抗甲状腺过氧化酶抗体的临床意义
| 实验方法原理 | 当所希望制备的抗体不能与葡萄球菌蛋白A有效地结合时（如IgM和一些IgG1抗体），可以用亲和层析柱来进行制备，柱子装填的介质是偶联上蛋白抗原或者抗鼠Ig的CNBr活化葡聚糖。这种抗原-葡聚糖将用于分离特异性的抗体，而抗鼠Ig-葡聚糖用于分离所有的鼠免疫球蛋白。 | ||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 腹水（单克隆抗体） 试剂、试剂盒 | CNBr活化葡聚糖4B(AmershamPharmac1aB1otech)1mmolLHCl偶联缓冲液蛋白质抗原或抗鼠Ig的抗体（可购买获得）1molL乙醇胺pH8.0的PBS洗涤缓冲液60mL或者150mL的玻璃砂芯漏斗中等孔径。 实验步骤 | 1)将3.3gCNBr活化葡聚糖4B溶胀于1mmol/LHCl中（可得10mL溶胀的凝胶），然后转移至玻璃砂芯漏斗中，并用：（a)200-500mL的1mmol/LHCl；(b)200-500mL偶联缓冲液。依次洗涤>30min。 2)将葡聚糖凝胶转移至50mL锥形塑料离心管中，加50-100mg的配体（2-5mg/mL),混匀后置摇动平台4℃过夜。250g离心10min,弃上清。 3)加偶联缓冲液至满管，离心，弃上清。 4)加20-40mL1mol/LpH8.0的乙醇胺，置摇动平台4℃4-5h,离心，弃上清。 5)在管中依次加满PBS和洗涤缓冲液洗涤，每次洗后离心。 6)将葡聚糖凝胶转移到一个2.5cm的玻璃柱中，用100mL的PBS平衡。 7)腹水液稀释于3倍体积的PBS后上柱，流速为1-5mL/min，在室温下操作。 用30mL的PBS从柱子上洗去未结合的蛋白质。 8)用甘氨酸•Cl缓冲液洗脱结合蛋白质，分析、浓缩 注意事项 | 其他 | |
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发布于 ： 2021-09-08
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