：裂解缓冲液需要加多少（？ml/g菌）？超声波作用的时间一般是多少（有人说半小时，有人说10分钟以内）？破碎后菌液是什么状态的？会变澄清吗？如果一次做60ml菌液（置于100ml离心管中），需要注意什么呢？

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yanfangjp

用户

我做的时候,缓冲液一般为菌体的3倍,作用时间得看破碎效果如何.破碎后的菌液状态是透明的.你如果做60ml菌液的话,先离心再加入10-15ml的裂解液,然后放入50ml离心管中,注意固定后一定要在离心管外加一个带冰块的烧杯,进行冰浴,防止温度过高.

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celery_hu

用户

我做的是200ml菌液，离心后加了20ml缓冲液，超声波间隔破碎了近一个小时菌液都还是浑浊的，能不能告知是什么原因啊？谢谢先

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jiangjack

用户

我的条件是100ml菌液离心，用8ml缓冲液悬浮，加8mg溶菌酶，冰浴30min，然后超声处理：750W40％功率5秒超声，9秒间隔超声至少90min。超声完毕后，菌液应该是澄清的，略显油状。

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persistent

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怎么个澄清法？是透明，还是液体是匀质的，不像超声前那么粘稠？我今天10s15s30times，一共做了三次，每次间隔5min

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sunlei1123

用户

可以通过测A600处的光吸收判断是否破碎完全，光吸收值在下降，同时可以发现菌液变澄清。我做过5%浓度的菌悬液，体积50ml，用400W破碎半小时后光吸收值仍在下降，但目的蛋白已释放完全释放。

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fnhteiaqg

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我大罐发酵大肠杆菌，一般150g湿菌加PBS悬浮到800到1000ml，1200W破菌150min，黏度下降，离心未见有白色菌体即可。

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ecor

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离心不见白色菌体是什么意思？那沉淀是什么样子的？全部是黑色吗？你是不是做包涵体？破菌150MIN是连续的吗？最后菌液的黏度怎么样？

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propeg

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我做的是20ml缓冲液/g菌体。条件是15s/15s30周期。破碎后的菌液在外观形态上与破碎前没有太大差别，可能是我的菌浓度起初就不高的原因吧。不过我还真没有注意过澄清度的变化。可以做镜检看看破碎前后的状况。发个图你看：破碎前：

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propeg

用户

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Aton

用户

ecor离心不见白色菌体是什么意思？那沉淀是什么样子的？全部是黑色吗？最后菌液的黏度怎么样？中高速离心看沉淀多少自认为是最方便的检测超声破碎程度的方法（我一般用6,000g10min,比一般离心收集菌体的转速高一点）。沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体，它原来该是什么颜色还是什么颜色:)黑色沉淀最可能是变性的蛋白！说明你的超声条件太剧烈了！菌液粘度是细菌染色体造成的，它被超声打断后菌液自然不粘了而且透清！

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AromasRen

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书上说匀浆之后要拿一点镜检，看看细胞的破碎程度，有战友做过吗？我试着看了一下，老实说，没看出什么明堂，所以改为考察了一下匀浆时间和蛋白浓度的关系了。望做过镜检的战友介绍一下该如何操作，怎样染色，怎样制片，要注意些什么？谢谢！

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jiangjack

用户

persistent怎么个澄清法？是透明，还是液体是匀质的，不像超声前那么粘稠？我今天10s15s30times，一共做了三次，每次间隔5min澄清的，为淡黄色的均质溶液。如果超声时间较短的话，溶液会略有混浊。不过我没有做过吸光度检测和镜检。

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francstone

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超声破碎最好不要用离心管，因为超声的时候会产生热量的，塑料管壁不易散热，最好用玻璃烧杯；还有破碎的时候不要把菌体放置不动，一般超个几十次就要把菌液拿出来晃一晃，一是散热，、二是可以将菌体混匀。

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propeg

用户

franCSTone超声破碎最好不要用离心管，因为超声的时候会产生热量的，塑料管壁不易散热，最好用玻璃烧杯；还有破碎的时候不要把菌体放置不动，一般超个几十次就要把菌液拿出来晃一晃，一是散热，、二是可以将菌体混匀。冰浴即可!同意francstone的看法:塑料材质的离心管较玻璃散热慢,使用玻璃器皿时候要注意,探头千万不要接触玻璃内壁.很可能会将玻璃振碎.

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zshjoshua

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超声后的溶液也并不是越清越好,如果溶液从粘稠状变得比较稀,那说明超声效果不错

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stickyrice

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确实目前对超声裂解的意见不太统一，但有一点需要注意大量菌液还是加溶菌酶效果比较好，另外需注意散热。以免使蛋白变性！！！

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xy12580

用户

有收获学习了··········