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用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等,须经提取纯化才能作包被用。如HBsAg可以从携带者的血清中提取,一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取,蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中提取等(例如AFP从脐带血或胎肝中提取)。重组抗原是抗原基因在质粒体中表达的蛋白质抗原,多以大肠杆菌或酵母菌为质粒体。重组抗原的优点是除工程菌成份外,其他杂质少,而且无传染性,但纯化技术难度较大。以大肠杆菌为质粒体的重组抗原如不能充分除大肠杆菌成份,用于ELISA试剂盒,在反应中可出现假阳性,因不少受检者受大肠杆菌感染而在血清中存在抗大肠杆菌抗体。重组抗原的另一特点是能用基因工程制备某些无法从天然材料中分离的抗原物质。例如丙型肝炎病毒(HCV)尚不能培养成功,而且丙肝病人血清中HCV抗原含量极微。目前检测抗HCVELISA中所用包被抗原大多为根据HCV的基因克隆表达而制备的重组抗原。在传染病诊断中,不少重组抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中取得应用。合成多肽抗原是根据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一个抗原决定簇,纯度高,特异性也高,但由于分子量太小,往往难于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被一般需先使其与无关蛋白质如牛血清白蛋白质(BSA)等偶联,借助于偶联物与固相载体的吸附,间接地结合到固相载体表面。应用多肽抗原的另一注意点为他仅能检测与其相应的抗体。一种蛋白质抗原往往含有多个不同的能引起抗体产生的决定簇,因此在受检血清中的其他抗体就不能与该多肽抗原发生反应。另外,某些微生物发生变异时往往发生抗原结构变化,在这种情况下,用个别多肽抗原进行包被可引起其他抗体的漏检。 (二)ELISA试剂盒包被用抗体 包被固相载体的抗体应具有高亲和力和高特异性,可取材于抗血清或含单克隆抗体的腹水或培养液。如免疫用抗原中含有杂质(即便是极微量的),在抗血清中将出现杂抗体,必须除去(可用吸收法)后才能用于ELISA,以保证试验的特异性。抗血清不能直接用于包被,应先提取IgG,通常采用硫酸铵盐析和Sephadex凝胶过滤法。一般经硫酸铵盐析粗提的IgG已可用于包被,高度纯化的IgG性质不稳定。如需用高亲和力的抗体包被以提高试验的敏感性,则可采用亲和层析法以除去抗血清中含量较多的非特异性IgG。腹水中单抗的浓度较高,特异性亦较强,因此不需要作吸收和亲和层析处理,一般可将腹水作适当稀释后直接包被,必要时也可用纯化的IgG。应用单抗包被时应注意,一种单抗仅针对一种抗原决定簇,在某些情况下,用多种单抗混合包被,可取得更好的效果。
见到论坛上很多做蛋白纯化的小伙伴,经常在使用超滤技术的时候遇到各种相同的问题,反复的在版块上出现,根据自己的经验,我把此方面的内容整理一下,便于初学者以及遇到问题的小伙伴了解掌握。
如果大家有问题可以留言,咱们切磋交流,我没有将我在使用中的经验、教训一一罗列,更多的是将该技术相关的基础知识和背景进行了总结,因为我认为我们对任何一种技术的研究运用,都应当立足于其基础知识和背景来进行,而非“明知不可而为之”。
超滤(此处仅指用于蛋白样品处理的超滤技术)
定义:是以压力为推动力进行大分子和小分子分离的膜分离技术之一。
关键概念:截留分子量(MWCO),所有的膜分离技术均涉及的问题。其定义为:用已知分子量的球状物质进行测定。膜对被截留物质的截留率大于90%时,就用被截留物质的分子量表示膜的截留性能。以前参加研讨会的时候有老师称,一般大分子量90%截留,小分子量50%截留。与超滤有关的另一个概念是浓差极化,在膜分离过程中,大分子物质被膜所截留不断累积在膜表面上,使其在膜表面的浓度远高于其在主体溶液中的浓度,从而形成浓度差,并促使其反向主体溶液中扩散。一方面造成局部浓度过高,对蛋白本身的稳定性造成挑战,极易沉淀,另一方面对分离产生阻力,影响分离的成败和成本。
常见用途:去除盐类,浓缩样品
主要误区:经常有人认为或建议别人使用超滤技术进行两个不同大小分子量的蛋白分离,但几乎很少有人尝试成功过,即使成功了,也很难重复出来。仔细理解定义,我们可以看出超滤技术的局限性在哪里,关键词就在于:已知分子量的球状物质、截留率。这也是导致误区的所在。我们所拿到的标示10KD截留分子量的超滤装置,仅代表10KD球状蛋白可以很大概率的被截留在膜上面。定义中是进行的一个标准实验,实际使用中情况千差万别(我们的蛋白形状未必都是球状的,其他杂质存在干扰,膜及装置的差别等),所以不必太纠结这个MWCO的存在,参考而已。在使用时,一般会选择1/3目标蛋白分子量的超滤装置规格进行使用。以保证目标蛋白的浓缩。
常见超滤装置:
超滤是以压力为推动力的,常用的压力来源有使用惰性气体、离心力以及电驱动泵动力几种情况。我使用比较多的是下面的前两张图,左图是使用氮气罐进行正压超滤,可以进行搅拌,避免浓差极化,一般使用的压力为0.15-0.2MPa。过高的压力一方面超出装置的耐受,另一方面高压也容易引起蛋白质的失活变性。右图是不同规格的超滤管,搭配离心机进行使用,离心力一般几千g,不同厂家的有垂直的膜,也有水平的膜,我认为水平的效果稍好,使用这个装置的话,不可避免的损失比前者大(但其实每一种膜分离技术,损失都是不可避免的),我做过有时的损失会达到50%-70%,浓度越低损失越大。第三种是中空纤维浓缩,自动化程度可实现较高,处理样品的体积可以很大,可实现高倍浓缩,是其主要优势。
使用中常见注意事项:
超滤膜保存非常重要,不管使用哪一种装置,在使用后进行高盐+水清洗,以及低浓度乙醇保存,中空纤维的可以使用NaOH保存,尤其是前两种,膜一旦干了,就会导致孔径变化,或膜裂,无法继续使用;
不同蛋白最好不要混用超滤膜,非常容易引起交叉污染;
以上装置仅适用于澄清样品处理,浑浊样品会加剧膜孔径的堵塞和损坏;
使用过程中压力或离心力不要超出要求,以免损坏装饰;
一些超滤膜是分正反面的,即孔径分布呈梯度,也有一些超滤膜是不分正反面的,孔径均匀分布;
以上3种装置,我在使用中均遇到过蛋白沉淀的情况,因此蛋白质的稳定性问题需多考虑解决;
。。。。。。待补充
液体的一抗加50%甘油,-20度也不会冻结,可保存3-5年;
经常使用时取出一小份,4度可使用半年之久;
粉末状的二抗直接-20或-80度贮藏就行了。
其滤精度0.01~0.1微米属于二十世纪高新技术种利用压差膜离技术滤除水铁锈、泥沙、悬浮物、胶体、细菌、机物等害物质并能保留体益些矿物质元素
矿泉水、山泉水产工艺核部件超滤工艺水收率高达95%并且便实现冲洗与反冲洗易堵塞使用寿命相较
超滤净水器需要加电加压仅依靠自水压力进行滤流量使用本低廉较适合家庭饮用水全面净化未饮用水净化超滤技术主并结合其滤材料达较宽处理范围更全面消除水污染物质
钠滤(NF)
其滤精度介于超滤反渗透间脱盐率比反渗透低种需要加电、加压膜离技术水加收率较低般用于工业纯水制造
——广东震昊机电希望您帮助
看了下说明书,上面没有具体说。感觉捕获抗体和酶标抗体需要对HCP有不同的结合位点才能形成稳定的抗体-HCP-抗体复合物。不知道有没有战友熟悉,求解惑,谢谢!
2:反渗透净水器制造程几乎除水所杂质水本面目直接饮甘醇爽口体处面:(1)溶解度高与体细胞亲力强促进新陈代谢功效(2)能消除体消化系统油腻消除血管血脂降低胆固醇高血压、脉硬化、冠病患者处(3)煎服药能毫保留泡草药深藏固药份药能发挥药性服药饮用纯净水助于药物充溶解、吸收提高疗效(4)滋润皮肤消除皮肤泌物能保持皮肤细腻光泽利于美容便宜美容品(5)纯净水延缓乙醇吸收防止饮酒腹泻解酒作用(6)用纯净水冲茶能适调节鞣酸溶解使茶色明亮茶味香醇仅口没茶锈您更能体三茶七水意境(7)用纯净水煮汤做饭味道鲜美口(8)汽车水箱、加湿器、电熨斗等使用纯净水结垢延使用寿命(9)拿养鱼含氧高及含氯气鱼更(10)纯净水富氧水能化细胞及内脏增强免疫力抵抗力
由于超滤技术诸优点故用作:
(1)物质脱盐浓缩及物质溶剂系统交换平衡
(2)物质级离
(3)化制剂或其制剂热原处理
超滤技术已制药工业、食品工业、电工业及环境保护诸领域缺少力工具 超滤技术关键膜膜各种同类型规格根据工作需要选用早期膜各向同性均匀膜即用微孔薄膜其孔径通0.05mm 0.025mm近几产些各向异性称超滤膜其种各向异性扩散膜由层非薄、具定孔径孔皮肤层(厚约0.1mm~1.0mm)层相厚(约1mm)更易通渗、作支撑用海绵层组皮肤层决定膜选择性海绵层增加机械强度由于皮肤层非薄高效、通透性、流量且易溶质阻塞导致流速降用膜般由乙酸纤维或硝酸纤维或二者混合物制近适应制药食品工业灭菌需要发展非纤维型各向膜例聚砜膜、聚砜酰胺膜聚丙烯腈膜等种膜pH 1~14都稳定且能90℃工作超滤膜通比较稳定若使用恰能连续用1~2暂用浸1%甲醛溶液或0.2%NaN3保存超滤膜基本性能指标主要:水通量[cm3/(cm2?h)];截留率(百率%表示);化物理稳定性(包括机械强度)等
超滤装置般由若干超滤组件构通板框式、管式、螺旋卷式空纤维式四种主要类型由于超滤处理液体数含水溶性物、机胶体、糖及微物等些物质极易粘附沉积于膜表面造严重浓差极化堵塞超滤关键问题要克服浓差极化通加液体流量加强湍流加强搅拌
物制品应用超滤高经济效益例供静脉注射25%胎盘血白蛋白(即胎白)通用硫酸铵盐析、透析脱盐、真空浓缩等工艺制备该工艺流程硫酸铵耗量能源消耗操作间透析程易产污染改用超滤工艺平均收率达97.18%;吸附损失1.69%;透损失1.23%;截留率98.77%幅度提高白蛋白产量质量每节省硫酸铵6.2吨自水16000吨目前外产超滤膜超滤装置名厂家美Milipore公司德Sartorius公司内知名厂家立升
超滤废水处理应用
(1)原性染料废水处理;
(2)电泳涂漆废水处理;
(3)含乳化油废水处理;
(4)污水处理 种孔径规格致额定孔径范围0.001-0.02微米微孔滤膜采用超滤膜压力差推力膜
滤超滤膜滤超滤膜由醋酯纤维或与其性能类似高材料制适于处理溶液溶质离增浓用于其离技术难完胶状悬浮液离其应用领域断扩压力差推力膜滤区超滤膜滤、微孔膜滤逆渗透膜滤三类区根据膜层所能截留粒尺寸或量膜额定孔径范围作区标准则微孔膜(MF)额定孔径范围0.02~10μm;超滤膜(UF)0.001~0.02μm;逆渗透膜(RO)0.0001~0.001μm由知超滤膜适于处理溶液溶质离增浓或采用其离技术所难完胶状悬浮液离超滤膜制膜技术即获预期尺寸窄布微孔技术极其重要孔控制素较根据制膜溶液种类浓度、蒸发及凝聚条件等同同孔径及孔径布超滤膜超滤膜般高离膜用作超滤膜高材料主要纤维素衍物、聚砜、聚丙烯腈、聚酰胺及聚碳酸酯等超滤膜做平面膜、卷式膜、管式膜或空纤维膜等形式广泛用于医药工业、食品工业、环境工程等我都知道筛用筛东西能细物体放行较截留您听说能筛筛超膜--种超级筛能尺寸等筛底超滤膜呢 超滤膜种具超级筛离功能孔膜孔径几纳米几十纳米说根发丝1‰膜侧施适压力能筛于孔径溶质离量于500道尔顿、粒径于2~20纳米颗粒超滤膜结构称非称前者各向同性没皮层所向孔隙都属于深层滤;者具较致密表层指状结构主底层表层厚度0.1微米或更并具排列序微孔底层厚度200~250微米属于表层滤工业使用超滤膜般非称膜超滤膜膜材料主要纤维素及其衍物、聚碳酸酯、聚氯乙烯、聚偏氟乙烯、聚砜、聚丙烯腈、聚酰胺、聚砜酰胺、磺化聚砜、交链聚乙烯醇、改性丙烯酸聚合物等等
超滤厨饮用两用机:①PP棉滤芯、②性碳、③纳米膜表超滤膜滤芯、④复合滤芯五级滤设备加置性炭六级加矿化滤芯立市场见直饮水机更级加更针性滤芯 (1)增压泵超滤膜力差推力进行滤原水水压能满足滤需求系统需要增加泵加压实现超滤膜离作用由于超滤膜工作压力较低般于O·7MPa故系统设计般选用离泵选择离泵主要依据扬程、流量、泵体材质其泵体积、外观造型价格等
①扬程流量选择根据超滤系统设计所需要进水工作压力跨膜压差通水流量选择泵扬程流量般选择水泵扬程流量应等于或略于设计供水量工作压力满足超滤系统运行
②泵体材质选择根据原水水质情况选择合适泵体材质减少投资本其材质能与原水产任何反应能溶解现象原水pH值6.5~8.5选用铸铁泵体;原水海水应选耐海水腐蚀塑料泵体;医药食品工业水处理却般选择使用锈钢泵体
化清洗泵般选择耐化药剂泵体
(2)减压阀 原水水压于系统设计水压要原水进行减压般采用减静压减压阀实现减压阀减压精度视超滤系统定另根据原水水质选择适合材质减压阀般选材质铜、锈钢、铁、塑胶
(3)物理清洗化清洗系统 清洗系统主要由配药箱、净水箱、循环泵组采用气水混合清洗包括空压机般物理清洗等压冲洗反冲洗等压冲洗关闭产水阀全浓水阀使原水快于工作状态流速冲刷膜表面除污垢反冲洗关闭原水阀采用循环泵净水箱水产水口打入膜组件使净水按滤反向透膜冲刷掉膜表面污染物并使其浓水口排反冲洗马进行等压冲洗能更效截留污染物排加强清洗效顺冲采用气水混合液进行冲洗
化清洗系统用循环泵配药箱内清洗液送入超滤系统进行循环清洗浸泡靠化药品作用除膜表面污垢恢复膜产水能力维持设计流量要求
(4)消毒灭菌系统超滤消毒灭菌系统所用设备操作程序与化清洗系统相同仅需要清洗液换灭菌液即般使用灭菌剂氯酸钠氧化氢选择灭菌剂要考虑剂膜材质灭菌剂浓度例Ps材质膜能采用含阴离表面性剂灭菌剂否则膜造逆通量损失
(5)自化计量、监控仪表
①计量水流量采用流量表计量流量计转流量计、浮流量计、电磁流量计、挣针式流量计等超滤系统采用玻璃浮(转)流量计主要显示直观价格低台超滤系统少需要设置两流量计便观察产水流量计浓水流量计或原水进水流量计 流量计规格选择根据系统流量定浮流量计选择通选用量程1.5~2倍实际测量流量
②监控系统及仪表超滤系统运行必须严格按照设计参数进行操作需要系统相关参数进行监控其主要监控项目水质、流量、压力手操作采用仪表编程控制器系统进行自控制
水质监控采用水质监测仪进行水压监控采用压力关压力表进行流量控制采用电流量计进行监测并监测信号反馈PLC控制泵阀门及清洗系统实现系统自化
压力超滤系统重要参数故压力表选择要注意其精度耐用性压力表量程选择使用压力能使指针处于刻度盘1/2~2/3位置宜并要考虑水锤压力表冲击图" class="ikqb_img_alink">

