
- Hito Hematoxylin Solution - Single Strength - Recommended for cytological staining.
- Hito Hematoxylin Solution - Double Strength - Recommended for counterstaining of immunohistochemistry and rou
- Description
Details
H&E staining orhematoxylin & eosin staining, is a popularstainingmethod inhistology. It is the most widely used stain in medical diagnosis and research.Hito Hematoxylin Solution is designed on the principle of the Gill’s Hematoxylin method and in three ready-to-use formulation.
- Hito Hematoxylin Solution - Single Strength -Recommended for cytological staining.
- Hito Hematoxylin Solution - Double Strength -Recommended for counterstaining of immunohistochemistry and routine Histology.
- Hito Hematoxylin Solution - Triple Strength -Recommended for histological staining of nuclei with shorter staining times.
Eosin Y is the most commonly used cytoplasmic stain, but Alcoholic Eosin Solutions are HIGHLY FLAMMABLE and HARMFUL, Hito Eosin-Y Aqueous Solution is a water base solution for fast and safe usage. Hito HE-Diff™Solution is water based and used for Hematoxylin staining differentiation.The tap water in the traditional method is replaced by Hito modified Scott"s Tap Water Substitut, which enables bluing up in a much shorter time and avoids tissue sections falling off from the slides.
250 ml
Hito HE-Diff™ Solution Manual and MSDS
- Additional Information
Additional Information
SKU HTSHS0113 - Reviews
ebiomall.com






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快速细胞破碎法鉴定转化子DNA(分离效果一般,二者要相差比较大才行,我常用前者,一般T载体上的要五百bp以上,一千bp以上最好!)
快速细胞破碎法鉴定转化子DNA
1、转化子菌落接种于相应的抗性培养基2.0ml,过夜培养。(要求设立对照!)
2、制备0.8%琼脂糖胶。
3、取1.5ml过夜培养物离心,15kr/min,1min;弃上清。(剩余保种!)
4、加水重悬,离心如上。留沉淀。
5、每管加50—100µl破碎细胞缓冲液(见后配方),充分涡旋,使菌体悬浮均匀
6、水浴37℃,15min。
7、离心15kr/min,15min。
8、立即取20-30µl上清点样进行电泳,4—6V/cm。
9、电泳,当溴酚蓝到达凝胶板的2/3时,停止电泳。
10、染胶15—30min。
配方:50mMTris-HCl(pH6.8);1%SDS;2mMEDTA;400mM蔗糖;0.01%溴酚兰
配法:1MTris-HCl(pH6.8),10ml;20%SDS,10ml;250mMEDTA,1.6ml;蔗糖27.2g;1.2%溴酚兰1.67ml加水至200ml;
煮沸法快速分析转化子DNA
1、挑单菌落于2.0ml相应抗生素液体培养基中,37℃振荡过夜(约16小时)。
2、取1.5ml过夜培养物于离心管中,15kr/min,1min。(剩余保种!)
3、弃上清,倒扣、流尽。
4、加入350µl由下列试剂组成溶液,混匀。
(8%蔗糖、0.5%TritonX-100、50mMEDTA(pH8.0)、10mMTris-HCl(pH8.0))
5、加入25µl新鲜配制的10mg/ml的溶菌酶(溶于10mMTris-HClpH8.0中),涡旋3--5sec。
6、立即将离心管浸入沸水浴40sec。
7、离心15kr/min,10min。
8、转移上清至另一离心管,加入2.5MNaAc40µl,加入异丙醇420µl,混匀后冰浴15min,沉淀DNA。
9、离心15kr/min,15min,将上层异丙醇弃去,真空抽干。
10、加入50µlTE缓冲液重悬,(含Rnase50µg/ml)。37℃保温10min。
11、取10µl样品点样,电泳,染胶。观察质粒DNA的区带位置。(要求有对照电泳!)
1.少量表达时用玻璃珠振荡的方法破碎细胞,跑胶时蛋白量总是很低,有什么好的方法进行少量酵母细胞的破碎吗?
2.好像有一种试剂加到玻璃珠振荡破碎的酵母细胞样品中来镜鉴细胞是否破碎的,是什么试剂啊?
多谢指点!
另外还想问一下,还有其他可行的破碎方法吗
谢谢
以DNA凝胶电泳为例,电泳的操作步骤如下:
1、安装电泳槽
将有机玻璃的电泳凝胶床洗净,晾干,用胶带将两端的开口封好,放在水平的工作台上,插上样品梳。
2、琼脂糖凝胶的制备
称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中,(按0.3-1.5%的琼脂糖含量,1-25kb大小的DNA用1%的凝胶,20-100kb的DNA用0.5%的凝胶,200-2000bp的DNA用1.5%的凝胶)置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化(不要加热至沸腾),取出摇匀。
3、灌胶
将冷却到60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上。
4、待琼脂糖胶凝固后,在电泳槽内加入电泳缓冲液,然后拔出梳子。
5、加样
将DNA样品(DNA样品是细胞破碎之后用离心管离心沉淀获得的)与加样缓冲液按4:1混匀后,用微量移液器将混合液加到样品槽中,每槽加10-20μl,记录样品的点样次序和加样量。
6、电泳
安装好电极导线,点样孔一端接负极,另一端接正极,打开电源,调电压至3-5V/cm,电泳1-3hr,当溴酚蓝移到距凝胶前沿1-2cm时,停止电泳。
7、染色和观察
取出凝胶,放在含有溴化乙锭的染色液中染色30min,即可在254nm的紫外灯下观察,有橙红色荧光条带的位置,即为DNA条带,或在紫外灯下照相记录电泳图谱。溴化乙锭是致癌剂,操作时要小心,必须戴手套。
扩展知识:
在外加直流电源的作用下,胶体微粒在分散介质里向阴极或阳极作定向移动,这种现象叫做电泳。利用电泳现象使物质分离,这种技术也叫做电泳。
凝胶电泳通常用于分析用途,但也可以作为制备技术,在采用某些方法(如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹)检测之前部分提纯分子。
琼脂糖 ( Agarose ) 是一种线性多糖聚合物 , 系从红色海藻产物琼脂中提取而来的。当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的 电泳介 质 , 其密 度是由 琼脂 糖的浓 度决 定的。经过化学修饰的低熔点 (LMP) 的琼脂糖 , 在结构上比较脆弱 , 因此在较低的温度下便会熔化 , 可用于DNA片段的制备电泳。
聚丙烯酰胺凝胶主要有两种方式 : 一是用于分离和纯化双链DNA片段的非变性聚丙烯酰胺凝胶。在未变凝胶中分离 DNA的缺点是DNA的迁移 率受碱 基组成和序列的影响。由于无法得知未知DNA的迁移是否反常 , 故不能用未变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳确定双链DNA的大小。二是用于分离及纯化单链DNA片 段的变性聚丙烯 酰胺凝 胶。这类聚丙烯酰胺凝胶是在核苷酸碱基配对抑制剂 ( 尿素或甲酰胺 ) 的存在下聚合而成 , 变性DNA的移动速度同其碱基组成及序列几乎完全无关 , 故可用于分离及纯化单链DNA片段和DNA测序等。
我按照分子克隆上的步骤:
1.菌体称重为0.4g,加PBSbuffer3ml(PH=8.05),充分混匀。
2.加现配的50mg/ml溶菌酶溶液240微升,至终浓度4mg/ml。冰置3小时。
3.超声400w,10s,10s,40次,结果目测还是乳白色,镜检很多菌体。
为什么破不开,搞不懂,我前几天做预实验的时候,还能变澄清???
注:预实验的步骤与现在的一样,只是菌体重量是0.1g加PBS3ml,再加溶菌酶至1mg/ml,超声400w,10s,10s,20次。
麻烦大家能给以帮助,先谢谢了...
1、安装电泳槽
将有机玻璃的电泳凝胶床洗净,晾干,用胶带将两端的开口封好,放在水平的工作台上,插上样品梳。
2、琼脂糖凝胶的制备
称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中,(按0.3-1.5%的琼脂糖含量,1-25kb大小的DNA用1%的凝胶,20-100kb的DNA用0.5%的凝胶,200-2000bp的DNA用1.5%的凝胶)置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化(不要加热至沸腾),取出摇匀。
3、灌胶
将冷却到60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上。
4、待琼脂糖胶凝固后,在电泳槽内加入电泳缓冲液,然后拔出梳子。
5、加样
将DNA样品(DNA样品是细胞破碎之后用离心管离心沉淀获得的)与加样缓冲液按4:1混匀后,用微量移液器将混合液加到样品槽中,每槽加10-20μl,记录样品的点样次序和加样量。
6、电泳
安装好电极导线,点样孔一端接负极,另一端接正极,打开电源,调电压至3-5V/cm,电泳1-3hr,当溴酚蓝移到距凝胶前沿1-2cm时,停止电泳。
7、染色和观察
取出凝胶,放在含有溴化乙锭的染色液中染色30min,即可在254nm的紫外灯下观察,有橙红色荧光条带的位置,即为DNA条带,或在紫外灯下照相记录电泳图谱。溴化乙锭是致癌剂,操作时要小心,必须戴手套。
大家请赐教!

