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想请教一个问题－临床的肿瘤细胞表面抗原是人的肿瘤细胞，而试验研究中用的是动物，两者间的抗原是否存在差异？比如，人的肺癌与小鼠肺癌模型的抗原区别在哪？谢谢！

IgM-先锋抗体
IgM占血清免疫球蛋白总量的6%，主要存在血管内，是机体受抗原刺激后最先产生的抗体，起“先锋免疫”作用，具有很强的细胞毒活性和细胞溶解活性，由于IgM主要存在在血管内，是抗血管内感染的第一线抗体，对防止败血症的发生有重要作用。

IgG-主力抗体
IgG是初级免疫应答中最持久、最重要的抗体，它仅以单体形式存在。大多是抗菌性、抗毒性和抗病毒抗体属于IgG，它在抗感染中起到主力军作用，它能够促进单核巨噬细胞的吞噬作用（调理作用），中和细菌毒素的毒性（中和毒素）和病毒抗原结合使病毒失去感染宿主细胞的能力（中和病毒）。

IgA-局部抗体
按其免疫功能又分为血清型及分泌型两种。血清型IgA存在于血清中，其含量占总IgA的85%左右。血清型IgA虽有IgG和IgM的某些功能，但在血清中并不显示重要的免疫功能。分泌型IgA存在于分泌液中，如唾液、泪液、初乳、鼻和支气管分泌液、胃肠液、尿液、汗液等。分泌型IgA是机体粘膜局部抗感染免疫的主要抗体。故又称粘膜局部抗体。

文献资料 - 医学书籍 - 医学免疫学
第四节 抗原的分类

一、天然抗原

根据抗原性物质与机体的亲缘关系可分为“自己”（self）与“非已”（non-self）抗原。即与机体种系发生关系愈远，其遗传性差异越大，其免疫原性也愈强。

（一）“自己”抗原

正常自身组织成分及体液组分处于免疫耐受状态，不能激发免疫应答，但如打破自身耐受，则可引起自身免疫应答；另一些自身组织成分虽具有免疫原性，但在正常情况下，由于组织屏障，不能进入血流，因此不能与免疫细胞接触，也不能激发免疫应答，称此种抗原为隐蔽性身抗原，如脑组织、眼晶状体蛋白及精子等。一旦因外伤或手术等原因，可使此种抗原进入血流时，则可引起自身免疫应答。受病原微生物的感染或应用某些化学药物，可与自身组织蛋白结合，改变其分子结构，形成修饰的自身抗原，也能引起免疫应答。

（二）非已抗原

来自异种动物的抗原物质称为异种抗原。如来自外部侵入人体的各种病原微生物及其产物的外毒素，注射的异种动物免疫血清，以及吸入和食进的异种蛋白，例如花粉和食物均属异种抗原。由于与人种属关系远为强免疫原。此外癌细胞可在人体内产生特异性癌抗原，但对其免疫原性迄今尚未能证实。

在同种动物不同个体间也存在各种组织成分抗原性的差异，称此种抗原为同种异型抗原。这种抗原受遗传支配，它可在遗传性不同的另一些个体内引起免疫应答，称之为异型免疫应答。如人血型抗原不同输血时可引起输血反应，组织相容性抗原或移植抗原型不同可引起移植排斥反应。此外，免疫球蛋白分子上存在的Gm、Am、Km标记均属异型抗原，可用以鉴别IgG、IgA及K轻链的异型。

在不同种属动物组织间也可发现有共同抗原，称这种抗原为异嗜性抗原。Forssman首先发现这种抗原，故亦称之为Forssman抗原。即这种抗原无种属特异性，它可共同存于人、不同种动物与微生物之间，因此它与疾病的发病学和诊断有一定意义。

目前已发现多种异嗜性抗原，如大肠杆轿O86含有人的B血型物质，肺炎球菌14型含有人A血型物质，它们与人血型抗体的产生有关。有些病原微生物与人体某些组织具有共同抗原成分，是引起免疫性疾病的原因之一。如溶血性链球菌一些抗原可与肾小球基底及心肌组织有有共同抗原成分，它们可能与急性肾小球肾炎和风湿病的发病有关。又如大肠杆菌O14型脂多糖与人结肠粘膜有共同抗原，可能与溃疡性结肠炎的发病有关。

某些疾病的诊断也可借助于对异嗜性抗原的检测。例如引起原发性非典型肺炎的病原支原体与MG株链球菌有共同抗原，可藉其血清中抗体对此种链球菌的凝集反应进行诊断，引起斑疹伤寒的立克次体与变形杆菌一些菌株间有共同抗原，可藉其血清中抗休对变型杆菌的的凝集反应进行诊断，称之为Weil-Felix反应。此外传染性单核细胞增多症患者血清中，可出现凝集羊红细胞的异嗜性抗体，可用羊红细胞凝集反应进行诊断。

二、人工抗原

用化学合成法或基因重组法制备含有已知化学结构决定簇的抗原，称之为人工抗原。它可包括人工结合抗原、人工合成抗原和基因重组抗原。无论对免疫学理论研究和分子疫苗的制备都具有重要意义。

（一）人工结合抗原

将无免疫原性的简单化学基团与蛋白质载体偶联，或将无免疫原性的有机分子如二硝基苯（DNP）或三硝基苯（TNP）与蛋白质载体结合，形成载体-半抗原结合物，均属人工结合抗原。应用此种抗原证明了抗原与抗体特异结合的化学基础，以及在抗体生成过程中T与B细胞的协同作用。

（二）人工合成抗原

用化学方法将活化氨基酸聚合，使之成为合成多肽，只由一种氨基酸形成的聚合体称为同聚多肽，如由左旋赖氨酸形成的共同聚多肽（PLL）。由二种或二种以上氨基酸形成的聚合多肽称为共聚多肽，如由酪氨酸、谷氨酸与多聚丙氨酸和赖氨酸组成的聚合成多肽（T、G）-AL。应用这种人工合成多肽可研究氨基酸种类、序列与蛋白质抗原性及免疫原性的关系，也可研究机体遗传性与免疫性的关系。
对天然蛋白质抗原性的研究证明，任何一个氨基酸片段，只要具有合适的构型，都有抗原性，甚至一小段合成的小肽与合适的载体相联接，也能诱导产生抗体，并能与其天然分子构型相结合，这就提示，可根据天然蛋白质抗原的免疫原性片段进行氨基酸序列分析，或由其编码DNA推导的氨基酸序列，进行构建人工合成多肽疫苗。
（三）基因工程抗原

近年来由于分子生物学技术的进步，已有可能将编码免疫原性氨基酸序列的基因克隆化并与适当载体（如细菌粒或病毒）DNA分子相结合，然后引入受体细胞中（如原核细胞的大肠杆菌或真核细胞酵母菌及哺乳类动物细胞）使之表达，即能获得免疫原性之融合蛋白，经纯化后可做为疫苗，此即基因工程疫苗。

应用分子生物学技术制备基因重组疫苗的另一进展，是将目的抗原决定簇的DNA序列插入另一种比较安全的活病素基因组中（如牛痘苗），制备所谓重组感染载体多价疫苗。

随着70年代分子病毒学的发展，特别是对病毒基因的结构、功能与复制方面知识的积累，为迅速研制病毒亚单位疫苗、合成多肽苗以及基因工程疫苗奠定了基础。

一些重要病毒如乙型肝炎病毒、脊髓灰质炎病毒、疱疹病毒以及流感病毒等的蛋白质多肽，都已利用基因工程进行了成功的表达，有的已进入临床试验阶段。我国也报导了正在进行研制基因工程乙型肝炎病毒疫苗和在牛痘苗表达系统中研制乙肝病毒的重组感染载体的多价疫苗。

三、胸腺依赖抗原与胸腺非依赖抗原

实验证明，由抗原激发的免疫应答是多细胞相互作用的结果，即由抗原呈递细胞、T细胞和B细胞共同参与予完成的。大多数抗原激发的体液免疫应答，必须有TH细胞参予才能完成，称这种抗原为胸腺依赖抗原（thymus-dependent antigen,TD Ag）。但也有少数抗原物质，不须TH细胞参予，可单独刺激B细胞产生抗体，称这种抗原为胸腺非依赖抗原（thymus independent antigen,TIAg）。这二种抗原的区别主要在于其抗原决定簇的结构不同所致。TD抗原在其分子结构上，既具有载体功能的决定簇，也具有抗原性决定簇。且在其分子表面出现多种不同抗原决定簇，但缺乏重复出现的同一决定簇，TD抗原主要是大分子蛋白质。而TI抗原多数为大分子多聚体，带有重复出现的同一抗原决定簇，且降解缓慢，故不须TH参加即能直接刺激B细胞，TI抗原主要是多糖类物质（图10-5、表10-5、6）。

图10-5 TD与T1抗原种类

表10-5 TD与TI抗原种类

TD TI
人丙种球蛋白

牛血清清蛋白

卵白蛋白

类毒素
羊红细胞

组织相容性抗原等
肺炎球菌荚膜多糖

脂多糖

聚合鞭毛

DNP-聚蔗糖

聚乙烯基吡络烷酮（PVP）

表10-6 TD抗原与TI抗原的特性

特性 TD抗原 TI抗原

TⅠ-1 TⅠ-2

化学特性 蛋白质 脂多糖 多糖
抗体应答 + +
无胸腺鼠 － + －/少
无T细胞培养物 －
抗体应答的特点 －
类别转换 + － －
亲和性成熟 + － －
记忆B细胞 + － －
多克隆B细胞活化剂作用 － + －
诱导DTH能力 + － －

四、超抗原

（一）超抗原的概念

超抗原（supper antigen,Sag）是一类由细菌外毒素和逆转录病毒蛋白构成的抗原性物质。它们能与多数T细胞结合并为T细胞活化提供信号。而上述的普通抗原只能与少数对应T细胞结合并使之活化。因此称这种能与多数T细胞结合的抗原为超抗原。

（二）超抗原与T细胞结合的特征

超抗原主要与CD4+T细胞结合，而和普通抗原肽与T细胞的结合有很大差异。超抗原既能与APC细胞上MHCⅡ类分子结合，也能与TCR Vβ链结合是其作用特点。

超抗原无需经APC加工可直接与MHCⅡ类分子非多态区外侧结合，而不是与肽结合沟结合，故无MHc 限制性。

在T细胞方面超抗原只与TCR Vβ片段结合，而与D和J区无关，也与TCRα链无关。任一已知超抗原能与其特殊殊的Vβ片段结合，所以一种超抗原可活化多数T细胞，约占T细胞库的1/20～1/5，这远远超过普通抗原活化T细胞的数量（表10-7）。

表10-7 超抗原的作用特性

普通抗原 超抗原
T细胞一次应答 － +
T细胞反应频率 1/106～1/104 1/20～1/5
MHCⅡ类分子 肽结合沟 非多态区（α-螺旋）
结合部位 外侧
MHC限制性 + －
APC存在 +

（三）超抗原的种类

1．内源性超抗原（病毒性） 70年代初Festenstein发现在MHC相同，而MHC以外基因区不同的纯系鼠间进行淋巴细胞混合培养，可引起很强的T细胞增殖反应，将刺激这种增殖反应的抗原称为次要淋巴细胞刺激抗原（minor lymph'ocyte stimulating antigen,Mlsag）。

近年来证明这种内源性MLs抗原是小鼠乳腺肿瘤病毒（mouse mamary umor virus,MMTV）产生的蛋白。MMTV是一种逆转录病毒，以前病毒（provirus）形式整合于小鼠细胞DNA中。这种小鼠可终生制造这种病毒蛋白，因之可视为一种自身超抗原。这种小鼠内源性MLs抗原的化学性质现已证明是一种糖蛋白。

由于MLs抗原的来源已经清楚，故目前称这种小鼠的内源性超抗原为病毒性超抗原。人类是否也有这种病毒性超抗原，目前尚不能肯定，但有人提出人类免疫缺损病毒（HIV）也是逆转录病毒，有可能是人类的病毒性超抗原。

2．外源性超抗原（细菌性）外源性超抗原是一类细菌性外毒素组成，主要由革兰氏阳性细菌产生。如金黄色葡萄球菌产生的肠毒素（staphylococcus enterotoxin,SE）以及链球菌产生的致热外毒素等。

（四）超抗原的生物学意义

1．超抗原与T细胞的耐受诱导 实验证明在胸腺内分化发育中的T细胞如与超抗原结合，可诱发程序性细胞死亡，导致克隆排除。用抗Vβ单克隆抗体在周围血中检测不出带有特殊Vβ受体的T细胞，为T细胞耐受诱导机制的研究提供了有力的实验模式。

2．超抗原与疾病葡萄球菌感染所产生的外毒素主要是可溶性蛋白分子，近年来的研究证明葡萄球菌外毒素对靶细胞并无直接毒性作用，而是通过活化多数T细胞所释放的大量细胞因子产生的生物学效应引起的毒性休克综合征等临床征状。

一些疾病，例如原因不明的川畸病，风湿性关节等疾病，发现与某些Vβ阳性T细胞的增殖相关。周围组织中存在的自身反应性T细胞克隆可为外源性超抗原激活而引发自身免疫病。也有学者认为HIV引发的人艾滋病，其发病学与其超抗原相关。

A.异种抗原B.同种异体抗原C.异嗜性抗原D.半抗原E.自身抗原

我想请教一个问题，还望有人能指点一下。
我在准备制备壬基酚（nonylphenol,NP，分子量220.35)的多克隆抗体。现在合成人工抗原NP-BSA，合成过程用到的试剂有：NP、二甲亚砜、BSA、碳酸盐缓冲液、甲醛。现在化学合成已完成，也用PBS进行了透析。我分析透析液中应有NP—BSA，但还可能有BSA之间的交联产物以及甲醛与BSA的交联产物等，且各自能有多大量不能弄清，我想问现在可以用这种透析液对家兔进行免疫了吗？如果可以的话，免疫量每次应为多少？

大家好！我要用10个氨基酸的多肽偶联到血蓝蛋白作为抗原，对BABL/c小鼠进行免疫制备单抗。请有经验的老师介绍下，每次每只小鼠应选择多大量的多肽，或者偶联后的量对小鼠进行免疫比较好。因为没有经验，所以请大家热心指教！多谢多谢

免疫剂量根据被免疫的动物、免疫部位以及抗原的本身的特性相差很远。如果用兔制备多抗，首次免疫（皮下）一般在200-1000ug之间，对于大鼠，首次免疫（皮下）为100-500ug，对于小鼠， 首次免疫（皮下）一般在10-100ug之间，合成免疫原为2mg，半抗原为20～200ug，加强免疫一般为首次免疫剂量的20%-50%。尾静脉或脾内方式加强则可减至几微克至十微克。对于体型比较大的动物可酌量增加 。文献貌似很少有专门研究免疫剂量的，一般都是研究单抗什么的顺带提及。

我就是生物专业的!
看我的回答:
抗原(antigen, Ag)是一类能诱导免疫系统发生免疫应答，并能与免疫应答的产物(抗体或效应细胞)发生特异性结合的物质。抗原具有免疫原性和反应原性两种性质。

免疫原性是指抗原刺激机体后，机体免疫系统能形成抗体或致敏T淋巴细胞的特异性免疫反应。
反应原性是指产生的抗体或致敏T淋巴细胞能与抗原进行特异性结合的免疫反应。

既具免疫原性又具反应原性的抗原称免疫原。某种物质之所以能成为一个良好的免疫原，是因为它有特异的化学结构，这就是抗原决定簇。抗原决定簇可以与相应的淋巴细胞表面的受体蛋白结合引起免疫应答。一个抗原决定簇只能激活一种淋巴细胞(对于B细胞)只刺激产生一种类型抗体。一个抗原可以有一个或多个抗原决定簇。抗原功能性决定簇的总数称抗原结合价。抗原决定簇少，抗体与抗原结合就少，往往就见不到反应。天然抗原或复杂的半抗原决定簇往往多达几十个，因此可以与很多抗体分子交互结合。

有些分子本身没有免疫原性，不能引起免疫反应，但是如果把它们和某些载体分子，如蛋白质分子结合起来就有了免疫原性，就能使动物对这一复合分子产生特异的抗体。这种本身无免疫原性，但有反应原性，一旦把它与载体结合就有了免疫原性的物质，就称半抗原或不完全抗原。如寡糖，类脂和一些简单的化学物质等。吗啡就是一种半抗原，把它与蛋白分子结合起来，就可以使动物体产生相应抗体，此抗体可作为检测是否吸毒的试剂。

抗原相对分子量一般都在10X103以上，而在4X103以下者一般无免疫原性。在一定相对分子量范围内，分子量大者免疫原性强，这是因为：
1、相对分子量大，表面抗原决定簇就多，而淋巴细胞要求一定数量抗原决定簇刺激才能活化；
2、大分子化学结构稳定，在水中呈胶体，不易被机体破坏或排除，这样在体内存留时间就长，有利于持续刺激淋巴细胞。核酸本身免疫原性很低，但只要有5个核苷酸与蛋白质分子载体连接，就能刺激机体产生抗体。

抗原可分外源性抗原和内源性抗原两类，前者如细菌、病毒、花粉、各种毒素以及小型动植物；后者主要为机体从未接触过的物质或构象发生改变的自身成分，如变性的IgG重链、晶状体物质、精子、脑组织等。

抗体是人或动物受抗原物质（如细菌或其毒素、病毒等）刺激后，由浆细胞合成和分泌的一种特异性蛋白质。抗体是人体抵抗感染的一种重要武器。19世纪末，德国科学家Behring发明了用含白喉抗毒素的动物血清注射给白喉患儿，使其治愈。此后医学家们用含有不同抗体的动物血清或人血清来治疗或预防多种传染病。由于Behring开创了抗体治疗传染病的方法，对防治传染病作出了卓越贡献，本世纪初荣获诺贝尔医学奖。但传统的人工生产抗体的方法是将抗原物质（如细菌或其毒素等）注射给动物（如马、羊等），使动物产生针对该抗原物质的抗体。人们抽取免疫动物的血液，分离出含抗体的血清。这种体内生产抗体的传统方法有许多缺点。例如所获得的抗体不纯，不能连续生产，动物饲养与管理工作繁重等，故长期以来医学家们一直在探索在试管内（即体外）生产抗体的方法， 1976年英国剑桥大学两位科学家Milstein和Koh1er将小鼠骨髓瘤细胞与免疫小鼠的脾细胞杂交。小鼠骨髓瘤细胞能在体外无限增殖传代并能分泌无抗体活性的球蛋白；免疫小鼠脾细胞能产生针对某种抗原的抗体，但不能在体外无限增殖。将两者融合成一种杂交瘤细胞，后者继承了两个亲代细胞的特点，既可在体外无限增殖，又可产生针对某种抗原的抗休。一个杂交瘤细胞在体外不断增殖所形成的细胞集团，被称之为克隆。在同一克隆中所有的细胞产生相同的抗体，此抗体称之为单克隆抗体（简称McAb）。它是单一特异性的高纯度的抗体，可在体外连续大量生产。McAb在临床医学及基础医学领域发挥了巨大作用，给某些难治疾病的诊断、防治带来了新的希望。如针对某种肿瘤细胞的McAb与毒素、抗癌药物或放射性物质结合成复合物（医学上称为生物导弹），将此复合物注射到病人体内，可定向杀伤McAb所针对的肿瘤细胞，而对其它正常细胞则无作用，这是任何其它抗癌治疗方法办不到的。因此，单克隆抗体技术被誉为现代生物科学的一项革命性突破，是当今四大生物工程技术之一。由于Milstein和kohler的杰出贡献，1984年他俩共同获取了诺贝尔医学奖。

是的

我查了一些资料，说可以蛋白电泳后直接切下蛋白条带，加佐剂乳化后免疫动物。可是文献没有详细说明，是否拿纯化后的蛋白电泳跑胶，还是可以表达的产物（我用的是大肠杆菌的表达系统，非融合蛋白）直接跑胶？

请教：针对同一抗原的同一抗原决定簇的不同动物抗体的独特位-抗原结合部位是否相同。
谢谢！

用抗原免疫动物制备抗血清时，为什么要对动物多次免疫接种
　　抗原注射进入动物体内后，因为不是一个单独的分子，会随血液循环输送到各处，也就会接触不同的免疫细胞。有些还会被抗原提呈细胞再加工。所以最后的结果是很多个免疫细胞都会接触到。一个抗原分子也有很多抗原表位。每个表位理论上都有能力激活一个B细胞转化为浆细胞。所以体内最后针对该抗原的必定是多克隆
　　由于动物个体差异的存在,同一抗原免疫同一种系不同个体的动物,产生的抗体的效价有很大的差异.与动物的年龄和营养状况密切相关.免疫用的动物最好选择适龄的健康雄性动物,雌性动物特别是妊娠动物用于制备免疫抗体则非常不合适,有时甚至不产生抗体.
　　先饲养观察7天其实就是等于隔离检疫,观察一下兔子的身体状况和是否带有其他传染病,淘汰体质多病的个体,防止在免疫过程中死亡或免疫应答不灵敏而不产生抗体.